藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證

1、1 第四章第四章 藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證 藥物分析教研室藥物分析教研室 2 內(nèi)容提要內(nèi)容提要 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 3 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 含量測(cè)定常用的方法含量測(cè)定常用的方法 容量分析法容量分析法( (滴定法滴定法) ) 光譜分析法光譜分析法 色譜分析法色譜分析法 4 一、容量分析法（滴定法）一、容量分析法（滴定法） 方法：方法： 特點(diǎn)：特點(diǎn)： l 方法簡(jiǎn)便易行：

2、價(jià)廉、簡(jiǎn)便、快速；方法簡(jiǎn)便易行：價(jià)廉、簡(jiǎn)便、快速； l 方法耐用性高方法耐用性高 l 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高（RSD0.2%）：適用于對(duì)準(zhǔn)確度要）：適用于對(duì)準(zhǔn)確度要 求較高的試樣分析。求較高的試樣分析。 l 專屬性差專屬性差 適用范圍：適用范圍：化學(xué)原料藥物的含量測(cè)定?；瘜W(xué)原料藥物的含量測(cè)定。 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 5 一、容量分析法一、容量分析法 有關(guān)計(jì)算有關(guān)計(jì)算 滴定度滴定度T （mg/ml）：每：每1 ml規(guī)定濃度的滴定液規(guī)定濃度的滴定液 所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。 被測(cè)物被測(cè)物 WA=TVB 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特

3、點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 6 1、滴定度的計(jì)算、滴定度的計(jì)算 滴定反應(yīng)：滴定反應(yīng)：aA (被測(cè)藥物被測(cè)藥物)+bB(滴定劑滴定劑)cC+dD M b a mT m:滴定劑摩爾濃度；滴定劑摩爾濃度；M被測(cè)物摩爾質(zhì)量；被測(cè)物摩爾質(zhì)量；a/b:反應(yīng)反應(yīng) 摩爾比摩爾比 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 7 2. 含量測(cè)定含量測(cè)定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法 (1) (2) (3) 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn) 8 (1) 直接滴定法 % 100(%) W TV 含量 規(guī)定摩爾濃度 實(shí)際摩爾濃

4、度 F %100%100 100% (%) W FTV W TV W TV 含量 注意掌握滴定反應(yīng)的原理注意掌握滴定反應(yīng)的原理, , 藥物與滴定劑在反應(yīng)藥物與滴定劑在反應(yīng) 中的摩爾比中的摩爾比，正確計(jì)算滴定度和百分含量，正確計(jì)算滴定度和百分含量 濃度校正因子濃度校正因子 9 例：阿司匹林的含量測(cè)定例：阿司匹林的含量測(cè)定 精密稱取本品精密稱取本品0.4018g，加中性乙醇，加中性乙醇20ml溶解后，溶解后， 加加3滴酚酞指示劑，用滴酚酞指示劑，用NaOH滴定液（滴定液（0.1002mol/L） 滴定，消耗體積為滴定，消耗體積為22.20ml，求阿司匹林的含量？，求阿司匹林的含量？ （ch.p每每

5、1ml 0.1mol/L 的的NaOH滴定液相當(dāng)于滴定液相當(dāng)于 18.02mg的阿司匹林）的阿司匹林） (1) 直接滴定法 10 解：精密稱取供試品解：精密稱取供試品Ws=0.4018g NaOH實(shí)際濃度實(shí)際濃度0.1002mol/L，則，則F=0.1002/0.1=1.002 消耗的消耗的NaOH滴定液體積：滴定液體積：V樣 樣=22.20ml 阿司匹林含量阿司匹林含量= 100% S VF T W 樣 3 22.20 1.002 18.20 10 100% 0.4018 99.8% (1) 直接滴定法 11 (2) 生成物滴定法生成物滴定法 %100%100 100% (%) W FTV

