測試片使用說明環(huán)境李斯特

1、3 判讀手冊(cè) Petrifilm TMEnvironmental Listeria Plate該手冊(cè)能指導(dǎo)你掌握 3M TM Petrifilm TM 環(huán)境李斯特菌檢驗(yàn)測試片的使用。 如需更多信息，請(qǐng)與 3M 微生物產(chǎn)品代理聯(lián)系。3M TM Petrifilm TM Environmental Listeria (EL) 測試片是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基，含有選擇性試劑，營養(yǎng) 成分，冷水可溶性的凝膠和有助于菌落檢測的顯色指示劑。 Petrifilm EL 測試片可用于檢測或計(jì)數(shù)環(huán)境樣 本中的李斯特菌數(shù)。 Petrifilm EL 測試片檢測的李斯特菌包括單核增生李斯特菌(L.monocytoge

2、nes ) 英諾克李斯特菌 (L.innocua )，格氏 / 墨氏李斯特菌 (L.grayi/murrayi )，威爾李斯特菌 (L.welshimeri ) ，但不能區(qū)分各 種菌。環(huán)境條件和消毒劑可能會(huì)抑制或損傷微生物。緩沖蛋白胨緩沖液(Buffered Peptone Water, BPW) 能用作修復(fù)肉湯和 Petrifilm EL 測試片結(jié)合使用。但李斯特菌在緩存蛋白胨緩沖液中的修復(fù)過程 不是 增菌步驟。Petrifilm EL 測試片可用于定性，半定量，定量檢測。 需要進(jìn)一步的指導(dǎo)，請(qǐng)參考使用部分的提示。1. 圖 1 為長有李斯特菌的典型 Petrifilm EL 測試 片。判讀或

3、計(jì)數(shù)所有的紫紅色菌落為李斯特 菌。如果在 26-29 小時(shí)，有灰色或淡粉紅色菌落 存在，需繼續(xù)培養(yǎng)。在培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)，由灰色或 淡粉紅色加深為紫紅色的菌落應(yīng)判定為李斯特 菌。在最大培養(yǎng)時(shí)間 (30小時(shí) )仍保持灰色或淡粉 紅色的菌落不應(yīng)判讀為李斯特菌。不考慮或計(jì) 數(shù)圓形輪廓上的菌落，因?yàn)樗鼈儾皇苓x擇性培 養(yǎng)基的作用。定性判讀： 測試片檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 ( 如低，中， 高，或可接受和不可接受 )。定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)： 11。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀”部分來 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。TM TM2.

4、 該 Petrifilm EL 測試片在培養(yǎng) 30 小時(shí)后沒有菌 落生長，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。定性判讀： 測試片上未檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 (如低，中，3M Petrifilm Environmental Listeria Plate1 部分來區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 高，或可接受和不可接受 )。 定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)： 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀” 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。3. Petrifilm EL 測試片對(duì)李斯特菌具有選擇性，其 菌落顯示為紫紅色。定性判讀： 測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)

5、域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 ( 如低，中， 高，或可接受和不可接受 )。定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)： 84 。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判讀”部分來 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。3MTM PetrifilmTMEnvironmental Listeria PlateEnvironm4. 由于 Petrifilm EL 測試片的判讀方式有三種，所 以沒有建議的計(jì)數(shù)范圍。當(dāng)菌落密集時(shí)，按以 下方式判讀定性或半定量的結(jié)果，或估算定量 的結(jié)果。定性判讀： 測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 （ 如低，中， 高，或可接受和不

6、可接受 ）。定量判讀： 測試片上估算的李斯特菌數(shù)：約 460。當(dāng)大量李斯特菌存在時(shí)，通過計(jì)數(shù)兩個(gè)或 兩個(gè)以上的具有代表性方格的菌落數(shù)來估算。 計(jì)算每個(gè)方格的平均菌落數(shù)數(shù)后乘以 42。2 Petrifilm EL 測試片的接種面積近似 42 cm 將未開封的測試片貯藏在 8 C （46 F） 的環(huán)境 下，并在包裝上標(biāo)示的有 效期內(nèi)使用。在高濕度的 地方，最好在使用前將測 試片回復(fù)到室溫。5. 當(dāng)菌落數(shù)很多時(shí)，測試片上可能有許多小的， 不清楚的菌落，和 （或 ） 呈現(xiàn)全部的粉紅色至棕 色。定性判讀： 測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式

