微生物與免疫

1、本章內(nèi)容本章內(nèi)容 第一節(jié)第一節(jié) 抗原抗原 第二節(jié)第二節(jié) 非特異性免疫非特異性免疫 第三節(jié)第三節(jié) 特異性免疫特異性免疫和抗體抗體 第四節(jié)第四節(jié) 多克隆抗體和單克隆抗體多克隆抗體和單克隆抗體 第五節(jié)第五節(jié) 血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng) 第六節(jié)第六節(jié) 現(xiàn)代免疫檢測技術(shù)現(xiàn)代免疫檢測技術(shù) 免疫學(xué)（Immunology） 是研究抗原性物質(zhì)、機體的免疫系統(tǒng)和免疫 應(yīng)答的規(guī)律和調(diào)節(jié)，以及免疫應(yīng)答的各種產(chǎn) 物和各種免疫現(xiàn)象的一門科學(xué)。 第一節(jié) 抗原 1）定義）定義 能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)抗體和致能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)抗體和致 敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)。敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特

2、異結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)。 免疫原性（免疫原性（immunogenicity）或或抗原性：抗原性： 抗原在體內(nèi)激活免疫系統(tǒng)，使其產(chǎn)生抗體和抗原在體內(nèi)激活免疫系統(tǒng)，使其產(chǎn)生抗體和特異效應(yīng)細(xì)胞特異效應(yīng)細(xì)胞的特性的特性 免疫反應(yīng)性（免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）或或反應(yīng)原性（反應(yīng)原性（reactinogenicity）：）： 抗原能與相對應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗原能與相對應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物(抗體及致敏淋巴細(xì)胞抗體及致敏淋巴細(xì)胞)發(fā)生特異發(fā)生特異 結(jié)合反應(yīng)的能力結(jié)合反應(yīng)的能力。 2） 抗原的兩個特性：抗原的兩個特性： 1. 抗原（抗原（Antigen，Ag） 3）抗原的類別）抗原的類別 完全抗原（完全

3、抗原（complete antigen）： 具有免疫原性和反應(yīng)原性的抗原。具有免疫原性和反應(yīng)原性的抗原。 （大多數(shù)（大多數(shù)蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒等）等） 半抗原（半抗原（hapten）或不完全抗原（或不完全抗原（incomplete antigen）： 只有反應(yīng)原性而沒有免疫原性的抗原。只有反應(yīng)原性而沒有免疫原性的抗原。 （類脂質(zhì)類脂質(zhì)、寡糖寡糖、核酸核酸及許多及許多藥物藥物） 半抗原與較大的載體分子（半抗原與較大的載體分子（甲基化牛血清蛋白甲基化牛血清蛋白）結(jié)）結(jié) 合成復(fù)合物時，即可獲得免疫原性（如青霉素）。合成復(fù)合物時，即可獲得免疫原性（如青霉素）。 4）抗原免疫原性的物質(zhì)基

4、礎(chǔ)：）抗原免疫原性的物質(zhì)基礎(chǔ)： t 異己性；異己性； t 相對分子質(zhì)量；分子質(zhì)量； t 化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成；化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成； 抗原物質(zhì)上能夠刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答并與其產(chǎn)物特異反應(yīng)抗原物質(zhì)上能夠刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答并與其產(chǎn)物特異反應(yīng) 的的化學(xué)基團化學(xué)基團。它是抗原特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)?？乖鶖y它是抗原特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)?？乖鶖y抗原決定抗原決定 簇的數(shù)目簇的數(shù)目稱為稱為抗原價抗原價，一般抗原是多價的。，一般抗原是多價的。 抗原決定簇（抗原決定簇（antign determinant）或表位（或表位（epitope）：）： 每種細(xì)菌的細(xì)胞都是一個包含多種抗原成分的復(fù)合體每種細(xì)菌的細(xì)胞都是一個包含多種抗原成分