6、W TV W TV 含量 注意藥物與生成物注意藥物與生成物B，生成物，生成物B與滴定劑之與滴定劑之 間的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，正確計(jì)算滴定度。間的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，正確計(jì)算滴定度。 藥物與藥物與A作用生成作用生成B, 用滴定液滴定用滴定液滴定B 百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同 12 （3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法 o（a）不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算）不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算 %100 )V % AA W TFVF BBA （ 含量 VA 定量加入滴定液定量加入滴定液A的體積的體積(ml) VB 滴定液滴定液B在回滴中消耗的體積在回滴中消耗的體積(ml)

7、 FA 滴定液滴定液A的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù) FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù) TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度 W 供試品稱取量供試品稱取量 13 （3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法 o （b）做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算）做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算 %100 )V % 0 B W FTV S B （ 含量 VB0 空白實(shí)驗(yàn)消耗滴定液空白實(shí)驗(yàn)消耗滴定液B的體積的體積 VBS 樣品實(shí)驗(yàn)消耗滴定液樣品實(shí)驗(yàn)消耗滴定液B的體積的體積 FB 滴定液滴定液B的濃度校正因數(shù)的濃度校正因數(shù) TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度 W 供試品稱取量供試品稱取量 14 司可巴比妥

8、鈉含量測(cè)定司可巴比妥鈉含量測(cè)定: 本品約本品約0.1g, 加水加水10ml溶溶 解解, 精密加溴滴定液精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加鹽酸再加鹽酸5ml, 放置放置15分鐘分鐘, 加碘化鉀試液加碘化鉀試液10ml, 用硫代硫酸鈉滴定用硫代硫酸鈉滴定 液液(0.1mol/L)滴定滴定, 滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正 W=0.1022g; 硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液 F=1.038; 供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白空白23.21ml 15 滴定度滴定度 (mg/ml) 01.1327.260 1 1 1 . 0

9、M b a mT 司可巴比妥鈉司可巴比妥鈉M=260.27, 與溴摩爾比為與溴摩爾比為1:1 %8 .98%100 10001022. 0 01.13038. 1)73.1521.23( %100 )( (%) 2322322 BrOSNaOSNa S0 W TFVV 司可巴比妥含量 16 （一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法 （二）熒光分析法（二）熒光分析法 （三）紅外分光光度法（三）紅外分光光度法 （四）原子吸收分光光度法（四）原子吸收分光光度法 （五）火焰光度法（五）火焰光度法 二、光譜分析法二、光譜分析法 17 （一）紫外（一）紫外可見分光光度法可見分光光度法 根據(jù)物質(zhì)對(duì)

10、波長(zhǎng)為根據(jù)物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為200200760 nm760 nm這一這一 范圍的光吸收特性建立起來的一種定性、范圍的光吸收特性建立起來的一種定性、 定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。 二、光譜分析法二、光譜分析法 18 1. 1. 基本原理基本原理 ECL I I TA 0 lglg Lambert -BeerLambert -Beer定律定律 百分吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)( )：當(dāng)溶液濃度：當(dāng)溶液濃度c為為1%(g/ml)、 液層厚度液層厚度(l)為為1cm時(shí)的吸光度時(shí)的吸光度(A)。 %1 1cm E 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸收系數(shù)是物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸收系數(shù)是 該

11、物質(zhì)的物理常數(shù)。該物質(zhì)的物理常數(shù)。 二、光譜分析法二、光譜分析法 19 2.2.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍 特點(diǎn)：特點(diǎn)： l簡(jiǎn)便易行：儀器價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)便、易于普及簡(jiǎn)便易行：儀器價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)便、易于普及 l靈敏度高，靈敏度高，1010-4 -4 1010-7 -7g/ml g/ml l準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高,RSD=2-5%,RSD=2-5% l專屬性較差專屬性較差 適用范圍：適用范圍：多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的多用于藥物制劑的定量檢查，如片劑的 溶出度或含量均勻度檢查。溶出度或含量均勻度檢查。 二、光譜分析法二、光譜分析法 20 （1 1）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正 標(biāo)準(zhǔn)汞燈中

