實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完課件

1、實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完1 實驗實驗四四 食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測 食品微生物學基礎實驗食品微生物學基礎實驗 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完2 一、目的要求一、目的要求 1 1、掌握食品中微生物學基本指標的檢測、掌握食品中微生物學基本指標的檢測 方法。了解食品質量與細菌和大腸菌群數(shù)方法。了解食品質量與細菌和大腸菌群數(shù) 量的重要關系量的重要關系 2 2、通過實驗，初步掌握食品中污染的活、通過實驗，初步掌握食品中污染的活 細菌計數(shù)方法，以判別食品的衛(wèi)生質量細菌計數(shù)方法，以判別食品的衛(wèi)生質量 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完3 1 1、

2、菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應、菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應 用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進 行衛(wèi)生學評價時提供依據(jù)。行衛(wèi)生學評價時提供依據(jù)。 2 2、大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭、大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭 氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。 由由腸桿菌科腸桿菌科中四個菌屬內的一些細菌所組成，即中四個菌屬內的一些細菌所組成，即艾希氏菌屬、艾希氏菌屬、 枸櫞酸桿菌屬、產氣克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬枸櫞酸桿菌屬、產氣克

3、雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。 該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價 食品的衛(wèi)生質量，具有廣泛的衛(wèi)生學意義。食品的衛(wèi)生質量，具有廣泛的衛(wèi)生學意義。 二、實驗原理二、實驗原理 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完4 一、待測樣品：一、待測樣品： 奶粉還原液、豆腐等。奶粉還原液、豆腐等。 二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、月桂基磺酸鹽胰蛋白胨肉湯（平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、月桂基磺酸鹽胰蛋白胨肉湯（LSTLST）、）、 煌綠乳糖膽鹽肉湯（煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLBBGLB）, 225m1, 225m1無菌生理鹽水、無菌生理鹽水、 9m

4、19m1無無 菌生理鹽水、菌生理鹽水、1mol/L1mol/L氫氧化鈉、氫氧化鈉、1mol/L1mol/L鹽酸。鹽酸。 三、無菌培養(yǎng)皿、革蘭氏染色液、移液器、槍頭、培養(yǎng)箱、三、無菌培養(yǎng)皿、革蘭氏染色液、移液器、槍頭、培養(yǎng)箱、 水浴鍋、電子天平、電爐、玻璃珠（直徑為水浴鍋、電子天平、電爐、玻璃珠（直徑為5mm5mm）、試管架、）、試管架、 酒精燈、滅菌鑷子、酒精燈、滅菌鑷子、75%75%酒精棉球、玻璃蠟筆、不銹鋼勺等。酒精棉球、玻璃蠟筆、不銹鋼勺等。 三、實驗材料三、實驗材料 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完5 四、操作方法 一、細菌總數(shù)一、細菌總數(shù)： (1) (1) 以無菌操作將檢樣以無

5、菌操作將檢樣2525克克( (或或25ml)25ml)放于裝有放于裝有225ml225ml滅菌生理鹽水和玻璃珠的滅菌生理鹽水和玻璃珠的 三角瓶中，充分振蕩制作成三角瓶中，充分振蕩制作成1:101:10的均勻稀釋液，樣品的均勻稀釋液，樣品PHPH值應在值應在6.5-7.56.5-7.5之間，之間， 必要時用必要時用1mol/L1mol/L氫氧化鈉或氫氧化鈉或1mol/L1mol/L鹽酸調節(jié)鹽酸調節(jié)( (固體食品需先用無菌均質器均固體食品需先用無菌均質器均 質后再稀釋質后再稀釋) )。 (2) (2) 用移液器，吸取用移液器，吸取1:101:10稀釋液稀釋液1ml1ml，注入含有，注入含有9ml9

6、ml滅菌生理鹽水的試管內，振滅菌生理鹽水的試管內，振 搖均勻，制成搖均勻，制成1:1001:100的稀釋液。的稀釋液。 (3) (3) 另取槍頭，按上述操作進行另取槍頭，按上述操作進行1010系列稀釋成不同濃度的稀釋液，如此每遞增系列稀釋成不同濃度的稀釋液，如此每遞增 稀釋一次，即換用稀釋一次，即換用1 1支無菌槍頭。支無菌槍頭。 (4) (4) 根據(jù)對標本污染情況的估計，選擇根據(jù)對標本污染情況的估計，選擇2-32-3個稀釋度，分別在作個稀釋度，分別在作1010倍遞增稀釋倍遞增稀釋 的同時，即吸取該稀釋度的稀釋液的同時，即吸取該稀釋度的稀釋液1ml1ml于滅菌培養(yǎng)平皿內，每個稀釋度作兩個于滅菌

