凝聚胺法交叉配血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、凝聚胺法交叉配血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 原理凝聚胺（ polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強度，減少 紅細胞周圍的陽離子云，促進血清（漿）中的抗體與紅細胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再 加入帶亞電荷的高價陽離子多聚物 -凝聚胺溶液，中和紅細胞表面的負電荷，縮 短細胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使 IgG 型抗體直接凝集紅細胞。加 入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會因電荷中和而分散，而由抗 體介導(dǎo)的特異性凝集則不會分散。2. 標(biāo)本采集：2.1 標(biāo)本種類：抽取靜脈血 3-4ml 待凝固后分離血清，將細胞配成 5鹽水懸液將供血者血 樣以同樣方法分離血清 （漿 ）和紅細胞懸液。2.2

2、 標(biāo)本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主張用 EDTAK2（mg/dz）抗凝標(biāo)本應(yīng)無溶 血，切標(biāo)簽齊全。3. 標(biāo)本儲存：急診標(biāo)本 30分鐘內(nèi)完成操作，標(biāo)本應(yīng)至 4冰箱保存 7 天。4. 標(biāo)本運輸：室溫運輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細菌污染。溶血標(biāo)本，標(biāo)簽不齊全不能作測定。6. 試劑：6.1 試劑名稱：1/ 4凝聚胺試劑 (polymatching)6.2 試劑生產(chǎn)廠家：(臺資)xxxx生物技術(shù)有限公司。6.3 試劑組成：試劑1. 低離子介質(zhì) (LowLonicMedium，LIM).試劑打開使用后，可置室溫貯存，未 開封者 2-10度貯存，有效期為 2 年。試劑2. 凝聚胺溶液 (Polybre

3、neSolution).貯存及有效期同上。試劑3. 重懸液 (ResuspendingSolution)貯. 存及有效期同上。試劑4.8.5生理鹽水。7. 儀器：7.1 血型血清 xx 離心機：XTL-4.7xx 離心機械研究所7.2 離心機：xx 手術(shù)器械廠7.3 電熱恒溫水箱：2/ 4xx 長源實驗設(shè)備廠7.4xx：OLYMPUS(xx)8. 操作步驟及結(jié)果判斷：8.1 供受者紅細胞用生理鹽水配成 3-5的細胞懸液。加樣量均為：血清 2 滴，紅細胞懸液 1 滴。主管：受血者血清 +供者紅細胞懸液 ;次管： 受者紅細胞懸液 +供者血清 ;(陰陽對照管另設(shè) )。8.2 各管分別加低離子介質(zhì)0.

4、6ml 混勻置室溫 1分鐘。加凝聚胺溶液 2 滴，混勻，置室溫 15秒。8.31000g(3000rpm)，離心 18秒，棄上清液，管底保留約 2 滴液體。輕搖 試管，觀察是否形成凝塊。如未形成凝塊，則重做前面試驗。8.4加入 2滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結(jié)果。8.5 凝塊在 1分鐘內(nèi)分散，試驗結(jié)果為陰性，供受者血液配合 ;反之，如依照 為不同強度的凝塊，試驗結(jié)果判為陽性，供受者血液不配合。實驗結(jié)果必須在 3 分鐘內(nèi)判讀。9. 操作性能： 快速簡便，特異性強，靈敏度較高，重復(fù)性好。10. 超出范圍結(jié)果處理：10.1 細胞自凝：3/ 4在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致交叉配血假陽性 遇此現(xiàn)象可用 37-40生理鹽水洗滌紅細胞并置 37 水溶中輕輕搖動，觀察 結(jié)果。10.2 若病人血清 （血漿）含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加 4-6 滴 polybrene 溶液以中和肝素。10.3 紅細胞懸液為 5為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不 明顯易誤判。10.4 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血 型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。11. 方法局限性：11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。11.2 操作方法應(yīng)按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實 是否漏加血清。11