12、的較強(qiáng)譜線標(biāo)準(zhǔn)汞燈中的較強(qiáng)譜線 237.83237.83、253.65253.65、275.28275.28、296.73296.73、313.16313.16、 334.15nm334.15nm等等 氘燈中氘燈中:486.03nm,656.10nm:486.03nm,656.10nm 3. 3. 儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定 二、光譜分析法二、光譜分析法 21 （2 2）吸光度的準(zhǔn)確度校正）吸光度的準(zhǔn)確度校正 60mg60mg重鉻酸鉀用重鉻酸鉀用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀釋至的硫酸溶液稀釋至 1000ml1000ml，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算吸收系數(shù)，與，在規(guī)定波

13、長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算吸收系數(shù)，與 規(guī)定值比較。規(guī)定值比較。 規(guī)定值：規(guī)定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.5 二、光譜分析法二、光譜分析法 22 （3）雜散光檢查）雜散光檢查 規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定相應(yīng)透光率。規(guī)定試劑、濃度及在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定相應(yīng)透光率。 碘化鈉碘化鈉1.00（1g/ml）220nm 0.8%（透光率）（透光率） 亞硝酸鈉亞硝酸鈉5.00（1g/

14、ml）340nm 0.8（透光率）（透光率） （4）吸收池校正）吸收池校正 兩吸收池測(cè)定的差值小于兩吸收池測(cè)定的差值小于1% 二、光譜分析法二、光譜分析法 23 4、測(cè)定條件、測(cè)定條件 （1）對(duì)溶劑的要求：注意溶劑的截止波長(zhǎng)。）對(duì)溶劑的要求：注意溶劑的截止波長(zhǎng)。 （2）測(cè)定波長(zhǎng)的確證）測(cè)定波長(zhǎng)的確證 （3）供試品溶液濃度）供試品溶液濃度 應(yīng)使測(cè)得的吸光度在應(yīng)使測(cè)得的吸光度在0.30.7之間之間 二、光譜分析法二、光譜分析法 24 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 R RX X A CA C Cx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度 Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶

15、液的吸光度 CR：對(duì)照品溶液的濃度：對(duì)照品溶液的濃度 AR：對(duì)照品溶液的吸光度：對(duì)照品溶液的吸光度 A. 待測(cè)物與對(duì)照品在相同條件下測(cè)定待測(cè)物與對(duì)照品在相同條件下測(cè)定 (儀器、溶劑、波長(zhǎng)儀器、溶劑、波長(zhǎng)) B. 供試品溶液與對(duì)照品溶液濃度相近供試品溶液與對(duì)照品溶液濃度相近 二、光譜分析法二、光譜分析法 25 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 %100(%) W DCx 含量 原料藥原料藥百分含量的計(jì)算公式：百分含量的計(jì)算公式： D：稀釋體積：稀釋體積 W：供試品取樣量：供試品取樣量 二、光譜分析法二、光譜分析法 26 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (1) 對(duì)照品比較法

16、對(duì)照品比較法 制劑制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式： D：稀釋體積：稀釋體積 W：供試品取樣量：供試品取樣量 %100% / 100% / g g g g 每單位實(shí)測(cè)含量 標(biāo)示量 標(biāo)示量 測(cè)得量（ ） 平均片重（片） 供試品重（ ） 標(biāo)示量（片） 27 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (1) 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式：制劑含量測(cè)定結(jié)果的計(jì)算公式： W(V)：平均片重：平均片重(裝量裝量) W：供試品取樣量：供試品取樣量 B：制劑的標(biāo)示量：制劑的標(biāo)示量 %100% X CD V VB 標(biāo)示量 %100% X CD W WB 標(biāo)示量固體制劑固體制劑 液體制

17、劑液體制劑 ）（VW 28 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法 100 )/( %1 1 cm X X E A mlgC Cx：供試品溶液的濃度：供試品溶液的濃度 Ax：供試品溶液的吸光度：供試品溶液的吸光度 ：對(duì)照品溶液的濃度：對(duì)照品溶液的濃度 A. 用本法測(cè)定時(shí)，吸光系數(shù)通常應(yīng)大用本法測(cè)定時(shí)，吸光系數(shù)通常應(yīng)大 于于100； B. 注意儀器的校正與檢定注意儀器的校正與檢定 %1 1cm E 29 5 5、含量測(cè)定、含量測(cè)定 (2) 吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法 1% 1 100 %100% cm A D EL W 含量 原料藥百分含量的計(jì)算公式：原料藥百分含量的計(jì)算公式： 30

