AKTAexplorer標準操作及維護保養(yǎng)規(guī)程

1、1 目的闡明和規(guī)范運用 AKTAexplorer 蛋白純化系統(tǒng)。2 范圍本操作規(guī)程適用于 AKTAexplorer 蛋白純化系統(tǒng)的操作使用及維護保養(yǎng)。3 職責 儀器操作人員負責儀器的正確使用，清潔及基本維護。儀器負責人負責監(jiān)督和培訓其他人員對儀器的 正確使用，同時儀器負責人對儀器進行定期維護和保養(yǎng)。4 引用4.1 AKTA_Purifier 操作手冊4.2 AKTA_explorer 英文操作手冊5 內(nèi)容5.1 準備工作5.1.1 將預(yù)先配置好的緩沖液，用 0.45 微米濾膜過濾，然后進行超聲脫氣。5.1.2 將待分離樣品用 0.45 微米濾膜進行過濾。5.1.3 將對應(yīng)的管路放入對應(yīng)的緩沖液

2、。5.2 啟動層析系統(tǒng)5.2.1 連接好電源打開 AKTAexplorer 蛋白純化系統(tǒng)電源，打開電腦點擊操作軟件。5. 2.2 排出緩沖液管路氣泡 檢查進液管路有無氣泡，少量氣泡可進行泵洗排氣，首先將管路濾頭放入超純水中，點擊操作軟件“system control” 中manual”操作菜單，然后在 pump”中點擊pump wash explorer” 同時選擇待要排氣的管路，選擇完成點擊execute”，泵洗結(jié)束點擊end”。當管路中氣泡仍未排除時，ma nual”操作菜單中點擊flowpath ”選擇未排盡氣泡管路，點擊 execute”，用注射器在 對應(yīng)的泵頭上方閥門處抽出氣泡，點擊

3、“end”。5. 2.3 排除樣品泵管路氣泡將進樣管路放進超純水中，“manual”操作菜單中點擊sample flow ”設(shè)定流速10-20mL/min，flowpath ”中選擇管路，“ Alarms ”設(shè)定樣品泵壓力 0.3MPa，點擊execute”排氣結(jié)束后點擊 “ end”。當管路中氣泡仍未排除時，用注射器連接在injection valve V1的2號位抽氣。directload ”設(shè)定流速樣品才過柱子，在sample flow ”改變流速樣品不過柱子。5.2.4 管路液體置換將使用的管路放進純化水中，“manual”操作菜單，然后在pump”中點擊pump washexplor

4、er ”同時選擇管路，選擇完成點擊execute”，泵洗結(jié)束點擊end”。將管路放到對應(yīng)的緩沖液中，置換成相應(yīng)的緩沖液。5.2.5 連接層析柱連接層析柱若是預(yù)裝填柱，預(yù)先設(shè)定一個小的流速1-5mL/min，“ pump alarm ”設(shè)定0.3MPa，先接上面不要太緊，再接柱子下端，擰緊柱子接頭檢查是否漏液5.3 手動操作純化樣品5.3.1 平衡層析柱通常用上樣緩沖液平衡5個柱體積，Manual操作菜單中pump ”設(shè)定流速，“ flowpath ”設(shè)定柱位、緩沖液進口、緩沖液流向、廢液出口F1，“ alarm”設(shè)定檢測波長、泵壓，選擇完成點擊“ execute”，平衡結(jié)束點擊“ end”。5

5、.3.2 上樣樣品環(huán)上樣上樣量較少時選擇樣品環(huán)上樣，樣品環(huán)接到 injection valve V1 的 2 號位和 6號位，注射器抽取上樣 緩沖液沖洗上樣環(huán)，沖洗緩沖液從 3 號位注入，注射器將樣品由 3 號位注入， Manual 操作菜單中“flowpath ”“ Inject valve ”選定“ i nje ct ” ，設(shè)置好其他參數(shù)，選擇完成點擊“execute” 上樣結(jié)束點擊“ end”。樣品泵上樣上樣量較大時選擇樣品泵上樣，Manual操作菜單中“ derict load ”設(shè)定上樣流速、上樣量大小，“alarm”設(shè)定樣品泵泵壓，“ flowpath ”選定進樣管路、柱位、流向、

