農(nóng)藥生物測(cè)定[專業(yè)研究]

1、農(nóng)藥生物測(cè)定復(fù)習(xí)重點(diǎn)農(nóng)藥生物測(cè)定的簡(jiǎn)史第一時(shí)期：19世紀(jì)末 1920至1923年間:研究出測(cè)定白喉抗毒素含量的標(biāo)準(zhǔn)方法.特點(diǎn)：都是用單個(gè)動(dòng)物體作直接的效力測(cè)定，將待測(cè)的藥劑與標(biāo)準(zhǔn)藥劑相比較來(lái)估計(jì)其相對(duì)藥效。 第二時(shí)期：20世紀(jì)30年代至20世紀(jì)70年代1937年歐文(J.O.Irvin)首先提出了系統(tǒng)的生物測(cè)定方法報(bào)告;1947年芬尼(D.J.Finney)出版了系統(tǒng)的生物測(cè)定統(tǒng)計(jì)方法;1950年芬尼及古德溫(L.G.Goodwin)出版生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化一書(shū);1957年布斯維納（J.R.Busvine）出版殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定評(píng)述;1959年張宗炳在其昆蟲(chóng)毒理學(xué)一書(shū)中,以專章對(duì)殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定及統(tǒng)計(jì)分析

2、作了系統(tǒng)的論述;1963年張澤溥等出版殺蟲(chóng)劑及殺菌劑的生物測(cè)定;1984年張澤溥出版生物測(cè)定統(tǒng)計(jì)專著。特點(diǎn)：研究出以生物群體為反應(yīng)基礎(chǔ)的生物測(cè)定方法，提高了測(cè)定精度。第三時(shí)期：20世紀(jì)70年代至今1. 研究利用昆蟲(chóng)神經(jīng)電生理方法檢測(cè)化合物對(duì)昆蟲(chóng)的拒食活性已取得進(jìn)展。2. 殺菌劑也由以傳統(tǒng)的病原菌離體試驗(yàn)方法為主，轉(zhuǎn)變?yōu)榧闹髦参锷系幕铙w試驗(yàn)為主。3. 20世紀(jì)80年代以來(lái)介于活體與離體之間的植物組織培養(yǎng)生物測(cè)定方法受到了廣泛的重視，有可能發(fā)展成一類新的殺菌劑生物測(cè)定方法。如適用于細(xì)菌性病害篩選的塊根法；適用于大麥白粉病篩選的芽鞘表皮法等。第四時(shí)期：20世紀(jì)70年代至今 發(fā)展趨勢(shì)：1.隨著分子生物

3、學(xué)及生理、生化方面研究技術(shù)的提高，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)和生化技術(shù)進(jìn)行生測(cè)的研究亦發(fā)展很快，如對(duì)新藥劑的篩選及利用酶學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行害物抗藥性的監(jiān)測(cè)和增效劑的篩選等等。2.由于電子計(jì)算機(jī)軟、硬件的迅速發(fā)展，農(nóng)藥生物測(cè)定中的統(tǒng)計(jì)分析，早已普遍程序化和微機(jī)化，使生物測(cè)定結(jié)果的分析計(jì)算更加簡(jiǎn)便、快捷，也更加準(zhǔn)確、可靠。農(nóng)藥生物測(cè)定中應(yīng)注意的幾點(diǎn)：1.運(yùn)用特定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)；2.在一定條件下（局部控制）進(jìn)行 ；3.均以群體反應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具。農(nóng)藥生物測(cè)定的定義:運(yùn)用特定的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用生物對(duì)農(nóng)藥的反應(yīng)，并以生物統(tǒng)計(jì)為工具，分析供試對(duì)象在一定條件下的效應(yīng)，來(lái)度量某種農(nóng)藥的生物活性。 農(nóng)藥生物測(cè)定的內(nèi)容及應(yīng)用