18、 精密稱取貝諾酯精密稱取貝諾酯0.1500g0.1500g，置于，置于100ml100ml的量筒中，加的量筒中，加 無水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無水乙醇無水乙醇適量，振搖微熱溶解后放冷，加無水乙醇 稀釋至刻度搖勻，過濾，精密量取稀釋至刻度搖勻，過濾，精密量取5ml5ml至至1000ml1000ml量量 筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在240nm240nm波長(zhǎng)波長(zhǎng) 處測(cè)定吸收度為處測(cè)定吸收度為0.55850.5585，已知本品，已知本品240nm240nm處標(biāo)準(zhǔn)給處標(biāo)準(zhǔn)給 定吸收系數(shù)定吸收系數(shù) 為為745745。求貝諾酯百分含量。求貝諾酯百分含量 LC

19、EA LCEA RcmR XcmX %1 1 %1 1 31 1% 1 0.5585100 1000 100 745 1005 (%)100%100%99.95% 0.1500 cm A D E W 含量 32 鹽酸氯丙嗪片劑的含量測(cè)定：取本品鹽酸氯丙嗪片劑的含量測(cè)定：取本品20片，精片，精 密稱定為密稱定為8.100g，研細(xì)，精密稱取，研細(xì)，精密稱取0.4800g片粉，置片粉，置 于于500ml量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上量瓶中，加酸及水溶解并稀釋至刻度，取上 清液清液5.00ml，置，置100ml量瓶中，加水至刻度，在量瓶中，加水至刻度，在 254nm測(cè)得吸收度為測(cè)得吸收度為0.

20、540，另取鹽酸氯丙嗪對(duì)照品，另取鹽酸氯丙嗪對(duì)照品， 配成配成6.0g/ml的對(duì)照品溶液，同法在的對(duì)照品溶液，同法在254nm處測(cè)的吸處測(cè)的吸 收度為收度為0.564，標(biāo)示量為，標(biāo)示量為50mg/片，計(jì)算標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)？片，計(jì)算標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)？ 33 0.4800Wg 8.100 0.4050 20 g Wg 500100 10000 5.00 ml D 0.540 6.05.745 0.564 X XR R A gg CC mlml A 6 5.745 10000 0.4050 10 (%)96.9% 0.4800 0.0500 CD W WB 標(biāo)示量 B=50 mg/片=0.050g/片 34

21、 維生素維生素B1注射液含量的測(cè)定：精密量取本品（規(guī)注射液含量的測(cè)定：精密量取本品（規(guī) 格格2ml：50mg）2ml，置，置200ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至刻 度，搖勻，精密量取度，搖勻，精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加鹽酸量瓶中，加鹽酸 溶液（溶液（91000）稀釋至刻度，照紫外）稀釋至刻度，照紫外-可見分光光度可見分光光度 法（附錄法（附錄 A），在），在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為 0.521，按維生素，按維生素B1 的吸收系數(shù)（的吸收系數(shù)（ ）為）為421，計(jì)算本，計(jì)算本 品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量 1% 1cm E

22、 35 1% 1 100 100% 0.521200 100 2 1000 421 1 1005 100%99.0% 50 2 cmX A D V ELCD V VBVB 示量% = 標(biāo) 36 （二）熒光分析法（二）熒光分析法 利用物質(zhì)的熒光特性進(jìn)行定性與定量測(cè)定的方法利用物質(zhì)的熒光特性進(jìn)行定性與定量測(cè)定的方法 稱為熒光分析法。稱為熒光分析法。 熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）熒光發(fā)射光譜（熒光光譜） 熒光激發(fā)光譜（熒光激發(fā)光譜（激發(fā)光譜激發(fā)光譜） 37 1.1.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍 特點(diǎn)：特點(diǎn)： l高靈敏度：高靈敏度：10-12 10-10g/ml，較，較UV-Vis高高 l熒光自熄滅：溶液