7、培養(yǎng)平皿內，每個稀釋度作兩個 平皿。平皿。 (5) (5) 稀釋液吸入平皿后，將融化并冷卻至稀釋液吸入平皿后，將融化并冷卻至4545的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿 約約15ml15ml，并轉動平皿使其混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有，并轉動平皿使其混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml1ml滅滅 菌生理鹽水的滅菌平皿作空白對照。菌生理鹽水的滅菌平皿作空白對照。 (6) (6) 待瓊脂凝固后，翻轉平板，置待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36+136+1恒溫箱內培養(yǎng)恒溫箱內培養(yǎng)4848 2 2小時后取出，計算小時后取出，計算 平板內菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克樣

8、品所含菌落總數(shù)。平板內菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克樣品所含菌落總數(shù)。 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完6 菌落總數(shù)的檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序 檢樣 25g(或25ml)樣品225ml稀釋液，均質 10倍系列稀釋 選擇2-3個樣品勻液各取1ml,分別加入無菌培養(yǎng)皿內 每皿加入15-20ml培養(yǎng)基搖勻 361培養(yǎng)482h 計算菌落數(shù)，報告 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完7 梯度稀釋 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完8 操作方法操作方法 二、大腸菌群檢驗二、大腸菌群檢驗： 取樣品及稀釋方法與菌落總數(shù)檢驗方法相同，做成取樣品及稀釋方法與菌落總數(shù)檢驗方法相同，做成1:101:1

9、0的均勻稀的均勻稀 釋液為檢樣，取樣量為釋液為檢樣，取樣量為1ml1ml及及0.1ml(0.1ml(相當于相當于1 1克及克及0.10.1克奶粉樣品克奶粉樣品) ) 各各3 3管。管。 1 1初發(fā)酵試驗初發(fā)酵試驗 選擇待測樣品選擇待測樣品3 3個適宜稀釋度接種于個適宜稀釋度接種于LSTLST發(fā)酵管內，接種量在發(fā)酵管內，接種量在 1ml1ml以上者，用雙料以上者，用雙料LSTLST發(fā)酵管；每一稀釋度接種發(fā)酵管；每一稀釋度接種3 3管，置管，置3636 11 溫箱內，培養(yǎng)溫箱內，培養(yǎng)2424 2 2小時，如所有發(fā)酵管都不產氣，繼續(xù)培養(yǎng)小時，如所有發(fā)酵管都不產氣，繼續(xù)培養(yǎng) 2424 2 2小時，觀察

10、倒管內是否產氣，如未產氣可報告為大腸菌群小時，觀察倒管內是否產氣，如未產氣可報告為大腸菌群 陰性；如有產氣者，則進行復發(fā)酵試驗。陰性；如有產氣者，則進行復發(fā)酵試驗。 2 2復發(fā)酵試驗復發(fā)酵試驗 將所有產氣的將所有產氣的LSTLST發(fā)酵管分別轉接在發(fā)酵管分別轉接在BGLBBGLB肉湯管中，置肉湯管中，置 3636 11溫箱內，培養(yǎng)溫箱內，培養(yǎng)48h 48h 2 2 小時小時, ,然后取出，觀察產氣情況。然后取出，觀察產氣情況。 產氣者，計為大腸菌群陽性管產氣者，計為大腸菌群陽性管 3 3報告報告 根據(jù)復發(fā)酵試驗的陽性管數(shù)，查大腸菌群最可能數(shù)根據(jù)復發(fā)酵試驗的陽性管數(shù)，查大腸菌群最可能數(shù)(MPN)(MPN)檢檢 索表。得出每索表。得出每1m1(g)1m1(g)食品中存在的大腸菌群數(shù)的近似值。食品中存在的大腸菌群數(shù)的近似值。 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完9 檢樣25g或25ml225ml稀釋液，均質 10倍系列稀釋，選三個適宜稀釋度接種LST肉湯管 361培養(yǎng)482h 不產氣 產氣 接種BGLB肉湯 361培養(yǎng)482h 不產氣產氣 大腸菌群陰性大腸菌群陽性 查MPN表，報告 LSTLST發(fā)酵管現(xiàn)象發(fā)酵管現(xiàn)象 實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完10 1 1影響雜菌總數(shù)準確性的因素有哪些