4、1.測(cè)定農(nóng)藥對(duì)昆蟲(chóng)、螨類、病原菌、線蟲(chóng)、雜草以及鼠類等靶標(biāo)生物的毒力或藥效2.研究農(nóng)藥對(duì)植物的生理作用3.篩選新農(nóng)藥品種4.研究化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性關(guān)系的規(guī)律，為定向創(chuàng)制新農(nóng)藥提供依據(jù)5.研究農(nóng)藥的理化性質(zhì)及加工劑型與毒效關(guān)系，提高農(nóng)藥的使用效果6.研究有害生物的生理狀態(tài)及外界環(huán)境條件與藥效的關(guān)系，以便提高農(nóng)藥使用水平，做到適時(shí)用藥7.測(cè)定不同農(nóng)藥混用的效力，為農(nóng)藥的合理混用及尋找增效劑提供依據(jù)8.對(duì)有害生物抗藥性的監(jiān)測(cè)和研究克服或延緩抗藥性發(fā)展的有效措施9.研究農(nóng)藥的作用機(jī)理及生理效應(yīng)10.還可利用敏感生物（如蚊幼蟲(chóng)等）來(lái)測(cè)定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。11.測(cè)定農(nóng)藥對(duì)溫血?jiǎng)游锛坝幸嫔锏?/p>

5、毒性農(nóng)藥生物測(cè)定基礎(chǔ)1.藥劑濃度的表示方法:(1)百分濃度(2)百萬(wàn)分濃度（ppm）(3)倍數(shù)法 (4)波美度(1)百分濃度:分容量百分濃度和質(zhì)量百分濃度兩種。 液體與液體之間配藥時(shí)常用容量百分濃度。 固體與固體或固體與液體之間配藥時(shí)多用質(zhì)量百分濃度。新增登記和生產(chǎn)許可的農(nóng)藥產(chǎn)品，其有效成分含量原則上統(tǒng)一以質(zhì)量百分含量（%）表示。(2)百萬(wàn)分濃度（ppm） ppm：part per million（百萬(wàn)分之） 10-6 ppb： part per billion（十億分之） 10-9 ppt： part per trillion（萬(wàn)億分之） 10-12與“”一樣，ppm、ppb、ppt 不是濃

6、度單位。但可定義為摩爾比、體積比、質(zhì)量比或質(zhì)量體積比等。 (2)百萬(wàn)分濃度:即100萬(wàn)份藥液或藥粉中含有這種藥劑成分的份數(shù)，以10-6(ppm)表示，其基本單位為百萬(wàn)分之一。常用mg/kg（g/g）或mg/L （g/mL）表示，即每L或每kg物質(zhì)中所含的物質(zhì)的mg數(shù)。如：1ppm阿維菌素丙酮溶液1mg/L.3)倍數(shù)法內(nèi)比法：稀釋100倍或100倍以下計(jì)算稀釋量時(shí)，要扣除原有藥劑所占的那一份數(shù)量。如：稀釋50倍時(shí)，表示用藥劑1份加水49份。 外比法：稀釋100倍以上計(jì)算稀釋時(shí)，則不扣除原有藥劑所占的那一份。如：稀釋1000倍，則用原藥劑1份加水1000份。在稀釋農(nóng)藥時(shí),如果未注明按容量稀釋則均按

7、質(zhì)量計(jì)算！(4)波美度石硫合劑有效成分的表示單位，用“oBe”表示，它表示濃度與比重的正相關(guān)。(1)百分濃度和百萬(wàn)分濃度之間的換算 百萬(wàn)分濃度（ppm）=10000百分濃度,如:75%的多菌靈丙酮溶液，為多少ppm？ 由上式得：1000075=750000（ppm） 即: 750000 ppm(2)百分濃度和稀釋倍數(shù)之間的換算百分濃度（%）=原藥劑濃度稀釋倍數(shù)100%如：90%的敵百蟲(chóng)稀釋1000倍后的藥液百分濃度為多少？ 由上式得90%1000=0.09% 即得為0.09%(3)百分濃度與有效成分之間的換算當(dāng)原藥劑的比重等于或近似1時(shí)，百分濃度與有效成分（g）之間的換算關(guān)系為: 藥液有效成分