7、 （ 如低，中， 高，或可接受和不可接受 ）。定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)為多不可計(jì)（Too Numerous To Count, TNTC） 。該圖中的菌落 數(shù)近似 104。6. 背景顏色可能會(huì)因?yàn)榄h(huán)境樣本中的灰塵、泥 土、砂子、或其它沉淀物而發(fā)生變化，也可能 是因?yàn)椴蓸釉O(shè)備和 （或 ） 緩沖蛋白胨水 （修復(fù)液 ）的 品牌不同而引起。紫紅色菌落判讀為李斯特 菌。定性判讀： 測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀： 李斯特菌的含量應(yīng)記錄為對(duì)采樣 區(qū)域和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有指導(dǎo)意義的形式 （ 如低，中， 高，或可接受和不可接受 ）。定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)： 11。 請(qǐng)參考判讀手冊(cè)的“定量采樣與判

8、讀”部分來 計(jì)算每個(gè)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。ntal Listeria Plates 操作說明責(zé)任限定、儲(chǔ)存與后處理信息，和使用說明請(qǐng)參見產(chǎn)品的貯藏3. 為防止暴露于潮濕的環(huán)境中， 請(qǐng)不要冷藏已開封的測試片。 將膠帶封好的測試片貯藏在低 溫干燥的地方，保持時(shí)間不超 過 1 個(gè)月。請(qǐng)勿將測試片放在 溫度 25 C （77 F）和 （或 ）相對(duì)濕度 50%的環(huán)境2. 已開封的測試片，將開 口反折，用膠帶封好。樣品制備接種6. 用涂抹棒、海棉或其它采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。濕10 mL片前接種并用5. 在無菌環(huán)境下在收集的樣 品中添加 5 mL ， 20-30 壓板壓好C每，張滅測過試菌片的。緩沖蛋白胨

9、 水 (BPW) 溶液。濕潤劑可以是無菌水、緩沖蛋白胨水 (Buffered PeptoneWater, BPW) ，或中和緩沖 液，如 Letheen 肉湯或Dey/Engley (DE) 中和肉湯不要將 Petrifilm EL 測試片與 Vermont 培養(yǎng)基 (UVM) 、 Fraser 肉湯、李斯特菌增菌培 養(yǎng)基 (LEB) 或緩沖李斯特菌增 菌培養(yǎng)基 (BLEB) 共用。4. 混合，蠕動(dòng)或旋轉(zhuǎn)樣品與 BPW 的混合液將近一分 鐘。將樣品置于 室溫 (2030 C) 1h ，最久不超過 1.5 h ，以修復(fù)損傷的李斯 特菌。9. 將測試片放在平坦處， 掀起上層膜。7. 將上層膜緩慢蓋

10、下，以 免產(chǎn)生氣泡判。讀8. 用 3M TM 電子移液槍或 其它移液器垂培直養(yǎng)滴加 3 mL 樣品到下層膜的中Petrifilm EL 測試片法可用于定性、半定量及定量檢測 將測試片透明面朝上， 10. Petrifilm EL 測試片能夠 可疊放至 10 片，在 35 對(duì)于C 半定 1量檢C測或，3根7 據(jù)出現(xiàn) 紫C 紅色 1菌落C的下培相養(yǎng)對(duì)量28來h記錄 結(jié)果 212. 輕輕地 將塑料壓板放在 位于接種區(qū)上層膜上。13. 不對(duì)要于壓定性，檢扭測轉(zhuǎn)或，滑根動(dòng)據(jù)壓紫 紅板色。菌提落起的壓板存。在等與否至，少 1將0結(jié)分果鐘計(jì)，為以 出固。11.14.上如果是 / 否的 能夠滿足報(bào)告挑取菌落。