5、的復(fù)合體 5）主要的微生物抗原）主要的微生物抗原 菌體抗原：菌體抗原：是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖(LPS)的的 多糖側(cè)鏈，與外膜連接。多糖側(cè)鏈，與外膜連接。 過去稱過去稱O抗原?？乖?。 表面抗原表面抗原: 指包圍在細(xì)菌細(xì)胞壁外層的抗原，主要是指包圍在細(xì)菌細(xì)胞壁外層的抗原，主要是莢膜或微莢膜抗原莢膜或微莢膜抗原。 （沙門氏菌沙門氏菌的表面抗原稱為的表面抗原稱為ViVi抗原抗原；志賀氏菌志賀氏菌的表面抗原稱為的表面抗原稱為K K抗原抗原；肺炎肺炎 鏈球菌鏈球菌的表面抗原稱的表面抗原稱莢膜抗原莢膜抗原） 菌毛抗原菌毛抗原 毒素抗原（毒素抗

6、原（toxin antigen） 細(xì)菌抗原：細(xì)菌抗原： 鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）抗原） 外毒素外毒素(抗毒素抗毒素)和類毒素和類毒素 第二節(jié)第二節(jié) 宿主的非特異免疫宿主的非特異免疫 非特異免疫非特異免疫(nonspecific immunity)，是機體的一般生是機體的一般生 理防衛(wèi)功能，又稱理防衛(wèi)功能，又稱天然免疫天然免疫(innate immunity)；是在種是在種 系發(fā)育過程中形成的，由先天遺傳而來，防衛(wèi)任何外界系發(fā)育過程中形成的，由先天遺傳而來，防衛(wèi)任何外界 異物對機體的侵入而異物對機體的侵入而不需要特殊的刺激或誘導(dǎo)不需要特殊的刺激或誘導(dǎo)。主要包。主要包 括括生理屏障生理屏障、細(xì)

7、胞因素細(xì)胞因素和和體液因素體液因素。 非特異性免疫的組成：非特異性免疫的組成： 生理屏障皮膚、粘膜及其附屬物、共生菌群 體液因素溶菌酶、補體、干擾素 細(xì)胞因素吞噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞 其它免疫的綜合作用等 一、生理屏障一、生理屏障 1. 皮膚與粘膜：皮膚與粘膜： 1）機械的阻擋和排除作用）機械的阻擋和排除作用 2）分泌液中所含化學(xué)物質(zhì)有局部抗菌作用）分泌液中所含化學(xué)物質(zhì)有局部抗菌作用 3）共生菌群）共生菌群 2. 生理上的屏障結(jié)構(gòu)生理上的屏障結(jié)構(gòu) 體內(nèi)的某些部位具有體內(nèi)的某些部位具有特殊的結(jié)構(gòu)特殊的結(jié)構(gòu)而形成阻擋微生物和大而形成阻擋微生物和大 分子異物進(jìn)入的分子異物進(jìn)入的局部屏障局部屏障，對保護(hù)

8、該器官，維持局部生，對保護(hù)該器官，維持局部生 理環(huán)境恒定有重要作用。理環(huán)境恒定有重要作用。 1）血腦屏障）血腦屏障 2）血胎屏障）血胎屏障 二、細(xì)胞因素二、細(xì)胞因素 主要指體內(nèi)的各種主要指體內(nèi)的各種吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞吞噬吞噬病原體病原體及其它各種及其它各種異物異物的能力。的能力。 1 1吞噬細(xì)胞及吞噬過程吞噬細(xì)胞及吞噬過程 吞噬細(xì)胞可分兩類：一類是小吞噬細(xì)胞，主要是血液中的中性粒細(xì) 胞；一類為大吞噬細(xì)胞即單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，包括血液中的單核細(xì) 胞、神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞及淋巴結(jié)、脾、肝、肺的巨噬細(xì)胞等。 吞噬過程分為：趨化、識別與調(diào)理、吞入、殺菌與消化等步驟 2. 自然殺傷細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞(Natu