23、中熒光物質(zhì)濃度太大時(shí)，會(huì)有熒光自熄滅：溶液中熒光物質(zhì)濃度太大時(shí)，會(huì)有 “自熄滅自熄滅”作用，因此熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液作用，因此熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液 中進(jìn)行中進(jìn)行 l易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗(yàn)易受干擾：干擾因素多，必須做空白試驗(yàn) 適用范圍：適用范圍： （二）熒光分析法（二）熒光分析法 38 2.干擾及排除干擾及排除 (1)溶劑溶劑空白試驗(yàn)空白試驗(yàn) (2)溶液溶液： l藥物濃度不宜過高，藥物濃度不宜過高， l懸浮物懸浮物過濾，過濾， l溶氧溶氧通惰性氣體除去通惰性氣體除去 l溶液溶液pH。 (3)玻璃儀器及測(cè)定池玻璃儀器及測(cè)定池高度潔凈高度潔凈 (4) 溫度：控制測(cè)定溫度溫度：控

24、制測(cè)定溫度 （二）熒光分析法（二）熒光分析法 39 3.測(cè)定方法與含量計(jì)算測(cè)定方法與含量計(jì)算 在一定實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，在在一定實(shí)驗(yàn)條件時(shí)，在較稀濃度范較稀濃度范圍圍內(nèi)藥物的熒內(nèi)藥物的熒 光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比。光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比。 對(duì)照品比較對(duì)照品比較 法法 rbr XbX rX r X rbr XbX RR RR CC C C RR RR （二）熒光分析法（二）熒光分析法 40 利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中分配系數(shù)差異利用物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中分配系數(shù)差異 而得以分離，并在檢測(cè)中能檢出其信號(hào)，從而達(dá)到而得以分離，并在檢測(cè)中能檢出其信號(hào)，從而達(dá)到分分 離、分析離、分析的

25、一類分析方法。的一類分析方法。 色譜分析法是分析混合物的最有力手段。色譜分析法是分析混合物的最有力手段。 三三 色譜分析法色譜分析法 41 1.1.特點(diǎn)與適用范圍特點(diǎn)與適用范圍 特點(diǎn)：特點(diǎn)： l高靈敏度：高靈敏度：10-15 10-12g/ml， l高專屬性：高專屬性： l高效能與高速度：高效能與高速度： 適用范圍：適用范圍：廣泛應(yīng)用于藥物制劑的含量測(cè)定，尤其廣泛應(yīng)用于藥物制劑的含量測(cè)定，尤其 是復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法。是復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法。 三三 色譜分析法色譜分析法 42 2.2.分類分類 依據(jù)分離原理：依據(jù)分離原理： l吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與分子排阻吸附色譜、分配

26、色譜、離子交換色譜與分子排阻 色色譜等。譜等。 依據(jù)分離方式：依據(jù)分離方式： lHPLC、GC、TLC等等 三三 色譜分析法色譜分析法 43 Ch.P各品種項(xiàng)下的色譜條件各品種項(xiàng)下的色譜條件 固定條件固定條件 固定相種類固定相種類 流動(dòng)相組成流動(dòng)相組成 檢測(cè)器類型檢測(cè)器類型 可變條件可變條件 色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度 流動(dòng)相各組成的比例、流速流動(dòng)相各組成的比例、流速 檢測(cè)器的靈敏度檢測(cè)器的靈敏度 柱溫、進(jìn)樣量柱溫、進(jìn)樣量 系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 44 1. 對(duì)儀器的一般要求對(duì)儀器的一般要求 填充劑填充劑 常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（常用

27、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18） 離子交換色譜離子交換色譜離子交換填充劑離子交換填充劑 分子排阻色譜分子排阻色譜凝膠或高分子多微球填充劑凝膠或高分子多微球填充劑 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器最常用。檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器最常用。 熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè) 器等。器等。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 45 1. 對(duì)儀器的一般要求對(duì)儀器的一般要求 流動(dòng)相：流動(dòng)相： 反相色譜系統(tǒng)首選甲醇反相色譜系統(tǒng)首選甲醇-水系統(tǒng)；采用紫外末水系統(tǒng)；采用紫外末 端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，首選乙腈端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，首選乙腈-水系統(tǒng)。水系統(tǒng)。 （一）高效液相色譜法（一）高