8、（g）=毫升數(shù)藥液濃度如：25%功夫菊酯乳油100毫升，含有多少功夫菊酯有效成分？ 解：10025%=2.5（g）波美度和稀釋倍數(shù)之間的換算 重量稀釋倍數(shù)(加水重量倍數(shù))原液波美度數(shù)-1需用波美度數(shù)= 容量稀釋倍數(shù)(加水體積倍數(shù))原液波美度(145-需用藥液波美度) -1需用藥液波美度(145-原液波美度) =(1) 稀釋劑用量的計(jì)算公式 例： 將10毫升20殺滅菊酯乳油稀釋成50ppm的藥液，需用多少水？解：原藥劑的量10毫升 原藥劑濃度20%2010000ppm 所配制的藥劑濃度50ppm根據(jù)公式 102000005040 000(毫升)40(升)(2) 原藥劑用藥量的計(jì)算公式例如：50敵

9、敵畏配100公斤含量為500ppm的藥液，需要原藥多少？解：所配藥劑量100公斤（kg）,所配制藥劑濃度500ppm, 原藥劑濃度50%500 000ppm根據(jù)公式 100500500 0000.1（公斤）100克(3)倍數(shù)法計(jì)算公式當(dāng)稀釋倍數(shù)在100倍以下時(shí)（內(nèi)比法）:當(dāng)稀釋倍數(shù)在100倍以上時(shí)（外比法）:例（內(nèi)比法）： 需配制98公斤20 敵稗乳油50倍液用于水稻秧苗除草，求用藥量是多少？ 解：所需藥劑量98公斤 稀釋倍數(shù)50 根據(jù)公式 98(50-1) 2公斤例（外比法）：需配制2.5敵殺死乳油稀釋2000倍液10升，求需加2.5乳油多少？ 解：所需藥劑重量10升 稀釋倍數(shù)2000 根據(jù)

10、公式 1020000.005升5豪升 用64%殺毒礬可濕性粉劑750X防治黃瓜霜霉病調(diào)查情況如下： 請(qǐng)計(jì)算藥前及第一次藥后10天及第二次藥后15天的病指。 請(qǐng)計(jì)算第一次藥后10天及第二次藥后15天的防效。 如果畝用藥液為75升，每畝需要多少克64%殺毒礬WP？室內(nèi)毒力測(cè)定和田間試驗(yàn) 一般地，農(nóng)藥生物測(cè)定指在室內(nèi)進(jìn)行的測(cè)定。 室內(nèi)毒力測(cè)定主要是測(cè)定一種藥劑的毒性、毒力或比較幾種藥劑毒力的大小。室內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果，除可作為藥劑的初步篩選的根據(jù)外，還可為田間試驗(yàn)提供參考。有時(shí)在田間發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題必須拿回室內(nèi)作比較精細(xì)的試驗(yàn)研究。 田間試驗(yàn)主要測(cè)定或比較藥劑在田間條件下的藥效，其結(jié)果比較接近實(shí)際情況，為生產(chǎn)防

11、治提供可靠的依據(jù)。 農(nóng)藥生物測(cè)定試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則（1）相對(duì)控制測(cè)定條件（2）必須設(shè)立對(duì)照 （3）各種處理必須設(shè)置平行重復(fù) （4）運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果（1）相對(duì)控制測(cè)定條件 環(huán)境條件：溫度、濕度、光照。 供試生物：標(biāo)準(zhǔn)化生物（同一環(huán)境下培養(yǎng)的，發(fā)育一致）。 供試藥劑：室內(nèi)生物測(cè)定必須純凈（原油或原粉），至少要有確切的有效成分含量。施藥要均勻一致。 （2）必須設(shè)立對(duì)照 對(duì)照(check，符號(hào)CK) ，對(duì)照有三種： 空白對(duì)照： 非藥劑成分對(duì)照 ：如丙酮對(duì)照。 標(biāo)準(zhǔn)藥劑對(duì)照：多菌靈 根據(jù)具體情況和測(cè)定要求確定試驗(yàn)中所需設(shè)置的對(duì)照。（3）各種處理必須設(shè)置平行重復(fù) 任何實(shí)驗(yàn)都必須能夠重復(fù)，這是具有科學(xué)性

