第五章試管苗的繼代增殖培養(yǎng)

1、第五章 試管苗的繼代增殖培養(yǎng),第一節(jié) 試管苗的繁殖 一、試管苗快速繁殖的類型 二、提高增殖率的方法 第二節(jié) 繼代增殖培養(yǎng)應(yīng)注意的問題 一、分化再生能力衰退現(xiàn)象 二、馴化現(xiàn)象 三、玻璃化現(xiàn)象,第一節(jié) 試管苗的繁殖,一、試管苗快速繁殖的類型 （一）無菌短枝型：將待繁殖的材料剪成帶一葉的單芽莖段，轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基，一定時(shí)間后可成苗，再剪成帶一葉的單芽莖段，繼代又可成苗。 （二）叢生芽增殖型：從芽到芽。 （三）器官發(fā)生型：分為直接和間接兩種形式，直接的器官發(fā)生是指較少發(fā)生或不發(fā)生愈傷組織而直接從外植體表面再生不定芽,四）胚狀體發(fā)生型,從植物葉片、子房、花藥、未成熟胚等誘導(dǎo)體細(xì)胞發(fā)生。 其發(fā)生和成苗過程類

2、似合子胚或種子。這種胚狀體具有數(shù)量多、結(jié)構(gòu)完整、易成苗和繁殖速度快的特點(diǎn)，是植物離體無性繁殖最快的方法， 是人工種子和細(xì)胞工程的前提，受到國(guó)內(nèi)外的普遍重視,五）原球莖型,原球莖是一種類胚組織，培養(yǎng)蘭花類的莖尖或腋芽可直接產(chǎn)生原球莖，可以分化成植株,二、提高增殖率的方法,一）選用最佳的培養(yǎng)基 1、促進(jìn)腋芽形成與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。 促進(jìn)芽叢生長(zhǎng)的培養(yǎng)基：加入0.110.0 mgL-1的細(xì)胞分裂素，偶然也用較高濃度。應(yīng)用最多的是6-芐基氨基嘌呤（BA），其次是激動(dòng)素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-異戊烯基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用的較少,除細(xì)胞分裂素以外，培養(yǎng)基中還經(jīng)常加入低濃度的生長(zhǎng)素，以促進(jìn)腋

3、芽的生長(zhǎng)，但要防止愈傷組織化。常用和生長(zhǎng)素是NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸），濃度在0.11.0mg.L-1,培養(yǎng)基中還經(jīng)常加入低濃度的生長(zhǎng)素，以促進(jìn)腋芽的生長(zhǎng)，但要防止愈傷組織化。常用的生長(zhǎng)素是NAA、IBA、IAA，濃度在0.11.0mg.L-1。 有時(shí)還加入低濃度的GA3（赤霉素），以促進(jìn)腋芽的伸長(zhǎng),2、誘導(dǎo)不定芽的形成與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì),誘導(dǎo)外植體形成不定芽時(shí)，一般使用細(xì)胞分裂素的濃度高于生長(zhǎng)素濃度的配比，但也經(jīng)常采用細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素濃度的比值接近于1的配比。 常用的細(xì)胞分裂素是BA、KT和玉米素，濃度在0.110.0 mg.L-1。有的還加入低濃度的2，4-D才

4、能誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生,3、促進(jìn)胚狀體的形成和增殖與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì),由體細(xì)胞形成的胚狀體叫體細(xì)胞胚（Somatic embryo）。 生長(zhǎng)素在體細(xì)胞胚胎發(fā)生中起著重要作用。一般是在含有豐富還原氮的培養(yǎng)基上，加有生長(zhǎng)素，特別是2，4-D以誘導(dǎo)胚狀體的發(fā)生，然后轉(zhuǎn)移到降低濃度或沒有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上使其成熟、萌發(fā)和生長(zhǎng),二）改善培養(yǎng)環(huán)境條件,1、溫度。大多數(shù)植物最適的培養(yǎng)溫度在2332之間,常用252的溫度。一般低于15培養(yǎng)的組織生長(zhǎng)出現(xiàn)停頓，而高于35對(duì)生長(zhǎng)也不利。 2、光照。一般認(rèn)為1 0005 000Lx即可滿足其需要， 3、濕度。一般要求70%80%的相對(duì)濕度，過低應(yīng)灑水，過高應(yīng)通風(fēng)除濕,第二節(jié)

5、繼代增殖培養(yǎng)應(yīng)注意的問題,一、分化再生能力衰退現(xiàn)象 1、經(jīng)多次繼代后，會(huì)逐漸減少或喪失愈傷組織中含有從外植體啟動(dòng)分裂時(shí)就包括進(jìn)來的成器官中心（分生組織），導(dǎo)致維管束難以形成，只能保持無組織的細(xì)胞團(tuán)。 也有人認(rèn)為在繼代過程中，逐漸消耗了母體中原有與器官形成有關(guān)的特殊物質(zhì),2、衰退可能也與內(nèi)源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的減少或喪失有關(guān)。 3、可能是細(xì)胞不正常染色體聚集導(dǎo)致形態(tài)發(fā)生能力的喪失。 4、植物材料 5、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 6、繼代培養(yǎng)次數(shù) 7、季節(jié),二、馴化現(xiàn)象,在植物組織培養(yǎng)中，發(fā)現(xiàn)一些植物組織經(jīng)長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)，發(fā)生了一些變化。開始繼代培養(yǎng)要加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，其后加入少量或不加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)就可以生長(zhǎng)、這種現(xiàn)象稱為“馴化”（acclimation,三、玻璃化現(xiàn)象,一）玻璃苗的特征和發(fā)生的因素 離體繁殖中出現(xiàn)的玻璃化芽苗，過度含水化，葉片腫脹，呈透明或半透明，水浸狀，失綠，脆弱易碎； 玻璃化可能是培養(yǎng)基滲透勢(shì)不當(dāng)所致。 有人發(fā)現(xiàn)瓊脂和蔗糖濃度與玻璃化成負(fù)相關(guān). 培養(yǎng)基中的植物激素也和玻璃化程度有關(guān)。 玻璃苗是培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氣體與外界交換不暢造成的,二）控制和克服玻璃苗的措施,1、適當(dāng)提高培養(yǎng)基中蔗糖含量或加入滲透劑，降低培養(yǎng)基中的滲透勢(shì)；