9、ral killer cells, NK)： NK細(xì)胞屬于淋巴細(xì)胞，主要分布于外周血和脾臟，細(xì)胞屬于淋巴細(xì)胞，主要分布于外周血和脾臟，具有具有 不須事先致敏，不須其它輔助細(xì)胞或分子的參與而直接殺傷不須事先致敏，不須其它輔助細(xì)胞或分子的參與而直接殺傷 靶細(xì)胞的功能靶細(xì)胞的功能。NK細(xì)胞通過細(xì)胞通過釋放穿孔素釋放穿孔素(perforin)和顆粒酶和顆粒酶 造成靶細(xì)胞死亡造成靶細(xì)胞死亡，也可通過釋放，也可通過釋放腫瘤壞死因子腫瘤壞死因子(TNF)殺傷靶殺傷靶 細(xì)胞細(xì)胞。 ，而且，而且NK細(xì)胞活性較其它殺傷細(xì)胞更早出現(xiàn)，因此在抗細(xì)胞活性較其它殺傷細(xì)胞更早出現(xiàn)，因此在抗 腫瘤抗感染特別是病毒感染中起重要

10、作用。腫瘤抗感染特別是病毒感染中起重要作用。 三、體液因素三、體液因素 正常體液和組織中抵抗病原體的成分：正常體液和組織中抵抗病原體的成分： 補體補體 干擾素干擾素 溶菌酶溶菌酶 在免疫反應(yīng)中，有能擴大和增強抗體的在免疫反應(yīng)中，有能擴大和增強抗體的“補助補助”能力能力 ，稱為補體。補體的本質(zhì)是一類酶原，無特異性，能，稱為補體。補體的本質(zhì)是一類酶原，無特異性，能 被任何抗原抗體復(fù)合物激活被任何抗原抗體復(fù)合物激活 宿主細(xì)胞在病毒等多種誘生劑刺激下產(chǎn)生的一組宿主細(xì)胞在病毒等多種誘生劑刺激下產(chǎn)生的一組相對相對 分子量低的糖蛋白，分子量低的糖蛋白，具有具有抗病毒抗病毒和和免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)功能。分功能。分

11、 、三組，分別由三組，分別由白細(xì)胞白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞成纖維細(xì)胞和和T淋巴淋巴 細(xì)胞細(xì)胞產(chǎn)生。產(chǎn)生。 、屬屬型干擾素型干擾素，屬屬型干擾素。型干擾素。 （病毒或干擾素誘生劑）（病毒或干擾素誘生劑） 主要來源于主要來源于吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞并可分泌到血清及各種分泌液中并可分泌到血清及各種分泌液中 ，能水解革蘭氏陽性菌胞壁肽聚糖而使細(xì)胞裂解。，能水解革蘭氏陽性菌胞壁肽聚糖而使細(xì)胞裂解。 四、炎癥（四、炎癥（inflammatory） 炎癥是機體受到有害刺激時所表現(xiàn)的一系列局部和全身性防御炎癥是機體受到有害刺激時所表現(xiàn)的一系列局部和全身性防御 應(yīng)答，可以看作是應(yīng)答，可以看作是非特異免疫的綜合作用結(jié)果非特異

12、免疫的綜合作用結(jié)果，其作用于，其作用于清除清除 有害異物、修復(fù)受傷組織，保持自身穩(wěn)定性有害異物、修復(fù)受傷組織，保持自身穩(wěn)定性。 有害刺激包括各種理化因素，但以病原微生物感染為主。有害刺激包括各種理化因素，但以病原微生物感染為主。 t 動員了大量的吞噬細(xì)胞聚集在炎癥部位；動員了大量的吞噬細(xì)胞聚集在炎癥部位； t 血液中的抗菌因子和抗體發(fā)生局部濃縮；血液中的抗菌因子和抗體發(fā)生局部濃縮； t 死亡宿主細(xì)胞的堆積可釋放抗微生物物質(zhì)；死亡宿主細(xì)胞的堆積可釋放抗微生物物質(zhì)； t炎癥中心氧濃度下降和乳酸積累，進(jìn)一步抑制病原菌的生長；炎癥中心氧濃度下降和乳酸積累，進(jìn)一步抑制病原菌的生長； t 適度的體溫升高可

