生物化學(xué)：核酸結(jié)構(gòu)與功能

1、目目 錄錄 核酸的結(jié)構(gòu)和功能核酸的結(jié)構(gòu)和功能 目目 錄錄 核核 酸酸(nucleic acid) 是以核苷酸為基本組成單位的生物大是以核苷酸為基本組成單位的生物大 分子，攜帶和傳遞遺傳信息。分子，攜帶和傳遞遺傳信息。 目目 錄錄 一、核酸的發(fā)現(xiàn)和研究工作進(jìn)展一、核酸的發(fā)現(xiàn)和研究工作進(jìn)展 1868年年 Fridrich Miescher從膿細(xì)胞中提取從膿細(xì)胞中提取“核素核素” 1944年年 Avery等人等人證實(shí)證實(shí)DNA是遺傳物質(zhì)是遺傳物質(zhì) 1953年年 Watson和和Crick發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)的雙螺旋結(jié)構(gòu) 1968年年 Nirenberg發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)遺傳密碼遺傳密碼 1975年年 T

2、emin和和Baltimore發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶 1981年年 Gilbert和和Sanger建建立立DNA 測(cè)序方法測(cè)序方法 1985年年 Mullis發(fā)明發(fā)明PCR 技術(shù)技術(shù) 1990年年 美國(guó)啟動(dòng)美國(guó)啟動(dòng)人類基因組計(jì)劃人類基因組計(jì)劃(HGP) 1994年年 中國(guó)人類基因組計(jì)劃啟動(dòng)中國(guó)人類基因組計(jì)劃啟動(dòng) 2001年年 美、英等國(guó)美、英等國(guó)完成人類基因組計(jì)劃基本框架完成人類基因組計(jì)劃基本框架 目目 錄錄 二、核酸的分類及分布二、核酸的分類及分布 90% 90%以上分布于細(xì)胞核，其余分布于以上分布于細(xì)胞核，其余分布于 核外核外如線粒體，葉綠體，質(zhì)粒等。如線粒體，葉綠體，質(zhì)粒等。 分布于胞

3、核、胞液。分布于胞核、胞液。 (deoxyribonucleic acid, DNA) (ribonucleic acid, RNA) 脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸 核糖核酸核糖核酸 攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè)攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè) 體的基因型體的基因型(genotype)。 參與細(xì)胞內(nèi)參與細(xì)胞內(nèi)DNA遺傳信息的表遺傳信息的表 達(dá)。某些病毒達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺也可作為遺 傳信息的載體。傳信息的載體。 目目 錄錄 第一節(jié)第一節(jié) 核酸的化學(xué)組成及其一級(jí)結(jié)構(gòu)核酸的化學(xué)組成及其一級(jí)結(jié)構(gòu) The Chemical Component and Primary Structure of Nuclei

4、c Acid 目目 錄錄 核酸的化學(xué)組成核酸的化學(xué)組成 1. 元素組成元素組成 C、H、O、N、P（910%） 2. 分子組成分子組成 堿基堿基(base)：嘌呤堿，嘧啶堿：嘌呤堿，嘧啶堿 戊糖戊糖(ribose)：核糖，脫氧核糖：核糖，脫氧核糖 磷酸磷酸(phosphate) 目目 錄錄 嘌呤嘌呤(purine) N N NH N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 N N NH N NH2 腺嘌呤腺嘌呤(adenine, A) N NH NH N NH2 O 鳥嘌呤鳥嘌呤(guanine, G) 堿堿 基基 目目 錄錄 N NH 1 3 2 4 5 6 嘧啶嘧啶(pyrimidine) 胞

5、嘧啶胞嘧啶(cytosine, C) N NH NH2 O 尿嘧啶尿嘧啶(uracil, U) NH NH O O 胸腺嘧啶胸腺嘧啶(thymine, T) NH NH O O CH3 目目 錄錄 戊戊 糖糖 （構(gòu)成（構(gòu)成RNA） 1 2 3 4 5 OH O CH2OH OHOH 核糖核糖(ribose) （構(gòu)成（構(gòu)成DNA） OH O CH2OH OH 脫氧核糖脫氧核糖(deoxyribose) 目目 錄錄 核苷：核苷：AR, GR, UR, CR 脫氧核苷：脫氧核苷：dAR, dGR, dTR, dCR 一、核苷酸的結(jié)構(gòu)一、核苷酸的結(jié)構(gòu) 1. 核苷核苷(ribonucleoside)的形