12、的標(biāo)志。 增加重復(fù)是減少誤差的一種方法。 一般室內(nèi)毒力測(cè)定要求至少重復(fù)3次。田間小區(qū)藥效試驗(yàn)，則要求重復(fù)4-5次。室內(nèi)毒力測(cè)定線性濃度范圍的尋找（1）濃度（或劑量）范圍的尋找將待測(cè)樣品分別配制成跨度較大的幾個(gè)濃度，根據(jù)試驗(yàn)所需要的方法測(cè)定每個(gè)濃度（或劑量）對(duì)供試生物的活性，尋找其效應(yīng)值（如死亡率、抑制率等）在1%-99%之間的濃度（或劑量），即可確定大致的濃度范圍（2）設(shè)置濃度（或劑量）在所得到的大致濃度范圍內(nèi)，設(shè)計(jì)一系列不同的藥劑濃度（或劑量），濃度梯度可以根據(jù)藥劑特點(diǎn)及初步確定的濃度范圍設(shè)置成等比、等差或其它形式，然后測(cè)定不同濃度藥劑對(duì)目標(biāo)生物的效應(yīng)值。（3）最終的濃度確定:若可選出5-7

13、組滿足上面兩個(gè)條件的數(shù)據(jù)，即所設(shè)置濃度合理。反之，則需要重新設(shè)置濃度。注意：殺蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組的死亡率不能超過(guò)20%殺蟲(chóng)劑室內(nèi)生物測(cè)定殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定技術(shù)的一般原則（一）控制影響因素 環(huán)境條件、昆蟲(chóng)、藥劑、溶劑等。（二）必須設(shè)立對(duì)照 空白對(duì)照、溶劑對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)藥劑對(duì)照。（三）必須設(shè)重復(fù) 一般重復(fù)3次，每重復(fù)2050頭試蟲(chóng)。（四）供試的目標(biāo)昆蟲(chóng)盡量選擇農(nóng)作物害蟲(chóng)，在同一環(huán)境條件下人工飼養(yǎng),或在田間同一環(huán)境條件下抓捕，盡量一致。 標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲(chóng)：是指在生物測(cè)定中被普遍采用的，具有一定代表性和經(jīng)濟(jì)意義，并且抗藥力穩(wěn)定均勻的農(nóng)藥殺蟲(chóng)毒力和毒效指示的試蟲(chóng)群體。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲(chóng)的要求1、易飼養(yǎng)，繁殖力強(qiáng)，不互相殘殺

14、，不受季節(jié)限制，能保證常年充分供應(yīng)；2、要求有一定的代表性和經(jīng)濟(jì)意義。3、生活力及抗藥力要穩(wěn)定和均勻一致；4、選用合適蟲(chóng)期、齡期、年齡的試蟲(chóng)群體或混合群體作為測(cè)試對(duì)象。5、便于進(jìn)行移取處理標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)昆蟲(chóng)的移取方法(一) 一般移取法(二) 趨光法(三) 麻醉法: 1、CO2法；2、揮發(fā)蒸氣法 ；3、冷凍法 ；4、乙醚低溫麻醉法(四)吸蟲(chóng)法(五)自行運(yùn)動(dòng)移蟲(chóng)法二、初步毒力試驗(yàn)1、應(yīng)用范圍:主要用于對(duì)大量化合物的殺蟲(chóng)活性篩選用于為田間防治害蟲(chóng)篩選有效藥劑初步毒力試驗(yàn)又叫過(guò)篩試驗(yàn)（screen test）。其目的是：確定一種新化合物對(duì)某一目標(biāo)昆蟲(chóng)是否有毒，以便確定是否有必要進(jìn)一步做毒殺作用方式或精密的毒