13、以加速免疫反應(yīng)的進(jìn)程。適度的體溫升高可以加速免疫反應(yīng)的進(jìn)程。 炎癥既是一種病理過程，又是一種防御病原體的積極方式：炎癥既是一種病理過程，又是一種防御病原體的積極方式： 紅、腫、痛、熱和功能障礙（紅、腫、痛、熱和功能障礙（炎癥炎癥） 第三節(jié)第三節(jié) 宿主的特異性免疫宿主的特異性免疫 一、特異性免疫的一般概念一、特異性免疫的一般概念 1. 特異性免疫（特異性免疫（specific immunity）的概念：的概念： 機體在生命過程中接受機體在生命過程中接受抗原性異物刺激抗原性異物刺激，如，如微生物感染微生物感染或或接種疫苗接種疫苗 后產(chǎn)生的，又稱后產(chǎn)生的，又稱獲得性免疫獲得性免疫(acquired

14、immunity)。 特點：特點：記憶性記憶性獲得性；獲得性；高度特異性；高度特異性； 自動免疫自動免疫被動免疫被動免疫 自然的自然的顯性或隱 性感染 經(jīng)胎盤或乳汁由母 體傳遞給嬰兒 人工的人工的接種疫苗輸入免疫細(xì)胞、抗 血清或其它制劑 2. 抗體（抗體（antibody， Ab） 1）定義：）定義： 高等動物體在高等動物體在抗原刺激下抗原刺激下所形成的一類能與該抗原發(fā)生特異結(jié)合所形成的一類能與該抗原發(fā)生特異結(jié)合 的的血清活性成分血清活性成分，又稱，又稱免疫球蛋白（免疫球蛋白（immunoglobulin， Ig） Ig有五種類型：有五種類型： IgG（主要，占主要，占80%）, IgA（血清

15、型是單體，分泌型是雙體）血清型是單體，分泌型是雙體） IgM（5個單體組成）個單體組成） IgD， IgE 免疫動物免疫動物 抗體抗體（作為抗原）（作為抗原） 抗抗體抗抗體 經(jīng)人工接種抗原或疾病后經(jīng)人工接種抗原或疾病后含有大量特異性抗體的血清含有大量特異性抗體的血清 稱稱抗血清抗血清或或免疫血清免疫血清。 2）產(chǎn)生抗體的細(xì)胞）產(chǎn)生抗體的細(xì)胞 三種細(xì)胞同時參與：三種細(xì)胞同時參與： 巨噬細(xì)胞（巨噬細(xì)胞（M ）：）：攝取、處理、呈遞抗原和激活攝取、處理、呈遞抗原和激活T細(xì)胞；細(xì)胞； T細(xì)胞：細(xì)胞：識別抗原，促使識別抗原，促使B細(xì)胞的活化和分化成漿細(xì)胞；細(xì)胞的活化和分化成漿細(xì)胞； B細(xì)胞：細(xì)胞：產(chǎn)生抗

16、體。產(chǎn)生抗體。 抗體是由漿細(xì)胞合成并分泌的抗體是由漿細(xì)胞合成并分泌的。 3）結(jié)構(gòu)：）結(jié)構(gòu)： Y型四鏈（型四鏈（4條多肽鏈）條多肽鏈） 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 可結(jié)晶片段（可結(jié)晶片段（Fc） （1）具有免疫原性具有免疫原性 （2）含免疫細(xì)胞（）含免疫細(xì)胞（NK細(xì)胞，細(xì)胞， 巨噬細(xì)胞）結(jié)合位點和巨噬細(xì)胞）結(jié)合位點和 補體結(jié)合位點補體結(jié)合位點 2個個抗原結(jié)合片段（抗原結(jié)合片段（Fab） 含抗原結(jié)合位點含抗原結(jié)合位點 二鏈二鏈 輕鏈（輕鏈（L 鏈）鏈） 重鏈（重鏈（H鏈）鏈） 二端二端 氨基端氨基端 羧基端羧基端 三區(qū)三區(qū) V區(qū)區(qū) C區(qū)區(qū) 鉸鏈區(qū)鉸鏈區(qū) 4對鏈間二硫鍵對鏈間二硫鍵（在每一個功能區(qū)內(nèi)，鏈內(nèi)