28、效液相色譜法(附錄附錄) 46 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 指用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)指用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 溶液對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。包括溶液對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求。包括 理論板數(shù)（理論板數(shù)（n）、分離度（）、分離度（R）、拖尾因子（）、拖尾因子（T） 和重復(fù)性和重復(fù)性等四個(gè)指標(biāo)。等四個(gè)指標(biāo)。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 47 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) （1）色譜柱的理論板數(shù)）色譜柱的理論板數(shù)(n)：用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離：用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離 效能。一般為待測(cè)組分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。效能。一般為待測(cè)組分或

29、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。 2 2 54. 5 h R W t n 色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 48 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) （2）分離度（）分離度（R）：用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與相鄰共存無）：用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與相鄰共存無 或難分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能或難分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能 的關(guān)鍵指標(biāo)。的關(guān)鍵指標(biāo)。 21 WW 2 R 12 RR tt 除另有規(guī)定外，待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離除另有規(guī)定外，待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離 度應(yīng)大于度應(yīng)大于1.5。 （一）高效

30、液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 49 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) l采用外標(biāo)法時(shí)，取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣采用外標(biāo)法時(shí)，取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積次，峰面積 RSD應(yīng)應(yīng)2.0%； l采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，配制相當(dāng)于采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，配制相當(dāng)于80%、100%、120%的對(duì)的對(duì) 照液，加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣照液，加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正次，計(jì)算平均校正 因子，因子，RSD亦應(yīng)亦應(yīng)2.0%。 （3）重復(fù)性：用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣中，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值）重復(fù)性：用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣中，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值 的重復(fù)性能。的重復(fù)性能。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 50

31、 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) （4）拖尾因子）拖尾因子(T)：用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。：用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。 1 05. 0 2d W T h 除另有規(guī)定外，用峰高定量時(shí)除另有規(guī)定外，用峰高定量時(shí)T應(yīng)在應(yīng)在0.95 1.05之間。之間。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 51 （1）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 對(duì)照品對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)物對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子 3. 測(cè)定法測(cè)定法 RR ss CA CA f ）校正因子（ 供試品供試品+內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定供試品和內(nèi)供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定供試品和內(nèi) 標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，

32、計(jì)算含量標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計(jì)算含量 sS X X CA A fC ）含量（ %100% X CD W 含量 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 52 （2）外標(biāo)法）外標(biāo)法 供試品供試品供試品溶液供試品溶液 對(duì)照品對(duì)照品對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液 進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算含量進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算含量 R X RX A A CC）含量（ 缺點(diǎn)：不易精確控制缺點(diǎn)：不易精確控制 進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)或進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)或 自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 53 HPLCHPLC主要用于抗生素、生化藥品及含雜質(zhì)干擾測(cè)主要用于抗生素、生化藥品及含雜質(zhì)干擾測(cè) 定的化學(xué)

33、藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測(cè)定的化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分的含量測(cè) 定。定。 在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢(shì)。在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢(shì)。 （一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法(附錄附錄) 54 （二）氣相色譜法（二）氣相色譜法 GC 用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測(cè)用于本身具揮發(fā)性，或加熱氣化的供試品的測(cè) 定。如維生素定。如維生素E 1. 對(duì)對(duì)GC儀器一般要求儀器一般要求 l載氣為氮?dú)?；載氣為氮?dú)猓?l色譜柱為填充或毛細(xì)管柱色譜柱為填充或毛細(xì)管柱 l固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇 l檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)器：氫火焰離子化

34、檢測(cè)器 l進(jìn)樣方式：溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。進(jìn)樣方式：溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。 55 2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 除另有規(guī)定外，應(yīng)照除另有規(guī)定外，應(yīng)照HPLC項(xiàng)下的規(guī)定。項(xiàng)下的規(guī)定。 3. 測(cè)定方法測(cè)定方法 l手動(dòng)進(jìn)樣手動(dòng)進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)法定量?jī)?nèi)標(biāo)法定量 l自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣外標(biāo)法定量外標(biāo)法定量 l標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法可消除基質(zhì)效應(yīng)的影響可消除基質(zhì)效應(yīng)的影響 （二）氣相色譜法（二）氣相色譜法 56 小結(jié)小結(jié) o 化學(xué)原料藥的含量測(cè)定化學(xué)原料藥的含量測(cè)定容量分析法；容量分析法； o 制劑的含量測(cè)定制劑的含量測(cè)定色譜分析法；色譜分析法； o 制劑的定量檢查制劑的定量檢查(溶出度、含量均勻度的檢溶出度