15、力測(cè)定。比較粗放的初步試驗(yàn)，對(duì)篩選新農(nóng)藥來(lái)說(shuō)是更為主要的。初步毒力測(cè)定的方法:噴霧 噴粉 浸漬食料混藥法 精密的毒力測(cè)定:就是我們常說(shuō)的毒力測(cè)定。指在特定條件下衡量某種殺蟲(chóng)劑對(duì)某種昆蟲(chóng)毒力程度的一種方法?？捎脕?lái)了解某一殺蟲(chóng)劑對(duì)某一害蟲(chóng)的毒力程度，也可用來(lái)比較幾種殺蟲(chóng)劑對(duì)某一種昆蟲(chóng)的毒力差別；1、內(nèi)容: 毒殺作用方式的測(cè)定毒力程度的測(cè)定定量取食法、夾毒葉片法、液滴飼喂法、口腔注射法葉片夾毒法致死中量的計(jì)算：根據(jù)取食面積、單位面積上的著藥量及試蟲(chóng)體重，求出每頭試蟲(chóng)的單位體重受藥量，排序，分組:生存組、生死組、死亡組。葉片夾毒法致死中量的計(jì)算： A:中間組每項(xiàng)死蟲(chóng)單位體重藥量累加除以總死蟲(chóng)數(shù)得A。B

16、:中間組每項(xiàng)活蟲(chóng)單位體重藥量累加除以總死蟲(chóng)數(shù)得B。經(jīng)典夾毒葉片法的缺點(diǎn)：操作麻煩.需要控制取食量。濕度不好控制，導(dǎo)致葉片干縮，難測(cè)定面積。要求施藥均勻。殺蟲(chóng)劑胃毒毒力測(cè)定技術(shù)改進(jìn)夾毒葉片法改進(jìn)夾毒葉片法的特點(diǎn)：將不定量進(jìn)食改為定量給食，并用點(diǎn)滴藥量代替噴粉或噴霧。殺蟲(chóng)劑的觸殺毒力測(cè)定技術(shù)局部施藥法點(diǎn)滴法（topical application) 將一定濃度的藥液點(diǎn)滴于蟲(chóng)體的某一部位，多在幼蟲(chóng)的前胸背板上，藥劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁形成藥膜而侵入體內(nèi)。熏蒸殺蟲(chóng)作用測(cè)定方法：（1）二重皿法（2）三角瓶法（3）廣口瓶法葉蝶法：拒食率（%）=(對(duì)照取食面積處理取食面積)/對(duì)照取食面積100溫濕度對(duì)殺蟲(chóng)劑

17、的熏蒸毒力影響較大，一般在25、相對(duì)濕度50%條件下測(cè)定。熏蒸劑的藥量計(jì)算：以單位容積內(nèi)的藥劑用量來(lái)表示（mg/L或ml/L）。校正死亡率（%）處理死亡率對(duì)照死亡率1對(duì)照死亡率100校正死亡率公式的局限性1、只有當(dāng)自然死亡與藥劑所引起的死亡沒(méi)有關(guān)系時(shí),自然死亡率在5%20%之間時(shí)才運(yùn)用；2、如自然死亡率過(guò)大或藥劑處理對(duì)自然死亡率有影響時(shí)均不運(yùn)用；3、如自然死亡率在5%以下，可將處理組死亡率減去自然死亡率即可得到校正，即：校正死亡率=處理組對(duì)照組4、如自然死亡率20%時(shí)，則表示該目標(biāo)昆蟲(chóng)種群不宜供試驗(yàn)用，試驗(yàn)結(jié)果不可靠。致死中量（Medium Lethal Dose）LD50：指在一定條件下，可

18、致供試生物半數(shù)死亡機(jī)會(huì)的藥劑劑量，表示單位：mg/kg、g/g或g/頭。致死中濃（Medium Lethal Concentration）LC50：可致供試生物半數(shù)死亡機(jī)會(huì)的藥劑濃度。致死中時(shí)(Medium Lethal Time)LT50或擊倒中時(shí)(Medium Knockdown Time)KT50即殺死或擊倒昆蟲(chóng)群體一半個(gè)體所需的時(shí)間。相對(duì)毒力指數(shù)昆蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑的敏感性分布是一個(gè)偏常態(tài)分布，殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的效應(yīng)的增加不是和劑量的增加成比例，而是與劑量增加的比例成比例。毒力指數(shù)（TI）(%)標(biāo)準(zhǔn)殺蟲(chóng)劑LD50*100/供試殺蟲(chóng)劑LD50混劑（M）的實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）(%)標(biāo)準(zhǔn)殺蟲(chóng)劑的LD5