6、成的形成 堿基和核糖（脫氧核糖）通過(guò)堿基和核糖（脫氧核糖）通過(guò)糖糖 苷鍵苷鍵連接形成核苷（脫氧核苷）。連接形成核苷（脫氧核苷）。 OH O CH2 OHOH N N NH2 O 1 1 目目 錄錄 P O O OH OH O CH2 OHOH N N NH2 O OH O CH2 OHOH N N NH2 O 核苷酸：核苷酸： AMP, GMP, UMP, CMP 脫氧核苷酸：脫氧核苷酸： dAMP, dGMP, dTMP, dCMP 2. 核苷酸核苷酸(ribonucleotide)的結(jié)構(gòu)與命名的結(jié)構(gòu)與命名 核苷（脫氧核苷）和磷酸以核苷（脫氧核苷）和磷酸以磷酸酯鍵磷酸酯鍵 連接形成核苷酸（脫

7、氧核苷酸）。連接形成核苷酸（脫氧核苷酸）。 l含核苷酸的生物活性物質(zhì)：含核苷酸的生物活性物質(zhì)： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有等都含有 AMP l 多磷酸核苷酸：多磷酸核苷酸：NMP，NDP，NTP l 環(huán)化核苷酸環(huán)化核苷酸: : cAMP，cGMP N O CH2O OHOH N N N NH2 P O OH OHN O CH2O OHOH N N N NH2 P O OH OP O OH OH N O CH2O OHOH N N N NH2 P O OH OP O OH OP O OH OH N O CH2O OHO N N N NH2 PO OHNADP+ NAD+

8、 目目 錄錄 5 端端 3 端端 3. 3. 核苷酸的連接核苷酸的連接 核苷酸之間以核苷酸之間以 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵連接形連接形 成多核苷酸鏈，即成多核苷酸鏈，即 核酸。核酸。 C G A 目目 錄錄 二、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)二、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu) 定義定義 核酸中核苷酸的排核酸中核苷酸的排 列順序。列順序。 由于核苷酸間的差由于核苷酸間的差 異主要是堿基不同，所異主要是堿基不同，所 以也稱為以也稱為堿基序列堿基序列。 55端端 3端端 C G A A G P5 P T P G P C P T P OH 3 書寫方法書寫方法 5 pApCpTpGpCpT-OH 3 5 A C T G C T 3 目目

9、 錄錄 目目 錄錄 第二節(jié)第二節(jié) DNA的空間結(jié)構(gòu)與功能的空間結(jié)構(gòu)與功能 Dimensional Structure and Function of DNA 目目 錄錄 DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)的二級(jí)結(jié)構(gòu)-雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu) DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的研究背景和歷史意義雙螺旋結(jié)構(gòu)的研究背景和歷史意義 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn) DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)及其在染色質(zhì)中的組裝的超螺旋結(jié)構(gòu)及其在染色質(zhì)中的組裝 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)的超螺旋結(jié)構(gòu) 原核生物原核生物DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)的高級(jí)結(jié)構(gòu) DNA在真核生物細(xì)胞核內(nèi)的組裝在真核生物細(xì)胞核內(nèi)的組裝 DNA的功能的功能 目目 錄錄 一、一、 DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)的二級(jí)

10、結(jié)構(gòu) 雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu) （一）（一）DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的研究背景雙螺旋結(jié)構(gòu)的研究背景 堿基組成分析堿基組成分析 Chargaff 規(guī)則：規(guī)則：A = T G C 堿基的理化數(shù)據(jù)分析堿基的理化數(shù)據(jù)分析 A-T、G-C以以氫鍵氫鍵配對(duì)較合理配對(duì)較合理 DNA纖維的纖維的X-線衍射圖譜分析線衍射圖譜分析 目目 錄錄 （二）（二） DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn) （Watson, Crick, 1953） uDNADNA分子由兩條分子由兩條相互平行但相互平行但 走向相反走向相反的脫氧多核苷酸鏈的脫氧多核苷酸鏈 組成，兩鏈以組成，兩鏈以- -脫氧核糖脫氧核糖- -磷磷 酸酸- -為骨架，以

