大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定

1、 實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào):1日期: 學(xué)時(shí)數(shù): 6學(xué)時(shí)地點(diǎn): 任課教師:實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法實(shí)驗(yàn)原理:大黃中有多種游離蒽醌及其苷類,總含量約2-5%。主要有大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。從大黃中提取分離游離蒽醌時(shí),先用20%硫酸加熱使苷類水解，保留濾餅，濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元（游離蒽醌），提取液作TLC鑒識(shí)。實(shí)驗(yàn)對象:大黃主要儀器、試劑:電熱套、燒杯、20%硫酸、薄層硅膠G 、0.5%CMC-Na。實(shí)驗(yàn)操作步驟: 酸水解：取大黃10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加熱3-4小時(shí),抽

2、濾,濾餅水洗后自然干燥。 鋪薄層硅膠G板: 薄層硅膠G :0.5%CMC-Na(1:3)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng): 加熱溫度不要太高。 溶液保持微沸，防止藥渣炭化。 不斷攪拌。后記:實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取與分離和鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào):2日期: 學(xué)時(shí)數(shù): 6學(xué)時(shí)地點(diǎn): 任課教師:實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。 2.掌握蒽醌類的色譜鑒別方法。實(shí)驗(yàn)原理:大黃中有多種游離蒽醌及其苷類,總含量約2-5%。主要有大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚以及它們的葡萄糖苷等。從大黃中提取分離游離蒽醌時(shí),先用20%硫酸加熱使苷類水解，保留濾餅，濾餅用乙醚加熱回流提取總蒽醌苷元（游離蒽醌），提取液

3、作TLC鑒識(shí)。實(shí)驗(yàn)對象:大黃濾餅主要儀器、試劑:電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、乙醚、硅膠薄層板、石油醚、乙酸乙酯實(shí)驗(yàn)操作步驟: 總羥基蒽醌苷元的提?。喝「稍餅V餅，放入100ml圓底燒瓶中，加入乙醚50ml,回流提取34小時(shí)，得乙醚提取液。 乙醚提取液經(jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠G-CMC-Na,展開劑為石油醚（60-90）乙酸乙酯（：），直立展開。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng): 加熱回流時(shí)電熱套電壓小于50v。 取石油醚（60-90）7ml,乙酸乙酯3ml,混合均勻。 控制點(diǎn)樣量，注意點(diǎn)樣斑點(diǎn)位置。仔細(xì)觀察斑點(diǎn)、溶劑前沿移動(dòng)距離。后記:結(jié)論：在可見光下可看到4個(gè)斑點(diǎn)

4、，Rf最大的黃色斑點(diǎn)為大黃酚和大黃素甲醚的混合物，其余3個(gè)斑點(diǎn)依Rf由大到小分別為大黃素（橙色斑點(diǎn)），蘆薈大黃素（黃色斑點(diǎn)），大黃酸（黃色斑點(diǎn)【實(shí)訓(xùn)目的】1、能夠運(yùn)用回流提取法對大黃中總蒽醌類化合物進(jìn)行提取2、能夠熟練運(yùn)用pH梯度萃取法對大黃中游離蒽醌進(jìn)行分離.3、正確判斷顯色反應(yīng)、薄層色譜的結(jié)果【實(shí)訓(xùn)原理】 大黃中含有大黃素型游離蒽醌及其苷類,本實(shí)訓(xùn)利用大黃中的蒽醌類化合物均可溶于乙醇而提取,根據(jù)游離蒽醌及蒽醌苷在水和乙醚中溶解度的不同采用萃取方法分離.游離蒽醌的分離是利用各羥基蒽醌類化合物酸性不同,采用pH梯度萃取法進(jìn)行.【實(shí)訓(xùn)材料】 圓底燒瓶、冷凝管、研缽、水浴鍋、分液漏斗、燒杯、三角瓶