17、二硫鍵形成（在每一個功能區(qū)內(nèi)，鏈內(nèi)二硫鍵形成“環(huán)環(huán)”） 二種酶解位點二種酶解位點（木瓜蛋白酶，胃蛋白酶）（木瓜蛋白酶，胃蛋白酶） 體和價體和價: : IgG、D 、E ： 單體單體，二價二價 IgA： 二體，四價二體，四價 IgM：五體，十價（理論），五價（實際）五體，十價（理論），五價（實際） 構(gòu)象：構(gòu)象： 與抗原結(jié)合后構(gòu)象發(fā)生變化：與抗原結(jié)合后構(gòu)象發(fā)生變化：“T”型型 “Y” 型型 一、多克隆抗體（polyclonal antibody, PcAb） 將由多種抗原成分組成的抗原物質(zhì)，采用傳統(tǒng)方法 免疫接種實驗動物后采集免疫血液，分離所得到的 抗血清即為多克隆抗體。含有多種抗原成分的抗原 物

18、質(zhì)（如細(xì)菌抗原、病毒抗原），進(jìn)入機體后可激 活許多淋巴細(xì)胞克隆，使機體產(chǎn)生可針對各種抗原 成分或抗原表位的抗體，由此獲得的抗血清是一種 多克隆的混合抗體，具有高度的異質(zhì)性。 第四節(jié)第四節(jié) 多克隆抗體與單克隆抗體多克隆抗體與單克隆抗體 二、單克隆抗體（二、單克隆抗體（monoclonal antibody, McAb） 由單個由單個B細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的抗體，其遺傳背景完全一致，因此細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的抗體，其遺傳背景完全一致，因此 ，抗體分子的氨基酸序列、類型、抗原特異性等生物學(xué)性狀，抗體分子的氨基酸序列、類型、抗原特異性等生物學(xué)性狀 均相同。均相同。 應(yīng)用：應(yīng)用： 高效治療劑高效治療劑 （抗病毒）（

19、抗病毒） 藥物導(dǎo)彈藥物導(dǎo)彈（ McAb 與毒素偶聯(lián)）與毒素偶聯(lián)）（抗腫瘤）（抗腫瘤） 具有高特異性、高純度、效價高等優(yōu)點。具有高特異性、高純度、效價高等優(yōu)點。 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體：淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體： 該技術(shù)由該技術(shù)由G.Kohler、C.Milstein于于1975年創(chuàng)建，年創(chuàng)建，1984年獲諾貝爾獎。年獲諾貝爾獎。 免疫免疫B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 （可分泌（可分泌McAb ， （在體外能長期繁殖）（在體外能長期繁殖） 在體外不能長期繁殖）在體外不能長期繁殖） 細(xì)胞融合細(xì)胞融合 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 （分泌（分泌McAb ，長期繁殖），長期繁殖）

20、 生長繁殖生長繁殖 產(chǎn)生產(chǎn)生McAb 第五節(jié)、抗原抗體反應(yīng)第五節(jié)、抗原抗體反應(yīng) 一、抗原抗體反應(yīng)一、抗原抗體反應(yīng) 1. 血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng) 抗原抗體在體外的反應(yīng)。抗原抗體在體外的反應(yīng)。 應(yīng)用：應(yīng)用： 用免疫血清（已知抗體）檢測未知抗原用免疫血清（已知抗體）檢測未知抗原（如菌種鑒定）；（如菌種鑒定）； 用已知抗原檢測待測血清（未知抗體）；用已知抗原檢測待測血清（未知抗體）； 2. 抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律 特異性特異性 可逆性可逆性（物理結(jié)合）（物理結(jié)合） 定比性定比性 階段性階段性 （兩個階段）（兩個階段） 條件依賴性條件依賴性（ pH68, 3745 ,生理鹽水）生理鹽