6、廢液出口，選擇完成點擊“ execute”，上樣結(jié)束點擊“ en d”。5.3.3 方法洗脫及樣品收集5.3.3.1 沖洗未結(jié)合樣品 用起始緩沖液沖洗未結(jié)合到層析柱上的樣品，同時將未結(jié)合樣品收集以備最后結(jié)果分析。5.3.2 樣品洗脫和收集Manual操作菜單中設(shè)定好流速、柱位、流向、waste出口選擇F2（F2與收集器相連）、緩沖液進口、系統(tǒng)泵壓力（通常 0.3MPa）、檢測波長。在“ pump”中設(shè)定“ gradient target B 100% ”的各項參數(shù)。Frc”中設(shè)定收集器參數(shù)，“ Man fraction ”選定serpentine蛇形收集”Frc size”設(shè)定沒 管收集樣品量

7、，選擇完成點擊“execute”。5.4 編程操作柱子平衡、上樣、洗脫、收集可采用編程操作，通過運行程序來執(zhí)行各步驟實驗操作。Method Editor 頁面點擊 Method wizard， main selection 中選擇填料類別， column 中選擇柱子類型， column position 中選擇柱位，點擊 Next 設(shè)置檢測波長及緩沖液進口，點擊 Next 設(shè)置 Equilibration 參數(shù)， 點擊 Next 設(shè)置 sample injection 參數(shù)通常選擇( Manual/Sample direct loading )，點擊 Next 設(shè)置設(shè)置平衡 過程中收集器收集流

8、穿樣品參數(shù)，點擊Next設(shè)置收集器收集洗脫樣品參數(shù)，點擊Next設(shè)置洗脫參數(shù)。變成完畢運行方法進行洗脫。具體參照： AKTA explorer 方法編輯標準操作規(guī)程6 維護保養(yǎng)6.1 實驗結(jié)束時，應(yīng)先用水置換出所有管路的緩沖液，再用20% 乙醇置換出所有管路的水。應(yīng)盡可能避免保存在裝載緩沖液狀態(tài)過夜。尤以高鹽濃度洗脫緩沖液為甚，假如不能避 免應(yīng)于次日盡早用 System Wash Method 完成以蒸餾水將系統(tǒng)徹底清洗，才予以保存或再 更新使用其它緩沖液再次投入使用進行實驗操作。6.2 任何時間當不使用系統(tǒng)時，不要將 pH 電極留在流動池里。電極可作以下處理：從流動池卸下 pH 電極。先以蒸

9、餾水沖洗一遍，輕拭水份后，使其末端以其合適溶液泡浸保存。6.3 若長時間不使用系統(tǒng)，除用蒸餾水徹底清洗系統(tǒng)外。取下柱和pH 電極通過細管道替換柱，并安裝虛擬 pH 電極(如果使用)。然后用20%乙醇再沖洗所有使用的管件通道和所有的流動池一遍，然后并以此將系統(tǒng)保存。 UV 流動池也可以如上所述地用蒸餾水沖 洗然后用 20%乙醇通過流動池。6.4 每月定期保養(yǎng)處理或當發(fā)現(xiàn)假峰等問題出現(xiàn)時，可拆下柱子將所有的緩沖液入口管件置于0.5mol NaOH中，對所有的入口管件通路運行System Wash Method，以流速為每分鐘 5 毫升流速，將整個系統(tǒng)充分沖洗若 60分鐘。然后立即用超純水，將整個系統(tǒng)運行System Wash Method 加以沖洗 20 分鐘。6.5 當收集器托盤或收集用的管子發(fā)生變化時，應(yīng)及時調(diào)整運行程序中的相應(yīng)參數(shù)，以免造成跳管或收集體積錯誤情況發(fā)生。6.