實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)課件

1、實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)1 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)2 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 五、結(jié)果判定五、結(jié)果判定 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)3 n了解血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理。了解血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理。 n了解血凝價和血凝單位的概念。了解血凝價和血凝單位的概念。 n掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的操作步驟和結(jié)果判掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的操作步驟和結(jié)果判 定的方法。定的方法。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)4 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 （一）血凝試驗(yàn)（一）血凝試驗(yàn)（HA） n一些病毒能夠促使動物如雞、鵝、豚鼠和

2、人的紅一些病毒能夠促使動物如雞、鵝、豚鼠和人的紅 細(xì)胞發(fā)生凝集，叫做細(xì)胞發(fā)生凝集，叫做血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn)。 n病毒凝集紅細(xì)胞是一種較為普遍的現(xiàn)象，可以作病毒凝集紅細(xì)胞是一種較為普遍的現(xiàn)象，可以作 為鑒定病毒的一個指標(biāo)。為鑒定病毒的一個指標(biāo)。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)5 HA試驗(yàn)的原理圖試驗(yàn)的原理圖 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)6 一層一層RBC均勻鋪在孔底者為均勻鋪在孔底者為+； 基本同上，但邊緣不整齊，有下墜傾向者為基本同上，但邊緣不整齊，有下墜傾向者為+； RBC在孔底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為在孔底形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為+； RBC在孔底形成一個小團(tuán)，但邊緣不光滑，四周有小凝集

3、塊為在孔底形成一個小團(tuán)，但邊緣不光滑，四周有小凝集塊為+; RBC在孔底形成一個小團(tuán)，邊緣光滑，四周有似小凝集塊者為在孔底形成一個小團(tuán)，邊緣光滑，四周有似小凝集塊者為; ; 紅細(xì)胞在孔底形成一個小團(tuán)，邊緣光滑，整齊者為紅細(xì)胞在孔底形成一個小團(tuán)，邊緣光滑，整齊者為- -。 + + + + - 血凝試驗(yàn)結(jié)果判定血凝試驗(yàn)結(jié)果判定 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)7 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C n血凝價：血凝價：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生能使紅細(xì)胞產(chǎn)生50%50%凝集的病毒最高凝集的病毒最高 稀釋度。稀釋度。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試

4、驗(yàn)8 （二）血凝抑制試驗(yàn)（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI） 當(dāng)病毒懸液中加入特異性抗體時，這種紅細(xì)胞當(dāng)病毒懸液中加入特異性抗體時，這種紅細(xì)胞 凝集的現(xiàn)象就被抑制，稱紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)，凝集的現(xiàn)象就被抑制，稱紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)， 即即血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)。 因此，可以用已知病毒來檢測被檢血清中的相因此，可以用已知病毒來檢測被檢血清中的相 應(yīng)抗體，也可以用已知血清來鑒定未知病毒。應(yīng)抗體，也可以用已知血清來鑒定未知病毒。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)9 HA試驗(yàn)的原理圖試驗(yàn)的原理圖 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)10 HI試驗(yàn)的原理圖試驗(yàn)的原理圖 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)11 三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料 n雞新城疫

5、病毒：雞新城疫弱毒株（雞新城疫病毒：雞新城疫弱毒株（Lasota） 接種雞胚、收獲尿囊液制備。接種雞胚、收獲尿囊液制備。 n雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝， 以生理鹽水洗滌以生理鹽水洗滌35次，將血漿、白細(xì)胞等充次，將血漿、白細(xì)胞等充 分洗去，用生理鹽水配置成分洗去，用生理鹽水配置成1%紅細(xì)胞懸液使紅細(xì)胞懸液使 用。用。 n0.85%生理鹽水。生理鹽水。 n被檢血清，采自被檢雞的健康血清被檢血清，采自被檢雞的健康血清。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)12 四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 （一）血凝試驗(yàn)（一）血凝試驗(yàn)（HA） n在血凝板第一排的在血凝板第一排的

6、112孔加入孔加入50l生理鹽水。生理鹽水。 n在第在第1孔中加入孔中加入50l病毒抗原，反復(fù)吸取混勻病毒抗原，反復(fù)吸取混勻 后吸后吸50l到第到第2孔，如此孔，如此倍比稀釋倍比稀釋直到第直到第10孔，孔， 混勻后棄混勻后棄50l；最后兩孔（；最后兩孔（11、12）為紅細(xì)）為紅細(xì) 胞對照。胞對照。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)13 n將將1%的紅細(xì)胞的紅細(xì)胞輕輕搖動混勻輕輕搖動混勻，在，在112孔中每孔中每 孔加入孔加入50l。 n手工震蕩，手工震蕩，37靜置靜置2530min后觀察結(jié)果。后觀察結(jié)果。 n病毒液的血凝價是病毒液的血凝價是1:2？ ？。 。 n血凝價：血凝價：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生能使紅細(xì)胞

7、產(chǎn)生50%50%凝集的病毒最高凝集的病毒最高 稀釋度。稀釋度。 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)14 （二）血凝抑制試驗(yàn)（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI） n 在血凝板的在血凝板的111孔加入孔加入25l生理鹽水，最后一孔（生理鹽水，最后一孔（12 孔）加孔）加50l。 n 第第1孔加待檢血清孔加待檢血清25l，混勻后吸，混勻后吸25l至第至第2孔，倍比孔，倍比 稀釋直至第稀釋直至第10孔，混勻后棄孔，混勻后棄25l。 n 從從111孔，每空加稀釋好的孔，每空加稀釋好的25l 4 4個血凝單位個血凝單位的病毒的病毒 懸液懸液。37 靜置靜置2530min 如果血凝價為如果血凝價為1:21:28 8，那么，那么

8、4 4個血凝單位就是個血凝單位就是1:21:26 6 第第11、12孔不加孔不加 第第12孔不加孔不加 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)15 n血凝價：血凝價：能使紅細(xì)胞產(chǎn)生能使紅細(xì)胞產(chǎn)生50%50%凝集的病毒最高稀凝集的病毒最高稀 釋度。釋度。 n1 1個血凝單位：個血凝單位：能使能使50%50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒 懸液。懸液。 病毒濃度病毒濃度 1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1: 28 1: 29 1: 210 C C 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)16 n將將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動混勻，在的紅細(xì)胞輕輕搖動混勻，在112孔中每孔中每 孔加入孔加入50l。 n手工震蕩，在手工震蕩，在37靜置靜置2530min后觀察結(jié)果。后觀察結(jié)果。 n結(jié)果判定：以紅細(xì)胞凝集結(jié)果判定：以紅細(xì)胞凝集100%的抑制作為結(jié)的抑制作為結(jié) 果判定的終點(diǎn)。果判定的終點(diǎn)。 n血凝抑制價是血凝抑制價是1:2？ ？，被檢血清為陰 ，被檢血清為陰/陽性。陽性。 1:21:24為陽性為陽性 1:21:22為陰性為陰性 1:21:23為可疑為可疑 血凝抑制價血凝抑制價 實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)17 第第1111孔為病毒對照，應(yīng)該完全凝集，第孔為病毒對照，應(yīng)該完全凝集，第1212孔為細(xì)胞對照，孔為細(xì)胞對