21、水） 3. 主要的抗原抗體反應(yīng)主要的抗原抗體反應(yīng) 1）凝集反應(yīng)：）凝集反應(yīng)： 顆粒性顆粒性Ag + Ab 凝集團凝集團 （細(xì)菌，紅細(xì)胞）（細(xì)菌，紅細(xì)胞） （稀釋（稀釋Ab ） 方法方法 玻片法玻片法 試管法試管法 2）沉淀反應(yīng)）沉淀反應(yīng) 可溶性可溶性Ag + Ab 沉淀物沉淀物 （蛋白質(zhì)，多糖，（蛋白質(zhì)，多糖， 血清，細(xì)菌抽提液）血清，細(xì)菌抽提液） （ 稀釋稀釋Ag） 3）補體結(jié)合反應(yīng)：）補體結(jié)合反應(yīng)： 兩個系統(tǒng)兩個系統(tǒng)5種組分：種組分： 待檢系統(tǒng)待檢系統(tǒng) 已知的抗原（或抗體）已知的抗原（或抗體） 待檢的抗體（或抗原）待檢的抗體（或抗原） 指示系統(tǒng)指示系統(tǒng) 綿羊紅細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞 溶血素（綿羊紅

22、細(xì)胞的特異抗體）溶血素（綿羊紅細(xì)胞的特異抗體） 補體（取自豚鼠血清）補體（取自豚鼠血清） 4）中和反應(yīng)）中和反應(yīng) 特異性抗體抑制多種抗原的生物學(xué)活性（如細(xì)菌外毒素的毒 性、酶的活性、病毒的感染性等）的反應(yīng)，稱為中和試驗。 第六節(jié)第六節(jié) 免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù) 抗原或抗體抗原或抗體用小分子標(biāo)記劑（用小分子標(biāo)記劑（熒光素?zé)晒馑亍⒚该?、放射性同位素放射性同位素或?電子致密物質(zhì)電子致密物質(zhì)）進(jìn)行標(biāo)記，以提高抗原抗體反應(yīng)的）進(jìn)行標(biāo)記，以提高抗原抗體反應(yīng)的靈敏度靈敏度， 可用于可用于定性、定量和分子定位定性、定量和分子定位。 優(yōu)點：優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，特異性強，靈敏度高， 反應(yīng)速度快，容易觀察

23、。反應(yīng)速度快，容易觀察。 1.免疫熒光法免疫熒光法在熒光顯微鏡下觀察，亦可用熒光計定量。在熒光顯微鏡下觀察，亦可用熒光計定量。 2. 酶聯(lián)免疫吸附測定酶聯(lián)免疫吸附測定 （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 將可溶性抗體或抗原吸附到將可溶性抗體或抗原吸附到聚苯乙烯聚苯乙烯等固相載體上進(jìn)行免等固相載體上進(jìn)行免 疫酶反應(yīng)的定性定量方法。疫酶反應(yīng)的定性定量方法。 抗原與抗體的免疫反應(yīng)抗原與抗體的免疫反應(yīng)和和酶的高效催化反應(yīng)酶的高效催化反應(yīng)有機結(jié)合，是有機結(jié)合，是 目前應(yīng)用最廣泛的生物學(xué)技術(shù)。目前應(yīng)用最廣泛的生物學(xué)技術(shù)。 酶與抗原或抗體結(jié)合后，不改變抗原或