19、0*100/混劑M的LD50混劑M的理論毒力指數(shù)（TTI）A藥的TIM藥中的A% B藥的 TIM藥中的B%混劑M的共毒系數(shù)（CTC）ATITTI100增效與否判定標(biāo)準(zhǔn)：CTC120增效作用；CTC80 120相加作用；CTC80拮抗作用 實(shí)際死亡率與理論死亡率之差或協(xié)同毒力指數(shù)大于20時(shí)屬增效，小-20屬拮抗。 協(xié)同毒力指數(shù)（）實(shí)際死亡率理論死亡率理論死亡率 100一般認(rèn)為預(yù)期LD50/實(shí)測(cè)LD50的毒力比值在0.52.6之間屬相加作用，大于2.6時(shí)屬增效，小于0.5屬拮抗。 實(shí)例：菊殺混劑(3:7混配)對(duì)棉鈴蟲(chóng)3齡幼蟲(chóng)毒力測(cè)定數(shù)據(jù)為：氰戊菊酯LD500.6598g/g殺螟硫磷LD5078.2

20、013g/g菊殺混劑LD501.0831g/g通過(guò)計(jì)算，請(qǐng)說(shuō)明這兩種農(nóng)藥混配后有無(wú)增效作用？菊殺混劑理論毒力指數(shù)（TTI）(0.65980.6598)30%100+ (0.659878.2013) 70%100 =30.6菊殺混劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）(0.65981.0831)100=60.9菊殺混劑共毒系數(shù)（CTC）60.930.6100199120說(shuō)明：氰戊菊酯與殺螟硫磷以3:7混配具增效作用。殺菌劑的生物測(cè)定殺菌劑生物測(cè)定：以病菌（活體或離體）為測(cè)定對(duì)象，評(píng)價(jià)各種殺菌劑的毒效一、離體測(cè)定：這種測(cè)定中僅包括病菌和藥劑，判斷藥劑的毒力主要是根據(jù)病菌與藥劑接觸后的反應(yīng)（如孢子不萌發(fā)，不長(zhǎng)菌絲

21、等）。優(yōu)點(diǎn)：易于控制、操作簡(jiǎn)便迅速、精確度較高。缺點(diǎn)：測(cè)定結(jié)果與生產(chǎn)實(shí)際距離較大，而有些化合物必須在寄主植物體內(nèi)活化后才起殺菌作用?？赡苈┖Y一些未來(lái)頗具潛力的化合物。二、活體測(cè)定:這一類型的方法包括病原菌、藥劑和寄主植物。殺菌劑毒力以寄主植物的發(fā)病情況（普遍程度、嚴(yán)重程度）來(lái)評(píng)判。特點(diǎn)：測(cè)定周期較長(zhǎng)，操作比較復(fù)雜，大田藥效測(cè)定常受季節(jié)限制，測(cè)定時(shí)受多種因子的影響，致使結(jié)果不穩(wěn)定。但在應(yīng)用實(shí)際較接近，有很大實(shí)用價(jià)值殺菌劑毒力測(cè)定步驟：1、 在室內(nèi)進(jìn)行殺菌劑生物測(cè)定；2、在控制條件下，進(jìn)行殺菌劑溫室盆栽生物測(cè)定；3、在自然條件下，進(jìn)行殺菌劑的大田藥效試驗(yàn)。清潔：排除其它化合物的影響。滅菌：用物理或

