10004菌種管理規(guī)程完整

1、 文件名稱 菌種管理規(guī)程 文件編號 QB-WI/10-004-00 版本號 00頁碼 制定人 制定日期 審核人 審核日期 批準人 批準日期 生效日期 管理部門 質(zhì)量部 分發(fā)部門 總經(jīng)理口技術(shù)部口質(zhì)量部口生產(chǎn)部口管理者代表口 商務(wù)部口銷售部口行政部口倉庫口 序號 修訂原因及目的 修訂容 01 文件新建 / 文件名稱 菌種管理規(guī)程 文件編號 QB-WI/10-004-00 版本號 00 頁碼 1. 目的 規(guī)微生物學檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生 物學檢驗結(jié)果的準確可靠。 2. 適用圍 適用于微生物實驗用菌種管理，包括菌種的申購、傳代、使用及銷毀等。 3

2、. 引用/參考文件 ChP2015 實用藥品微生物檢驗檢測技術(shù)指南 4. 職責 質(zhì)量控制實驗室負責菌種的申購、傳代、使用、銷毀等工作，QA負責監(jiān)控和參與00S調(diào)查。 5. 程序 5.1術(shù)語和定義 5. 1. 1標準菌株 由中國藥品生物制品檢左所醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心或者其他經(jīng)認可的機構(gòu)提供的冷凍干燥 菌。 5. 1. 2傳代菌株 用標準菌種制備的采用特左保存方法長期固立保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種，3代后的 傳代菌株在需要時可以作為工作菌株使用。 5. 1.3工作菌株 用標準菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜而培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。 5.1.4菌種的代 將菌種接種至一新鮮培

3、養(yǎng)基上或培養(yǎng)基，每萌發(fā)一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥 菌種為第0代。 5. 2菌種來源 5. 2. 1標準菌株由中國藥品生物制品檢左所醫(yī)學菌種保藏中心(CMCC)或者英他經(jīng)認可的機構(gòu)提供的冷 凍干燥菌種。 5.2.2質(zhì)量控制實驗室涉及到的菌種種類、代碼、保存方法及保存條件如下。 菌種名稱 菌種代碼 保存方法 保存溫度 保存期限 金黃色匍萄球菌 CMCC(B)26003 TSA斜而 281 1個月 冷凍干燥管 -2or 1年 銅綠假單胞菌 CMCC(B)10104 TSA斜而 2 8C 1個月 冷凍干燥管 -20C 1年 枯草芽抱桿菌 CMCC(B) 63501 TSA斜而 2 8

4、C 1個月 冷凍干燥管 -2oc 1年 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDA斜而 2 8C 3個月 冷凍干燥管 -2or 1年 黑曲霍菌 CMCC(F)98003 SDA斜而 2 8C 3個月 冷凍干燥管 -2or 1年 生砲梭菌 CMCC(B)64941 TSA斜而 2 8C 1個月 冷凍干燥管 -20C 1年 5.3菌種的申購、驗收、保存 5.3. 1菌種的申購 5. 3. 1.1微生物室QC依據(jù)菌種的庫存及菌種的使用情況，提岀采購申請，申請需明確菌種的名稱，標 準編號以及申購數(shù)量等信息。 5. 3. 1.2質(zhì)量部經(jīng)理對申購汁劃進行審批，審批后由公司的商務(wù)部按要求進行采購，采購過程

5、執(zhí)行采 購控制程序。 5. 3. 1. 3菌種的采購需向法定的業(yè)務(wù)部門或者認可的機構(gòu)采購。 5. 3. 1.4購買菌種的同時應(yīng)保留相關(guān)證明資料，說明菌種的名稱、代數(shù)、數(shù)量等。 5.3.2菌種的驗收 5. 3. 2.1微生物室QC負責對采購回的菌種以及相關(guān)的證明資料進行驗收： 5. 3.2.2驗收應(yīng)包括菌種外包裝的完好性、具體驗收的依據(jù)為批準后的申購訃劃。 5. 3. 2. 3驗收符合后簽字確認并領(lǐng)回菌種，及時填寫菌種驗收、入庫記錄，并將菌種的相關(guān)證明資 料貼在菌種接收登記表當頁背面留存。如驗收不符合則拒絕簽字領(lǐng)用，商務(wù)部負責退貨處理。 5.3.3菌種的保存 5. 3. 3.1驗收合格的冷凍干燥