11、為骨架，以右手螺旋右手螺旋方方 式繞同一公共軸盤。螺旋直式繞同一公共軸盤。螺旋直 徑為徑為2 2nm，形成大溝，形成大溝(major g ro o v e ) 及 小 溝及 小 溝 ( m i n o r groove)相間。相間。 目目 錄錄 （二）（二） DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn) （Watson, Crick, 1953） u堿基垂直螺旋軸居雙螺旋內(nèi)堿基垂直螺旋軸居雙螺旋內(nèi) 側(cè)，與對(duì)側(cè)堿基形成側(cè)，與對(duì)側(cè)堿基形成氫鍵配氫鍵配 對(duì)對(duì)（互補(bǔ)配對(duì)形式：（互補(bǔ)配對(duì)形式：A=T; G C） 。 u相鄰堿基平面距離相鄰堿基平面距離0.34nm， 螺旋一圈螺距螺旋一圈螺距3.4nm，一圈

12、，一圈 10對(duì)堿基。對(duì)堿基。 目目 錄錄 目目 錄錄 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì) （二）（二） DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn) （Watson, Crick, 1953） u氫鍵氫鍵維持雙鏈維持雙鏈橫向穩(wěn)定橫向穩(wěn)定 性性，堿基堆積力堿基堆積力維持雙維持雙 鏈鏈縱向穩(wěn)定性縱向穩(wěn)定性。 目目 錄錄 （三）（三）DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的多樣性雙螺旋結(jié)構(gòu)的多樣性 目目 錄錄 目目 錄錄 二、二、DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)及其在染色質(zhì)的超螺旋結(jié)構(gòu)及其在染色質(zhì) 中的組裝中的組裝 （一）（一）DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)的超螺旋結(jié)構(gòu) 超螺旋結(jié)構(gòu)超螺旋結(jié)構(gòu)(superhelix 或或supercoil) DNA雙螺旋鏈再盤

13、繞即形成超螺旋結(jié)構(gòu)。雙螺旋鏈再盤繞即形成超螺旋結(jié)構(gòu)。 正超螺旋正超螺旋(positive supercoil) 盤繞方向與盤繞方向與DNA雙螺旋方同相同雙螺旋方同相同 負(fù)超螺旋負(fù)超螺旋(negative supercoil) 盤繞方向與盤繞方向與DNA雙螺旋方向相反雙螺旋方向相反 目目 錄錄 目目 錄錄 （二）原核生物（二）原核生物DNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)的高級(jí)結(jié)構(gòu) 目目 錄錄 （三）（三）DNA在真核生物細(xì)胞核內(nèi)的組裝在真核生物細(xì)胞核內(nèi)的組裝 真核生物染色體由真核生物染色體由DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成，和蛋白質(zhì)構(gòu)成， 其基本單位是其基本單位是 核小體核小體(nucleosome)。 核小體的組成核小體的組成

14、 DNA：約約200bp 組蛋白：組蛋白：H1 H2A，H2B H3 H4 目目 錄錄 目目 錄錄 目目 錄錄 目目 錄錄 三、三、DNA的功能的功能 DNA的基本功能是以的基本功能是以基因基因的形式荷載遺的形式荷載遺 傳信息，并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。它傳信息，并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。它 是生命遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是個(gè)體生命活動(dòng)是生命遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是個(gè)體生命活動(dòng) 的信息基礎(chǔ)。的信息基礎(chǔ)。 基因從結(jié)構(gòu)上定義，基因從結(jié)構(gòu)上定義，是指是指DNA分子中的分子中的 特定區(qū)段，其中的核苷酸排列順序決定了基特定區(qū)段，其中的核苷酸排列順序決定了基 因的功能。因的功能。 目目 錄錄 第三節(jié)第三節(jié) RN

15、A的結(jié)構(gòu)與功能的結(jié)構(gòu)與功能 Structure and Function of RNA 目目 錄錄 RNA的種類、分布、功能的種類、分布、功能 核蛋白體核蛋白體RNA 信使信使RNA 轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA 核內(nèi)不均一核內(nèi)不均一RNA 核內(nèi)小核內(nèi)小RNA 胞漿小胞漿小RNA 細(xì)胞核和胞液細(xì)胞核和胞液線粒體線粒體功功能能 rRNA mRNA mt rRNA tRNA mt mRNA mt tRNA HnRNA SnRNA SnoRNA scRNA/7SL-RNA 核蛋白體組分核蛋白體組分 蛋白質(zhì)合成模板蛋白質(zhì)合成模板 轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸 成熟成熟mRNA的前體的前體 參與參與hnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)的剪