22、化學(xué)方法滅菌，完全除去或殺死器皿表面和內(nèi)部的一些微生物。消毒：消毒是消滅或減少某些病原微生物，而不是消滅一切微生物。在進(jìn)行分離工作時(shí)，植物組織表面往往要消毒、去雜而?！罢妗保ú≡?）物理滅菌干熱滅菌：利用干熱空氣來(lái)滅菌溫度：160180，不宜超過(guò)180。時(shí)間：160，2h；180，1h。為提高效果，可用間歇滅菌法，熱-冷-熱（溫度可低些）。濕熱滅菌：高壓蒸氣滅菌較常用，效率高。干熱：160，2h，滅菌濕熱：121，20min 2）化學(xué)滅菌：殺菌力極強(qiáng)的洗液有：1%升汞活液、5%福爾馬林、70%酒精次氯酸鹽3）過(guò)濾滅菌：細(xì)菌不能通過(guò)，如過(guò)濾漏斗可用來(lái)濾出含蛋白的培養(yǎng)基、血清及抗藥素中的細(xì)菌。

23、 （二）植物病原菌的培養(yǎng)步驟（要求：在無(wú)菌條件下進(jìn)行）1、培養(yǎng)基的制備2、接菌3、保存對(duì)供試菌的要求1、較易繁殖、菌落邊緣明顯，產(chǎn)菌絲、孢子量合適；2、要求有一定代表性、經(jīng)濟(jì)意義，為重要的農(nóng)業(yè)病菌；3、生活力、抗性均勻、穩(wěn)定、一致；4、便于操作、移取等。殺菌劑皿內(nèi)生物測(cè)定:（一）孢子萌發(fā)法（二）含毒介質(zhì)培養(yǎng)法（三）葉碟法（一）孢子萌發(fā)法基本原理：將供試藥劑附著在載玻片上或其它平面上，然后將供試病菌孢子懸浮液滴在上面（或?qū)㈡咦討腋∫号c藥液混合后滴在玻片上），在保溫、保濕條件下培養(yǎng)一定時(shí)間后鏡檢以孢子萌發(fā)力判斷殺菌劑毒力。優(yōu)點(diǎn)：快速、試驗(yàn)當(dāng)天即可得結(jié)果。 步驟：1. 萌發(fā)表面的處理2. 藥劑在玻片

24、上的附著3. 孢子懸浮液的準(zhǔn)備4. 定溫保濕培養(yǎng)5. 結(jié)果檢查及表示孢子懸浮液的準(zhǔn)備:菌種應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)菌種，供試菌種應(yīng)符合以下條件 菌種純粹，在一般培養(yǎng)基上易大量產(chǎn)生孢子； 多代繁殖不易產(chǎn)生變異； 孢子個(gè)體較大，易于在顯微鏡下觀察萌發(fā)情況； 無(wú)菌水，攪勻 二層紗布過(guò)濾 除去菌絲體及破碎培養(yǎng)基 菌種懸浮 液 菌種 離心 無(wú)菌水洗 洗凈的孢子 在分類上有一定的代表性，而且是重要的植物病害病原菌。 調(diào)至最高濃度（1010倍，40個(gè)孢子），一定時(shí)間后（對(duì)照萌發(fā)率在85%以上）檢查孢子萌發(fā)率，一般在低倍鏡下，隨機(jī)檢查200個(gè)孢子。 抑制孢子萌發(fā)率（%） 對(duì)照孢子萌發(fā)率處理孢子萌發(fā)率 對(duì)照萌發(fā)率 100 (二) 含毒介質(zhì)培養(yǎng)法：1. 水平擴(kuò)散法（又叫抑菌圈法或平面法）2. 生長(zhǎng)速率法3. 最低抑制濃度法1. 水平擴(kuò)散法（又叫抑菌圈法或平面法）步驟：制備雙層培養(yǎng)基、擺放牛津杯放帶濾紙片、低溫放置、適溫培養(yǎng)、結(jié)果檢查優(yōu)點(diǎn)：精確度高，操作簡(jiǎn)單，很快可得到結(jié)果.缺點(diǎn)：測(cè)定結(jié)果受藥劑溶解后和擴(kuò)散能力影響很大，有一定局限性，另外，對(duì)嚴(yán)格的寄生菌不適合。2. 生長(zhǎng)速率法步驟： 制備菌餅； 制備帶毒培養(yǎng)基； 移菌餅； 結(jié)果檢查生長(zhǎng)抑制率（%）對(duì)照的菌落直徑處理的菌落直