6、菌種，應(yīng)保存在溫度設(shè)左為-20冰箱中保存，有效期可至1年。 5. 3. 3. 2驗收后的菌種需在驗收合格接收后14天完成轉(zhuǎn)種。 5.4菌種的傳代 5. 4. 1菌種的傳代次數(shù)不得超過5代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（GO）,冷凍干燥 的原始菌種開啟后轉(zhuǎn)種，為第1代（G1）； 5.4.2標準菌種的復(fù)、確認及傳代 5. 4. 2.1標準菌種的復(fù) 5. 4. 2.1.1將一次性吸管數(shù)支、培養(yǎng)皿、銀子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全 柜中，開啟生物安全柜的紫外燈火菌30min后關(guān)閉紫外燈，備用。 5. 4. 2.1.2將凍干菌種管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放

7、入培養(yǎng)皿中，待干。點燃酒精燈，將標準 菌種管封口的一端過火后開啟，用一次性吸管吸取少量相應(yīng)液體培養(yǎng)基或者稀釋液，加入凍干管將菌種 溶解。黑曲殆的菌種因為是抱子懸液管不需要加入液體培養(yǎng)基，直接擰開即可。 5. 4. 2.1. 3將菌種加入到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，根據(jù)菌種類型的不同將其置于不同溫度下培養(yǎng)不同時 間。原凍干菌種管、使用過的一次性吸管待121C, 30min髙溫濕熱火活后處理。不同菌種稀釋液與培 養(yǎng)條件見下表。 菌種名稱 菌種代碼 稀釋液 培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時間 金黃色匍萄球菌 CMCC(B) 26003 TSB 30-35C 72h 銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10104 TSB 30-

8、35C 72h 枯草芽抱桿菌 CMCC(B)63501 TSB 30-35C 72h 生砲梭菌 CMCC(B) 64941 硫乙醇酸鹽流體 培養(yǎng)基 30-35C 18-24h 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDB 20-25C 120h 黑曲霉菌 CMCC(F)98003 SDB 20-25C 120h 5. 4. 2. 1.4取出培養(yǎng)物，觀察液體培養(yǎng)基是否渾濁，渾濁說明菌種復(fù)，若不生長，應(yīng)繼續(xù)延長培養(yǎng)時間 （細菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不渾濁，12C, 30min髙溫濕熱火菌后廢棄，需要 時，啟動偏差調(diào)査。 5. 4. 2. 2菌種的確認 用已經(jīng)過消毒的接種環(huán)挑取上述

9、培養(yǎng)物接種到TSA （細菌）或SDA （真菌和酵母菌）平板上，然后 在相應(yīng)溫度下培養(yǎng)相應(yīng)的時間（細菌:3035C, 48-72h：酵母菌:2025C, 72120h；黑曲霍：20 25C, 57d）,觀察菌落形態(tài)，與標準形態(tài)進行比對確認，確認結(jié)果應(yīng)及時記錄在菌種確認記錄。 5. 4. 2. 3標準菌種的傳代 5. 4. 2. 3.1按照菌種說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種至適宜的液體增菌培養(yǎng)基復(fù)后的培養(yǎng)物稱為第1代 （G1）,菌種傳代應(yīng)填寫菌種傳代記錄。 5. 4. 2. 3. 2菌種確認后，如確認符合，則從液體培養(yǎng)物中挑取培養(yǎng)物第1代（G1）轉(zhuǎn)接至相應(yīng)瓊脂培 養(yǎng)基斜而上各數(shù)支（每種菌種至少3支），經(jīng)

10、過相應(yīng)溫度培養(yǎng)時間（細菌：3035C, 72h；酵母菌：20 25C, 120h；黑曲霉：2025C, 57d）培養(yǎng)：同時G1在121C, 30min高溫濕熱火菌后廢棄。 5. 4. 2. 3. 3取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2）,保存在溫度設(shè)泄為28C冷藏柜中保存： 另外1只G2進行傳代，此為第3代（G3）, G3根據(jù)檢測需要確泄傳代數(shù)量，斜而菌株均保存在28C 冷藏柜中，工作菌種和傳代用菌種分別包扎后保存。 5. 4. 2. 3. 4按照上述操作，G5為最后一代，不得繼續(xù)進行傳代，需要重新申購冷凍干燥菌種管，重復(fù) 上述操作，保存和使用菌種。 5. 4. 2. 3. 5細菌每1個

11、月傳代1次；靈菌、酵母菌及芽抱每3個月傳代一次。 5. 4. 2. 4菌種傳代時注意無菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時微生物室QC也應(yīng)采取有效 的預(yù)防措施進行自我保護，如工作時須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實驗完成后對實驗區(qū)域、設(shè)施設(shè) 備、用具等進行適當方式消毒。如發(fā)生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QC應(yīng)及時向QA報告以 便及時處理。 5. 4. 2. 5工作菌種和傳代菌種無實質(zhì)區(qū)別，必要時，可作為另一種的備用菌種使用。 5.4.3菌種的編號 5. 4. 3.1菌種編號原則：英文縮寫字母-代次-順序號-傳代日期： 5. 4. 3.1. 1菌種的英文縮寫字母：金黃色葡萄球菌（S.