5、、表面皿、試管、層析缸、pH試紙薄層硅膠、CMC-Na、大黃粗粉、95%乙醇、乙醚、鹽酸、三氯甲烷、5%KOH、5%Na2CO3、5%NaHCO3、0.5%NaOH、新華色譜濾紙(20cm7cm)、苯-醋酸乙酯(82)、苯-甲醇(81)、甲苯、氨0.5%醋酸鎂、1%大黃酸三氯甲烷溶液、1%大黃素三氯甲烷溶液、1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液【實(shí)訓(xùn)步驟】1、乙醇總提取物的制備 游離蒽醌的提取 取大黃粗粉50g,置于500ml圓底燒瓶中,加95%乙醇以約高出生藥面為度,置水浴加熱回流23小時(shí),趁熱抽濾.濾渣再以95%乙醇熱提二次,趁熱抽濾后合并三次乙醇提取液.濃縮乙醇提取液,得到乙醇總提取物.2、總游離

6、蒽醌的提取,親脂性成分與親水性成分分離 將乙醇總提取物浸膏加水適量混懸,加乙醚150ml于500ml分液漏斗中萃取,充分振蕩后放置,傾出醚層,再加50ml乙醚振搖,放置,傾出醚層,同法操作6次,直至乙醚液呈色較淺時(shí)為止,合并乙醚液,乙醚溶液含總游離蒽醌.3、蒽醌單體的分離 大黃酸的分離 將含有游離蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中,加5%NaHCO3水溶液20ml,振搖.放置分層,放出下層NaHCO3溶液,置于另一三角瓶中,上層乙醚溶液留存于分液漏斗中,再加5%NaHCO3溶液15ml萃取一次,每次振搖提取后,放置分層時(shí)間應(yīng)稍久,以免乙醚溶液混在下層水液中,影響分離效果.提取過程中,如乙

7、醚揮發(fā),可酌量補(bǔ)加.合并NaHCO3提取液,注意其呈色,在攪拌下小心滴加鹽酸調(diào)pH23,觀察酸化過程中的呈色變化,析出物抽濾收集,干燥后稱重. 大黃素的分離 留存在分液漏斗中的乙醚液,用5%Na2CO3水溶液每次1520ml如上法相同萃取數(shù)次,直至提取液呈色較淺時(shí)為止,約需67次,合并Na2CO3提取液,小心滴加鹽酸酸化至pH23,放置待沉淀析出,抽濾收集析出物經(jīng)水洗滌,抽干移至表面皿上,干燥后稱重.蘆薈大黃素的分離 留存在分液漏斗中的乙醚液,用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取34次.乙醚溶液再以蒸餾水萃取23次,以洗去堿液.合并NaOH和水的提取液,加鹽酸調(diào)pH23,放置.抽濾析出沉淀

8、,收集沉淀,經(jīng)水洗,抽干移至表面皿上,干燥后稱重. 大黃酚和大黃素-6-甲醚的分離 留存的乙醚液,置圓底燒瓶中,回收乙醚,放置.抽濾收集沉淀,經(jīng)水洗,抽干移至表面皿上,干燥后稱重.4、鑒定(1)堿液試驗(yàn):分別取蒽醌化合物結(jié)晶少許,置試管中,加1ml乙醇溶解,加數(shù)滴5%氫氧化鉀試劑振搖,溶液呈紅色.(2)醋酸鎂試驗(yàn):分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許,置試管中,加1ml乙醇溶解,加數(shù)滴0.5%醋酸鎂試劑,產(chǎn)生橙、紅、紫等顏色.(3)薄層檢識(shí) 吸附劑:硅膠CMC-Na薄層板. 樣品:各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 對照品:1%大黃酸三氯甲烷溶液;1%大黃素三氯甲烷溶液;1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑:苯