24、抗體的免疫學(xué)反應(yīng)酶與抗原或抗體結(jié)合后，不改變抗原或抗體的免疫學(xué)反應(yīng) 特異性，也不影響酶本身的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上特異性，也不影響酶本身的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上 的酶，催化無色底物生成有色產(chǎn)物，的酶，催化無色底物生成有色產(chǎn)物，分光光度計比色分光光度計比色以對抗以對抗 原或抗體定量或定性。原或抗體定量或定性。 常用的酶：常用的酶： 辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶（底物：鄰苯二胺）（底物：鄰苯二胺） 堿性磷酸酶堿性磷酸酶（底物：對硝基酚磷酸鹽）（底物：對硝基酚磷酸鹽） 直接法：直接法： 用酶包被的抗原或抗體直接檢測包被在酶標(biāo)板上的抗體或抗原用酶包被的抗原或抗體直接檢測包被在酶標(biāo)板上的抗體

25、或抗原， 被檢抗原或抗體的量與產(chǎn)物顏色成正比。被檢抗原或抗體的量與產(chǎn)物顏色成正比。 間接法間接法（檢測抗體）（檢測抗體） ： 將將酶標(biāo)記在抗抗體酶標(biāo)記在抗抗體上，當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，上，當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后， 再用酶標(biāo)抗抗體來檢查抗體是否與抗原結(jié)合。再用酶標(biāo)抗抗體來檢查抗體是否與抗原結(jié)合。 雙抗體夾心法雙抗體夾心法（檢測抗原）（檢測抗原）： 先用一種未標(biāo)記的抗體包被酶標(biāo)板，然后每孔加入待測抗原，洗滌除先用一種未標(biāo)記的抗體包被酶標(biāo)板，然后每孔加入待測抗原，洗滌除 去未結(jié)合抗原。然后加入對該抗原特異的第二抗體去未結(jié)合抗原。然后加入對該抗原特異的第二抗體-酶結(jié)合物（形成了酶結(jié)合物（形成了 抗體抗體-抗

26、原抗原-抗體抗體三明治夾心層），再加入酶的底物，觀察顏色反應(yīng)。三明治夾心層），再加入酶的底物，觀察顏色反應(yīng)。 直接法直接法間接法間接法 （檢測抗體）（檢測抗體） 雙抗體夾心法雙抗體夾心法 （檢測抗原）（檢測抗原） 3、放射免疫測定（radioimmunoassay，RIA） 放射免疫測定是一種以放射性同位素作為標(biāo)記物，將同位素 分析的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性這兩大特點結(jié)合起來 的測定技術(shù)。又分為放射免疫分析法和放射免疫測定自顯影 法。放射免疫技術(shù)靈敏度極高，能測得毫微克至微微克（10- 910-12g）的含量，廣泛用于激素、核酸、病毒抗原、腫瘤抗 原等微量物質(zhì)測定。但需特殊儀器及防護(hù)措施，

27、并受同位素 半衰期的限制。 4、免疫印跡（immunoblot或westernblot） 免疫印跡是在用于DNA分析的DNA印跡（southern blot）技術(shù) 基礎(chǔ)上發(fā)展起來的蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。其原理是將SDS-PAGE電 泳的高分辨率與免疫反應(yīng)的高度特異性相結(jié)合。待測樣品經(jīng) SDS-PAGE電泳分離后，轉(zhuǎn)移到固相介質(zhì)如醋酸纖維膜上，然 后用標(biāo)記抗體揭示特異抗原的存在。本方法廣泛用于蛋白質(zhì) 樣品分析研究。 1. 生物制品生物制品 凡是凡是人工免疫用人工免疫用的的抗原和抗體制品抗原和抗體制品以及以及診斷用診斷用的的 抗原和抗體制品統(tǒng)稱為生物制品?？乖涂贵w制品統(tǒng)稱為生物制品。 第五節(jié)、生物制品