12、 a）、銅綠假單胞菌、（P. a）、枯草芽抱桿菌（B. ）、 白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。 5.4. 3.1.2代數(shù)的表示用帶有下標數(shù)字的字母表示，例如：G3表示菌種的第3代。 5.4. 3.1.3每種菌種每次傳代順序號從01開始，例如一種菌種一次性轉(zhuǎn)種到4支試管上，那么順序號 一次為 01, 02, 03, 04o 5. 4. 3.1. 4傳代日期用八位數(shù)字表示：年份四位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)表示。 5. 4. 3. 1. 5例如P. a-G2-03-20170306標識2017年03月06日傳代的第2代銅綠假單胞菌的第3只。 5.5菌種的保藏 5.5.1菌種設(shè)專人加鎖保管，除銅

13、綠假單胞菌于室溫保藏外，苴他斜而菌種均在2-8C條件下保藏 5. 5.2菌種的建期檢查與鑒定 5.5. 2.1日常檢査 菌種在保藏期間，工作日應(yīng)每天上午和下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度是否正常、必要檢査菌 種管的塞子是否松動、是否染菌，檢査結(jié)束應(yīng)及時填寫菌種日常檢查記錄。 5.6菌種的使用 根據(jù)工作需要，領(lǐng)取工作用菌種或者傳代用菌種，同時填寫菌種使用記錄。菌液一般在制備完 后當天使用，制備方法參照ChP2015執(zhí)行。 5.7廢棄菌種的銷毀 5.7.1下列情況的菌種、培養(yǎng)物或者被污染的器具等，必須經(jīng)過121C, 30min髙壓濕熱火菌處理： 5. 7. 1.1新一代菌種制備成功后的上一代菌種：

14、 5.7. 1.2使用完后的菌種和帶有標準菌種的器具和培養(yǎng)物： 5.7. 1.3超過有效期的菌種： 5.7. 1.4凡是被污染、變異、可疑等異常情況菌種： 5. 7. 1. 5其他應(yīng)廢棄的菌種。 5.7.2被污染的器具在污染后，濕熱火菌前應(yīng)放苣在密閉容器中防止對外界再污染。 5.7.3廢棄菌種的銷毀須有兩個人以上同時在場進行，并及時填寫廢棄菌種、物品銷毀記錄。 5.8安全要求 5.8.1菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中； 5.8.2操作人員在操作前應(yīng)該按照規(guī)泄著裝，佩戴防護設(shè)施： 5.8.3操作結(jié)朿后，應(yīng)及時對工作區(qū)域、工作服及苴他儀器等進行適當消毒： 5. 8. 4非微生物室

15、操作人員未經(jīng)質(zhì)量部經(jīng)理批準不得進入微生物室： 6. 記錄 菌種驗收、入庫記錄(QB-QR/10-008-00) 菌種傳代記錄(QB-QR./10-009-00) 菌種確認記錄(QB-QR/10-010-00) 菌種日常檢査記錄(QB-QR/10-011-00) 菌種使用記錄(QB-QR/10-012-00) 廢棄菌種、物品銷毀記錄(QB-QR/10-013-00) 醫(yī)療技術(shù) 日期 入庫數(shù)量 入庫代次 入庫狀態(tài) 菌種來源 驗收情況 接收人 菌種名稱: 儲存條件: 記錄編號:QB-QR/10-008-00 菌種代碼: 醫(yī)療技術(shù) 菌種傳代記錄 記錄編號：QB-QR/10-009-00 菌種名稱 菌種代碼 傳代前菌種代次 傳代前菌種狀態(tài) 傳代日期 傳代數(shù)量 預(yù)期用途 數(shù)量（支） 代次 菌種編號 傳代用培養(yǎng)基 工作用菌種 傳代用菌種 操作過程描述： 操作人： 備注： 醫(yī)療技術(shù) 菌種確認記錄 記錄編號：QB-QRZ10-010-00 菌種代碼： 確認日期確認用培養(yǎng)基 確認原因 操作過程描述: 確認結(jié)論: 操作人/日期: 醫(yī)療技術(shù) 菌種日常檢查記錄 記錄編號：QB-QR/10-011-00 日期 時間 溫度CC) 塞子是否 松動 是否