9、-醋酸乙酯(82);苯-甲醇(81) 顯色:氨熏后觀察或噴5%氫氧化鉀溶液后觀察(4)紙色譜檢識(shí) 支持劑:新華色譜濾紙(中速、20cm7cm) 樣品:各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液 對照品:1%大黃酸三氯甲烷溶液;1%大黃素三氯甲烷溶液;1%蘆薈大黃素三氯甲烷溶液 展開劑:甲苯 顯色劑:0.5%醋酸鎂甲醇溶液【實(shí)訓(xùn)思考】1、在實(shí)訓(xùn)過程中采用pH梯度萃取法分離游離蒽醌,萃取過程中若出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,應(yīng)如何處理?2、大黃酚和大黃素甲醚結(jié)構(gòu)相似,請?jiān)O(shè)計(jì)分離方法.3、實(shí)訓(xùn)中應(yīng)注意哪些安全問題? 實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào):1日期: 學(xué)時(shí)數(shù): 8學(xué)時(shí)地點(diǎn): 新校區(qū)F樓6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室任課教師:實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

10、的:學(xué)習(xí)和掌握用堿提取酸沉淀提取黃酮苷的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理:槐米中有黃酮苷蕓香苷（蘆丁）, 蕓香苷（蘆?。┦怯砷纹に嘏c蕓香糖連接而成的二糖苷，能溶于熱水。本試驗(yàn)采用堿提取酸沉淀提取蕓香苷。實(shí)驗(yàn)對象: 槐米主要儀器、試劑:電熱套、燒杯、石灰水、PH試紙、抽濾瓶 。實(shí)驗(yàn)操作步驟: 1.提?。夯被追鬯閴A水提取加酸沉淀-放置粗品蘆丁精制蘆丁(純品)。 2.粉碎:稱槐米40克，粉碎。 3.堿提:在1000ml燒杯中加入500ml蒸餾水，加熱煮沸后，將槐米粗粉投入，繼續(xù)直火 煮沸2-3分鐘，在攪拌下，加入石灰乳，調(diào)PH8-9，加熱保持微沸30分鐘，趁熱過濾收集，濾渣加160ml蒸餾水, 加入石灰乳，調(diào)

11、PH8-9，同上操作再提一次，濾液合并，濾渣棄去。 4.酸沉:將濾液在60-70，小心加濃HCL，調(diào)PH3-4，放6小時(shí)以上，析出沉淀。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng): 堿提時(shí)加入石灰乳調(diào)PH8-9，不要太高。 溶液保持微沸。 酸化時(shí)將濾液在60-70，小心加濃HCL，調(diào)PH3-4，不要太低。后記:實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定(精制)實(shí)驗(yàn)編號(hào):2日期: 學(xué)時(shí)數(shù): 8學(xué)時(shí)地點(diǎn):新校區(qū)F樓6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室 任課教師:實(shí)驗(yàn)?zāi)康?粗品蘆丁的精制實(shí)驗(yàn)原理: 粗品蘆丁能溶于熱水，去除不溶性雜質(zhì)，最后用甲醇重結(jié)晶。實(shí)驗(yàn)對象: 粗品蘆丁主要儀器、試劑:電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、甲醇實(shí)驗(yàn)操作步驟: 精制 ：粗品蘆丁放在1000

12、ml燒杯中，加500ml蒸餾水，加熱煮沸，至全部溶解，趁熱抽濾，濾液放冷，即析出黃色沉淀，待沉淀完全后，抽濾，收集沉淀，干燥。用甲醇重結(jié)晶，得精品蘆丁。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng): （1）用甲醇重結(jié)晶時(shí)加熱回流時(shí)電熱套電壓小于50v。 （2）粗品蘆丁全部溶解，趁熱抽濾。 （3）重結(jié)晶時(shí)甲醇的用量應(yīng)適當(dāng)，用量過多，則結(jié)晶不易析出；用量過少，又會(huì)帶入較多的雜質(zhì)。后記:實(shí)驗(yàn)二 蘆丁的提取及鑒定實(shí)驗(yàn)編號(hào):3日期: 學(xué)時(shí)數(shù): 8學(xué)時(shí)地點(diǎn):新校區(qū)F樓6樓天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室 任課教師:實(shí)驗(yàn)?zāi)康?（1）蘆丁的水解，鑒定； （2）掌握黃酮類成分的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖的鑒定方法。實(shí)驗(yàn)原理: ，實(shí)驗(yàn)對象: 精品蘆丁主要儀器

