紫外光度法測定維生素C實驗報告

1、紫 外 分 光 光 度 法 測 定 維 生 素 C 片 維 生 素 C 的 含 量 一、實驗?zāi)康?1. 學習利用紫外吸收光譜測定物質(zhì)含量的原理和方法； 2. 熟練紫外 -可見分光光度計的操作。 二、實驗原理 維生素C （V。是一種酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖內(nèi)酯立體結(jié)構(gòu)，分D和L 兩種立體構(gòu)型，但只有L型有生理功效。維生素C具有較強的還原性，在一定條件下氧化 型和還原型可以互變,兩者均具有生物活性（結(jié)構(gòu)式見圖1）,其C2和C3位上兩個相鄰的 烯醇式羥基極易解離而釋放出 H+,故維生素C雖然不含自由羧基，仍具有有機酸的性質(zhì)。 維生素C呈無色無臭的片狀結(jié)晶體，易溶于水,不溶于脂。在酸性環(huán)境中穩(wěn)定

2、，遇空氣中氧、 熱、光、堿性物質(zhì) , 特別是有氧化酶及痕量銅、鐵等金屬離子存在時可促進其破壞速度。 具有n電子的共軛雙鍵化合物、芳香烴化合物等，在紫外光譜區(qū)都有強烈吸收，其 摩爾吸收系數(shù) k 可達 1 04- 1 0 6數(shù)量級。利用紫外吸收光譜進行定量分析，要借助朗伯 -比 爾定律。根據(jù)維生素C在稀硫酸溶液（維生素C水溶液在pH 56之間穩(wěn)定）中，在245 nm波長處有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法測定維生素C片含量的方法。 三、實驗儀器及試劑 實驗儀器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml ）、燒杯、紫外分光光 度計 實驗用品：98%&硫酸（分析純，1

3、.84 g/ml ）、維生素C對照品系以原料藥經(jīng)105 C干 燥至恒重（含量為99.7 %）、維生素C片（2片）、去離子水 四、實驗步驟 1. 0.005 mol L-1硫酸溶液的配制 用 0.5 ml 移液管移取 0.27 ml 98% 濃硫酸放入事先已盛有蒸餾水的燒杯中，攪拌， 冷卻至室溫后移入 1000 ml 容量瓶，稀釋至刻度，待用。 2. 0.5 g L-1 對照品溶液的配制 精密稱取105C干燥至恒重的維生素 C對照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol L-1硫酸溶液制成0.5 g L-1對照品溶液。 3. 維生素C對照品標準溶液的配制 用5 ml移液管精密量取0

4、.5 g L-1對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分別 置100 ml量瓶中，用0.005 molL-1硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，待用。 4. 測定波長及標準曲線 以0. 005 mol L-1硫酸溶液為空白，測定維生素C在稀硫酸溶液中最大吸收波長，并 在此波長處測定維生素C對照品標準溶液的吸光度，以濃度對吸光度作線性回歸。 5. 樣品含量測定 取維生素C片2片，精密稱定，研細，精密稱取適量（0.06g，約相當于維生素C 50 mg） 置100 ml容量瓶中,加0. 005 mol L-1硫酸溶液適量，超聲5 min使溶解,再加0. 005 mol L-1 硫酸溶液至刻度

5、，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2.0 ml置100 ml量瓶中， 加0.005 mol L-1硫酸溶液至刻度，搖勻，在最大吸收波長處測定吸光度。 6. 空白試驗 模擬維生素C片處方比例，精密稱取輔料適量置100 ml量瓶中，與步驟5樣品含量測 定同法操作，在最大吸收波長處測定吸收度為0。 7. 回收率試驗 先測得2 ml樣品溶液的吸光度A （C）,再取0.0125 g/L的VC標液200卩l(xiāng)，于2 ml 已測得吸光度A的樣品溶液中，再測得吸光度G）。 五、實驗數(shù)據(jù)記錄及處理 1. 維生素的吸收波長 在紫外可見分光光度計上掃描測定 VC標準樣品的吸收光譜，結(jié)果顯示 VC在244nm 波

6、長處的吸光度值最大。 2. 維生素C對照品標準曲線 標準VC濃度（g/L ） 0.0025 0.0050 0.0075 0.0100 0.0125 Abs 0.1264 0.2663 0.4079 0.5462 0.6905 y = 56.3240 x - 0.0150R=1.0000 3. 樣品中維生素C含量測定 樣品nWg 0.0600 0.0600 0.0580 Abs 0.5482 0.5426 0.5257 樣品VC濃度（g/L ） 0.0100 0.0099 0.0096 樣品中VC含量（% 83.33 82.50 82.76 平均值（%） 82.86 RSD( % 0.5147

7、4. 回收率試驗 先測得2 ml樣品溶液的吸光度 A (C),再取0.0125 g/L的VC標液200卩l(xiāng)，于 2 ml已測得吸光度A的樣品溶液中，再測得吸光度 A (G)。 1 2 3 A1 0.5482 0.5426 0.5257 G 0.0100 0.0099 0.0096 加入 V (0.0125 g/L ) /mL 0.2000 0.2000 0.2000 A 0.6093 0.6016 0.5912 C 0.0111 0.0109 0.0108 回收率(% 95.42 92.21 102.32 平均回收率(% 96.65 RSD( % 5.17 六、實驗結(jié)果及討論 1. 維生素C還原性很強，在空氣中易被氧化，在酸性介質(zhì)中氧化作用減慢，水溶液在 pH = 56之間穩(wěn)定，故本實驗選用 0.005 mol L-1硫酸溶液(pH = 5.2 )為溶劑，維 生素C穩(wěn)定性好。 2. 標準曲線R=1.0000,且測定的未知樣品的吸光度均落在標準曲線有效的范圍內(nèi)，實驗 結(jié)果表明，維生素C在0.0025-0.0125 g/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。 3. 由于對加標回收率的原理及概念模糊，導(dǎo)致實驗在這