11、 未檢出體和凝未檢檢出已經(jīng)要求，那TMilmEnvir。 h。記錄為并，可erial Plate用標(biāo)準(zhǔn)的菌落計(jì)數(shù)器或 1其5它. 光對(duì)學(xué)于放定大量器檢計(jì)測數(shù)或，計(jì)數(shù) 所 判讀。有不紫要紅計(jì)色數(shù)菌圓落形。輪 廓上的菌落，因?yàn)樗鼈?作數(shù)來：采 定以 采用樣定與量判檢讀測”。部分來 算每個(gè)環(huán)境樣本中的不受用量計(jì)李斯特菌數(shù)16定量采樣與判讀如果你以定量方式使用 3M Petrifilm EL 測試片，請(qǐng)參考產(chǎn)品的包裝插件，然后按下述方式計(jì)算單位面積 的菌落數(shù) (Colony Forming Units, CFU) 。同時(shí)，你也要注意以下幾點(diǎn)：穩(wěn)定性是在環(huán)境監(jiān)控過程中獲得有用信息的關(guān)鍵點(diǎn)，所以在采樣過程

12、中應(yīng)使用相同的步驟。理 想情況下，應(yīng)使用相同類型的取樣設(shè)備，模板面積，技術(shù)員和采樣技術(shù)。采樣面積的大小可根據(jù)法規(guī)，內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，和(或 )監(jiān)控地點(diǎn)的不同來設(shè)定，例如考慮到較低的細(xì)菌數(shù)，對(duì)成品線應(yīng)采用較大的采樣面積。3M Petrifilm 測試片環(huán)境監(jiān)控手冊(cè)更多關(guān)于環(huán)境采樣的信息，請(qǐng)見如下的參考文獻(xiàn)，或參考為了測定單位采樣面積的李斯特菌數(shù)，你需要記錄以下數(shù)據(jù)：1. 采樣面積2. 濕潤采樣設(shè)備的液體量3. 可選添加緩沖蛋白胨水的體積4. 接種體積5. 測試片上的李斯特菌數(shù)運(yùn)用如下的等式和表格來計(jì)算單位采樣面積的菌落數(shù) (CFU/area sampled) 。實(shí)例請(qǐng)見下頁。方法的詳細(xì) 內(nèi)容請(qǐng)見包裝插件

13、和操作說明。你也可以測定單位樣本的結(jié)果，如CFU/ 每份排放水?；駽FU/面積 (菌落數(shù) mL 濕潤液 + mL BPW 3 mL) 采樣面積 環(huán)A境.定濕量潤采液樣和符合B以PW下文的獻(xiàn)總：體積 (mL)B. 接種S量tand(marLd) M e t h o d s f o r t h e E x a m i n a t i o n o f D a ir y P r o d u c3t s, Section 3.7D, American Public Health C. A 除As以socBia tion, Washington D. C., 1992.D. 測試C片om上p的en菌diu

14、落m數(shù) of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Section 3.512 and 3.521,E.3FM. 采樣面 積PetrifilG. E 除以 FrDic an Public Health Association, Washington D. C., 2001TM Environmental Listeria PlateG 橫線等于 CFU/ 面積定量判讀3. 將海綿放回?zé)o菌容2. 修復(fù)完成后，吸取14. 用 10 mL 液體濕潤海綿，涂抹采樣總培養(yǎng)后，進(jìn)行菌落 計(jì)數(shù) ( 在本例中，假A. 濕潤液和3 m L 混 合 液 接 種 5 到+ 10 = 15菌落數(shù)為 90)。例面：，涂如抹面棒積采為樣方英尺 (1 ft 2)4. 用 1 mL 液體濕潤涂 1. 將涂抹棒放回?zé)o菌容 3. 修復(fù)完成后，吸取 抹頭，涂抹采樣A. 濕潤液和 B器PW中，的