13、、試劑:電熱套、圓底燒瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、鹽酸、鎂粉、醋酸鎂、醋酸鉛、氧氯化鋯、三氯化鋁實(shí)驗(yàn)操作步驟: 1.水解 ：取1克蘆丁加1%H2SO4100ml與燒杯中，加熱微沸，30分鐘，開始為澄清，逐漸析出黃色針狀結(jié)晶，待沉淀完全后，抽濾，收集沉淀，水解母液留作糖的紙層析鑒定。2. 蘆丁、槲皮素的鑒定：（1）糖的檢出圓形濾紙層析 取水解蘆丁的濾液20ml，加Ba(OH)2細(xì)粉中和至pH7，濾除生成的BaSO4白色沉淀，濾液在水浴上小心濃縮近干（約1ml）注意防止炭化，加甲醇5ml,作為檢識(shí)糖的樣品溶液。 展開劑：正丁醇-醋酸-水（4-1-5上層）。 對照品：葡萄糖、鼠李

14、糖（各2mg，分別溶于2ml甲醇中） 展開方式：徑向展開 顯色劑：苯胺鄰苯二甲酸鹽試劑（或，鄰苯甲酸苯胺），噴霧后，105加熱35分鐘，有糖處顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。（2）化學(xué)方法鑒別黃酮類成分a.鹽酸-鎂粉反應(yīng)b.醋酸鎂反應(yīng)c.醋酸鉛沉淀反應(yīng)d.氧氯化鋯e.點(diǎn)滴反應(yīng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng): 糖的檢出圓形濾紙層析點(diǎn)樣量不要太多。后記:實(shí)驗(yàn)三 氧化苦參堿的提取分離與純制實(shí)驗(yàn)編號(hào)：1實(shí)驗(yàn)日期：實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：任課教師：學(xué)時(shí)數(shù)：2+8實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆諠B漉法和離子交換法提取生物堿的方法和原理實(shí)驗(yàn)原理：1.生物堿溶于酸水 2.陽離子交換樹脂提取、分離生物堿實(shí)驗(yàn)對象：苦參主要儀器、試劑：滲漉筒、燒杯、玻璃棒 陽離子交換樹脂柱、

15、陽離子交換樹脂、pH試紙、培養(yǎng)皿 0.5%鹽酸、碘化鉍鉀、蒸餾水主要操作步驟：總堿的提?。海?）酸水提取：稱取250g風(fēng)干粉碎的苦參中加入適量0.5%的鹽酸液，使其浸沒藥料，充分濕潤，放置一小時(shí)。將如上酸水浸泡好的藥材及溶液裝入滲漉筒，待全部加完，繼續(xù)補(bǔ)充加入0.5%的鹽酸液，浸過藥面，放置過夜（此步驟在實(shí)驗(yàn)前一天提前完成）。繼續(xù)加入0.5%的鹽酸液或蒸餾水，（當(dāng)滲漉液的酸性過大，改加蒸餾水滲漉，將滲漉液的pH控制在3-4之間）以1mL/min的流速進(jìn)行滲漉，收集滲漉液約3750Ml,到滲漉液生物堿反應(yīng)微弱為止。（2）交換：將上述滲漉液pH控制在3-4之間，上柱交換，流速自快至慢，流出液要經(jīng)常

