實驗2分離以尿素為氮源的微生物

1、.1 實驗實驗2 2 分離分離以尿素為氮源的以尿素為氮源的微生物微生物 .2 一一. .實驗原理實驗原理 尿素尿素 NH3 中性中性 堿性堿性 酚紅顏色：酚紅顏色： (酸性)黃色黃色 紅色紅色 ( (變色范圍變色范圍 pH6.4-8.2)pH6.4-8.2) .3 二二. .實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細菌使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細菌( (有有 脲酶脲酶) ) 通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pHpH 的變化的變化( (脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)脲酶催化的化學(xué)反應(yīng)) ) .4 三三. .實驗步驟實驗步驟 . .倒平板倒平板 .

2、.制備一定濃度梯度的細菌懸液制備一定濃度梯度的細菌懸液 g g土壤土壤m(xù)lml無菌水，振蕩，為無菌水，振蕩，為-2-2稀釋液，依次制備稀釋液，依次制備 -3 -3、 、-4 -4、 、-5 -5的土壤稀釋液。 的土壤稀釋液。 .稀釋涂布分離法分離細菌稀釋涂布分離法分離細菌 . .制備無菌的固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基制備無菌的固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基P26P26 . .培養(yǎng)觀察（倒置，培養(yǎng)觀察（倒置，37 24-48h37 24-48h） （無菌，0.1ml，玻璃刮刀） .5 配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基 尿素培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基 葡萄糖葡萄糖 0.025g0.025g NaCl 0.12g NaCl 0

3、.12g K K2 2HPO4 0.12g HPO4 0.12g 瓊脂糖瓊脂糖 0.5g0.5g 酚紅酚紅 0.25g0.25g 尿素尿素 10ml10ml LBLB培養(yǎng)基培養(yǎng)基 蛋白胨：蛋白胨： 0.25g0.25g 酵母提取液：酵母提取液： 0.12g0.12g NaCl NaCl： 0.25g0.25g 瓊脂糖瓊脂糖： 0.5g 0.5g 對照組對照組 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基實驗組實驗組 為什么用瓊脂糖代替瓊脂？怎么獲得無菌的尿素為什么用瓊脂糖代替瓊脂？怎么獲得無菌的尿素 溶液？溶液？ .6 接種 取0.1ml菌懸液 .7 涂布分離 .8 涂布分離 .9 37倒置培養(yǎng) 按濃度捆成一摞按濃度

4、捆成一摞 恒溫恒溫37培養(yǎng)培養(yǎng) .10 1 1、為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配置固體培養(yǎng)基、為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配置固體培養(yǎng)基 因為瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的因為瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的 含氮化合物。如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會為細含氮化合物。如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會為細 菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會在尿素菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會在尿素 固體培養(yǎng)上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細菌，固體培養(yǎng)上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細菌， 不利于以尿素為氮源的細菌的篩選，故用純化不利于以尿素為氮源的細菌的篩選，故用純化 的瓊脂糖而不用瓊脂做固化劑的瓊脂糖而不用瓊脂做固化劑 思考題：

5、 .11 2 2、有脲酶的細菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用、有脲酶的細菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用 土壤中的尿素在較高溫度下會被水解成氨，氨土壤中的尿素在較高溫度下會被水解成氨，氨 使土壤堿化，氨還與使土壤堿化，氨還與SOSO4 42- 2-等離子形成化合物， 等離子形成化合物， 使土壤板結(jié)。而脲酶的細菌不僅使動植物尸體使土壤板結(jié)。而脲酶的細菌不僅使動植物尸體 降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界 中氮的循環(huán)。中氮的循環(huán)。 .12 3 3、有脲酶的細菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶、有脲酶的細菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶 出現(xiàn)。出現(xiàn)。 細菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基

6、中尿素水解，細菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中尿素水解， 水解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚酞在酸性環(huán)境里水解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚酞在酸性環(huán)境里 呈黃色，堿性里呈紅色。培養(yǎng)基中酸堿指示劑呈黃色，堿性里呈紅色。培養(yǎng)基中酸堿指示劑 產(chǎn)生顏色變化（變紅），標志著存在脲酶水解產(chǎn)生顏色變化（變紅），標志著存在脲酶水解 尿素的作用，從而證明這一菌株以尿素為氮源。尿素的作用，從而證明這一菌株以尿素為氮源。 .13 4 4、與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培養(yǎng)、與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培養(yǎng) 基上只有少數(shù)菌落基上只有少數(shù)菌落 表明能利用尿素的細菌在土壤菌落中只占有極表明能利用尿素的細菌在土壤菌落中只占有極 少數(shù)。少數(shù)。 5.5.