16、接、轉(zhuǎn)運(yùn) rRNA的加工、修飾的加工、修飾 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成 的信號(hào)識(shí)別體的組分的信號(hào)識(shí)別體的組分 核仁小核仁小RNA 核蛋白體核蛋白體RNA 信使信使RNA 轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA 核內(nèi)不均一核內(nèi)不均一RNA 核內(nèi)小核內(nèi)小RNA 胞漿小胞漿小RNA 細(xì)胞核和胞液細(xì)胞核和胞液線粒體線粒體功功能能 rRNA mRNA mt rRNA tRNA mt mRNA mt tRNA HnRNA SnRNA SnoRNA scRNA/7SL-RNA 核蛋白體組分核蛋白體組分 蛋白質(zhì)合成模板蛋白質(zhì)合成模板 轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸 成熟成熟mRNA的前體的前體 參與參與hnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)的剪

17、接、轉(zhuǎn)運(yùn) rRNA的加工、修飾的加工、修飾 蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成 的信號(hào)識(shí)別體的組分的信號(hào)識(shí)別體的組分 核仁小核仁小RNA 一一 、信使、信使RNA的結(jié)構(gòu)與功能的結(jié)構(gòu)與功能 hnRNA 內(nèi)含子內(nèi)含子 ( (intron) ) mRNA * mRNA成熟過(guò)程成熟過(guò)程 外顯外顯 子子 ( (exon) ) 目目 錄錄 目目 錄錄 * * mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 1. 大多數(shù)真核大多數(shù)真核mRNA的的5 末端均在轉(zhuǎn)錄后加上末端均在轉(zhuǎn)錄后加上 一個(gè)一個(gè)7-甲基鳥苷，同時(shí)第一個(gè)核苷酸的甲基鳥苷，同時(shí)第一個(gè)核苷酸的C 2也也 是甲基化，形成帽子結(jié)構(gòu)：是甲基化，形成帽子結(jié)構(gòu)：m7Gpp

18、pNm-。 2. 大多數(shù)真核大多數(shù)真核mRNA的的3 末端有一個(gè)多聚腺苷酸末端有一個(gè)多聚腺苷酸 (polyA)結(jié)構(gòu)，稱為多聚結(jié)構(gòu)，稱為多聚A尾。尾。 目目 錄錄 帽子結(jié)構(gòu)帽子結(jié)構(gòu) 目目 錄錄 mRNA核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位 mRNA的穩(wěn)定性維系的穩(wěn)定性維系 翻譯起始的調(diào)控翻譯起始的調(diào)控 帽子結(jié)構(gòu)和多聚帽子結(jié)構(gòu)和多聚A尾的功能尾的功能 目目 錄錄 * mRNA的功能的功能 把把DNA所攜帶的遺傳信息，按堿基互所攜帶的遺傳信息，按堿基互 補(bǔ)配對(duì)原則，抄錄并傳送至核糖體，用以補(bǔ)配對(duì)原則，抄錄并傳送至核糖體，用以 決定其合成蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序。決定其合成蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序。 DNA

19、mRNA 蛋白蛋白 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 翻譯翻譯 原核細(xì)胞原核細(xì)胞 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì) 細(xì)胞核細(xì)胞核 DNA 內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 轉(zhuǎn)錄后剪接轉(zhuǎn)錄后剪接 轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn) mRNA hnRNA 翻譯翻譯 蛋白蛋白 真核細(xì)胞真核細(xì)胞 目目 錄錄 * tRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 含含 1020% 稀有堿基，如稀有堿基，如 DHU 3 末端為末端為 CCA-OH 5 末端大多數(shù)為末端大多數(shù)為G 具有具有 T C 二、轉(zhuǎn)運(yùn)二、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA的結(jié)構(gòu)與功能的結(jié)構(gòu)與功能 目目 錄錄 N NH NH N N O CH3 CH3 N N NH N NH CH2CHC CH3 CH3 NH NH O O H H H

20、 H NH NH S O N,N二甲基鳥嘌呤二甲基鳥嘌呤 N6-異戊烯腺嘌呤異戊烯腺嘌呤 雙氫尿嘧啶雙氫尿嘧啶 4-巰尿嘧啶巰尿嘧啶 稀有堿基稀有堿基 目目 錄錄 * tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 三葉草形三葉草形 氨基酸臂氨基酸臂 DHU環(huán)環(huán) 反密碼環(huán)反密碼環(huán) 額外環(huán)額外環(huán) TC環(huán)環(huán) 氨基酸氨基酸臂臂 額外環(huán)額外環(huán) 目目 錄錄 * tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)的三級(jí)結(jié)構(gòu) 倒倒L形形 * tRNA的功能的功能 活化、搬運(yùn)氨基活化、搬運(yùn)氨基 酸到核糖體，參與蛋酸到核糖體，參與蛋 白質(zhì)的翻譯。白質(zhì)的翻譯。 目目 錄錄 * rRNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu) 三、核蛋白體三、核蛋白體RNA的結(jié)構(gòu)與功能的結(jié)構(gòu)與功能 * rR