16、以碘化鉍鉀檢查，如發(fā)現(xiàn)有未被交換的生物堿流下時(shí)，可調(diào)整流速繼續(xù)進(jìn)行交換，待滲漉液全部通過樹脂后，把樹脂倒入燒杯中，用蒸餾水洗滌數(shù)次，除去非陽離子雜質(zhì)，然后濾干，放入大培養(yǎng)皿中自然干燥。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：裝滲漉筒時(shí)，藥材應(yīng)壓實(shí)，盡趕空氣，滲漉筒切勿走干。當(dāng)滲漉液的酸性過大，改加蒸餾水滲漉，將滲漉液的pH控制在3-4之間。如發(fā)現(xiàn)有未被交換的生物堿流下時(shí)，可調(diào)整流速繼續(xù)進(jìn)行交換。離子交換樹脂柱切勿走干。后記：（教學(xué)體會(huì)、學(xué)生對教學(xué)內(nèi)容的反應(yīng)等） 實(shí)驗(yàn)二 氧化苦參堿的提取分離與純制實(shí)驗(yàn)編號(hào)：2實(shí)驗(yàn)日期：學(xué)時(shí)數(shù)： 8實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：任課教師：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)索氏提取器的使用方法實(shí)驗(yàn)原理：1.生物堿堿化后，溶于氯仿

17、2.索氏提取器氯仿連續(xù)提取將生物堿從陽離子交換樹脂上洗脫下來實(shí)驗(yàn)對象：交換了生物堿的陽離子交換樹脂主要儀器、試劑：索氏提取器、燒杯、水浴鍋 陽離子交換樹脂、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙 濃氨水、氯仿、丙酮主要操作步驟：總堿的提取：（1） 總堿洗脫：將晾干后的樹脂放入燒杯中，加濃氨水20mL，充分?jǐn)噭?，使?jié)駶櫠群线m，（樹脂充分膨脹，但又無不吸收的過剩水份溢出）蓋好， 靜置20分鐘后，裝入索氏提取器中，用300mL氯仿在水浴上回流洗脫，至提盡生物堿為止?；厥章确?，盡力抽干。殘剩物用2-3倍量丙酮溶解，盡快出現(xiàn)結(jié)晶，放置一定時(shí)間，過濾，得氧化苦參堿粗晶，（實(shí)際是總堿）用丙酮重結(jié)晶一次，得精品。實(shí)驗(yàn)注

18、意事項(xiàng)：加濃氨水20mL，充分?jǐn)噭?，使?jié)駶櫠群线m，使樹脂充分膨脹，但又無不吸收的過剩水份溢出。索氏提取器使用時(shí)要小心，易碎裂。后記：（教學(xué)體會(huì)、學(xué)生對教學(xué)內(nèi)容的反應(yīng)等） 實(shí)驗(yàn)二 氧化苦參堿的提取分離與純制實(shí)驗(yàn)編號(hào)：3實(shí)驗(yàn)日期：學(xué)時(shí)數(shù)： 8實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：任課教師：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)使用Al2O3薄層、柱層析法分離鑒定生物堿的方法實(shí)驗(yàn)原理：生物堿可以采用Al2O3薄層、柱層析法分離實(shí)驗(yàn)對象：總堿粗品，Al2O3薄層，Al2O3柱層析主要儀器、試劑：層析柱、棉花、點(diǎn)滴板、試管、玻璃板、毛細(xì)管、 Al2O3、碘化鉍鉀、圓底燒瓶、冷凝管、漏斗、濾紙 甲醇、氯仿、丙酮主要操作步驟：氧化苦參堿的分離與純制：取一根洗凈干燥的1：45的層離柱，在下端塞一點(diǎn)棉花，倒入一些氯仿，使棉花濕潤，并放出氯仿液，以趕盡氣泡后，緩緩加入30g氧化鋁，以氯仿作媒介濕法裝柱，最后加入拌有200mg氧化苦參堿精品，薄層檢查兩個(gè)點(diǎn)的少量氧化鋁，再放入一點(diǎn)棉花，先用30mL氯仿，后用氯仿:甲醇（99