28、及其應(yīng)用第五節(jié)、生物制品及其應(yīng)用 2. 分類分類 1）特異性免疫預(yù)防和治療劑）特異性免疫預(yù)防和治療劑 疫苗疫苗 活疫苗活疫苗 死疫苗死疫苗 常規(guī)疫苗常規(guī)疫苗 類毒素類毒素 自身疫苗自身疫苗 抗原抗原 亞單位疫苗亞單位疫苗 （預(yù)防）預(yù)防） 化學(xué)疫苗化學(xué)疫苗 新型疫苗新型疫苗 多肽疫苗多肽疫苗 基因工程疫苗基因工程疫苗 DNA疫苗疫苗 抗毒素抗毒素 抗病毒血清抗病毒血清 抗菌血清抗菌血清 抗體抗體 免疫球蛋白制劑免疫球蛋白制劑 （治療，應(yīng)急預(yù)防）（治療，應(yīng)急預(yù)防） 單克隆抗體單克隆抗體 免疫核糖核酸（免疫核糖核酸（iRNA） 胎盤球蛋白胎盤球蛋白 2）非特異性免疫治療劑）非特異性免疫治療劑 免疫調(diào)

29、節(jié)劑，免疫調(diào)節(jié)劑，能增強、促進(jìn)和調(diào)節(jié)免疫功能能增強、促進(jìn)和調(diào)節(jié)免疫功能 轉(zhuǎn)移因子（轉(zhuǎn)移因子（TF） 白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素-2(IL-2) 胸腺素胸腺素 細(xì)胞毒細(xì)胞毒T細(xì)胞細(xì)胞 卡介苗卡介苗 小棒桿菌小棒桿菌 干擾素干擾素 細(xì)胞因子細(xì)胞因子(cytokine)： 一類由細(xì)胞（主要免疫細(xì)胞）分泌的、極微量的、能影響一類由細(xì)胞（主要免疫細(xì)胞）分泌的、極微量的、能影響 其它細(xì)胞生長、分化和功能的具有廣譜生物學(xué)活性的其它細(xì)胞生長、分化和功能的具有廣譜生物學(xué)活性的小分小分 子多肽或糖蛋白子多肽或糖蛋白（對（對造血造血、免疫應(yīng)答免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)炎癥反應(yīng)和和創(chuàng)傷愈創(chuàng)傷愈 合合等具有重要調(diào)節(jié)作用）。等具有重要

30、調(diào)節(jié)作用）。 干擾素干擾素 白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素 集落刺激因子集落刺激因子 腫瘤壞死因子和淋巴毒素腫瘤壞死因子和淋巴毒素 促生長因子促生長因子 趨化因子趨化因子 思考題思考題 1. 如何制備類毒素和抗毒素？如何制備類毒素和抗毒素？ 2. 簡述外毒素、類毒素和抗毒素三者的關(guān)系？簡述外毒素、類毒素和抗毒素三者的關(guān)系？ 3. 名詞：名詞： 外毒素，內(nèi)毒素，類毒素外毒素，內(nèi)毒素，類毒素 抗原（完全抗原，半抗原，免疫原性，免疫反應(yīng)性），抗原（完全抗原，半抗原，免疫原性，免疫反應(yīng)性）， 抗原決定簇，抗體，單克隆抗體，干擾素抗原決定簇，抗體，單克隆抗體，干擾素 凝聚反應(yīng)，沉淀反應(yīng)凝聚反應(yīng)，沉淀反應(yīng) 酶聯(lián)免疫吸附測定（酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA） 每種細(xì)菌的細(xì)胞都是一個包含多種抗原成分的復(fù)合體每種細(xì)菌的細(xì)胞都是一個包含多種抗原成分的復(fù)合體 5）主要的微生物抗原）主要的微生物抗原 菌體抗原：菌體抗原：是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖(LPS)的的 多糖側(cè)鏈，與外膜連接。多糖側(cè)鏈，與外膜連接。 過去稱過去稱O抗原?？乖?。 表面抗原表面抗原: 指包圍在細(xì)菌細(xì)胞壁外層的抗原，主要是指包圍在細(xì)菌細(xì)胞壁外層的抗原，主要是莢膜或微莢膜抗原莢膜或微莢膜抗原。 （沙門氏菌沙門氏菌的表面抗原稱為的表面抗原稱為ViVi抗原抗原；志賀氏菌志賀氏菌的表面抗原