21、NA的功能的功能 參與組成核蛋白參與組成核蛋白 體，作為蛋白質(zhì)生物體，作為蛋白質(zhì)生物 合成的場(chǎng)所。合成的場(chǎng)所。 目目 錄錄 * rRNA的種類（根據(jù)沉降系數(shù)）的種類（根據(jù)沉降系數(shù)） 真核生物真核生物 5S rRNA 28S rRNA 5.8S rRNA 18S rRNA 原核生物原核生物 5S rRNA 23S rRNA 16S rRNA 目目 錄錄 核蛋白體的組成核蛋白體的組成 原核生物（以大腸桿菌為例）原核生物（以大腸桿菌為例）真核生物（以小鼠肝為例）真核生物（以小鼠肝為例） 小亞基小亞基30S40S rRNA16S1542個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸18S1874個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)21種

22、種占總重量的占總重量的40%33種種占總重量的占總重量的50% 大亞基大亞基50S60S rRNA23S 5S 2940個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 120個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 28S 5.85S 5S 4718個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 160個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 120個(gè)核苷酸個(gè)核苷酸 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)31種種占總重量的占總重量的30%49種種占總重量的占總重量的35% 核核 酸酸 的的 理理 化化 性性 質(zhì)質(zhì) The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第第 四四 節(jié)節(jié) 目目 錄錄 目目 錄錄 1. DNA或或RNA的定量的定量 OD260=1.0相當(dāng)于相當(dāng)于

23、 50 g/ml雙鏈雙鏈DNA 40g/ml單鏈單鏈DNA（或（或RNA） 20g/ml寡核苷酸寡核苷酸 2.判斷核酸樣品的純度判斷核酸樣品的純度 DNA純品純品: OD260/OD280 = 1.8 RNA純品純品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的應(yīng)用的應(yīng)用 目目 錄錄 二、二、DNA的變性的變性(denaturation) 定義定義：在某些理化因素作用下，在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開雙鏈解開 成兩條單鏈的過(guò)程。成兩條單鏈的過(guò)程。 方法：方法：過(guò)量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、過(guò)量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、 酰胺以及某些有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮等。酰胺以及某些有機(jī)溶

24、劑如乙醇、丙酮等。 變性后其它理化性質(zhì)變化：變性后其它理化性質(zhì)變化： OD260增高增高粘度下降粘度下降 比旋度下降比旋度下降浮力密度升高浮力密度升高 酸堿滴定曲線改變酸堿滴定曲線改變生物活性喪失生物活性喪失 目目 錄錄 目目 錄錄 DNADNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂 例：變性引起紫外吸收值的改變例：變性引起紫外吸收值的改變 DNA的紫外吸收光譜的紫外吸收光譜 增色效應(yīng)：增色效應(yīng)：DNA變性時(shí)其溶液變性時(shí)其溶液OD260增高的現(xiàn)象。增高的現(xiàn)象。 目目 錄錄 目目 錄錄 熱變性過(guò)程中變性一半時(shí)的溫度稱為熱變性過(guò)程中變性一半時(shí)的溫度稱為Tm值值。 三、三、DNA的

25、復(fù)性與分子雜交的復(fù)性與分子雜交 DNA復(fù)性復(fù)性(renaturation)的定義的定義 在適當(dāng)條件下，變性在適當(dāng)條件下，變性DNADNA的兩條互補(bǔ)鏈可的兩條互補(bǔ)鏈可 恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為復(fù)性復(fù)性。 減色效應(yīng)減色效應(yīng) DNA復(fù)性時(shí)，其溶液復(fù)性時(shí)，其溶液OD260降低。降低。 熱變性的熱變性的DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性， 這一過(guò)程稱為這一過(guò)程稱為退火退火(annealing) 。 目目 錄錄 目目 錄錄 目目 錄錄 DNA-DNA 雜交雙鏈分子雜交雙鏈分子 變性變性 復(fù)性復(fù)性 不同來(lái)源的不同來(lái)源的 DNA分子分子 目目 錄錄 目目 錄錄 核酸分子雜交的應(yīng)用核