35、、含量均勻度的檢 查查)光譜分析法；光譜分析法； 57 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 概述概述 分析前要采用一定的方法，分析前要采用一定的方法，使待測(cè)藥物或待測(cè)元使待測(cè)藥物或待測(cè)元 素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后再進(jìn)行分析測(cè)定。素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后再進(jìn)行分析測(cè)定。 前處理的目的是前處理的目的是消除干擾，保護(hù)儀器消除干擾，保護(hù)儀器，提高方法，提高方法 的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。 樣品前處理是分析檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)樣品前處理是分析檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié) 。 58 前處理對(duì)象：前處理對(duì)象： 1. 含金屬（含金屬（Ca、Fe、Hg、Zn） 2. 鹵素（鹵素

36、（F、Cl、Br、I）、）、N、P、S等等 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 59 1.含鹵素有機(jī)藥物含鹵素有機(jī)藥物 1）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合不牢固；）鹵素與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合不牢固； CCl3C(CH3)2OH 2)鹵素與芳環(huán)相連，結(jié)合牢固。鹵素與芳環(huán)相連，結(jié)合牢固。 樣品前處理分類樣品前處理分類 泛影酸泛影酸 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 60 2.含金屬的藥物含金屬的藥物 1)有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連， 結(jié)合比較牢固，如結(jié)合比較牢固，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞

37、撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利 樣品前處理分類樣品前處理分類 OCH2COONa CONHCH2CHCH2HgOH OCH3 NHCONH2 As O OHHO HgOCOCH3 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 61 2.含金屬的藥物含金屬的藥物 2)含金屬的有機(jī)藥物：含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，金屬原子不與碳原子直接相連， 通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，溶液中 能直接離解出金屬離子。能直接離解出金屬離子。 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵 樣品前處理分類樣品

38、前處理分類 C CH C C O O OFe O CCHOCH OOO C O O Sb Sb O O C OOO CHOCHC 2K+ 3H2O 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 62 根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不 同處理方法而異。同處理方法而異。 不經(jīng)有機(jī)破壞不經(jīng)有機(jī)破壞結(jié)合不牢結(jié)合不牢 固固 經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞結(jié)合牢固結(jié)合牢固 前處理方法前處理方法 樣品前處理方法樣品前處理方法 第二節(jié)第二節(jié) 樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 63 1.直接測(cè)定法；直接測(cè)定法； 2.經(jīng)水解后測(cè)定法；經(jīng)水解后測(cè)定法； 3.經(jīng)氧化還原

39、后測(cè)定法。經(jīng)氧化還原后測(cè)定法。 不對(duì)藥物分子的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞不對(duì)藥物分子的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞 通過選用適當(dāng)溶劑溶解或經(jīng)簡(jiǎn)單回流處理，使待通過選用適當(dāng)溶劑溶解或經(jīng)簡(jiǎn)單回流處理，使待 測(cè)元素電離、離解，轉(zhuǎn)化為無機(jī)離子進(jìn)行測(cè)定，測(cè)元素電離、離解，轉(zhuǎn)化為無機(jī)離子進(jìn)行測(cè)定， 適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素藥適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素藥 物的分析。物的分析。 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 64 1.直接測(cè)定法直接測(cè)定法 適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進(jìn)行滴定適用于金屬離子藥物溶解后，可直接進(jìn)行滴定 如：葡萄糖酸鈣的含量測(cè)定如：葡萄糖酸鈣的含

40、量測(cè)定 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 65 2.經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法 （1）堿水解后測(cè)定法）堿水解后測(cè)定法 適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合適用于鹵素原子與脂肪鏈的碳原子相連，結(jié)合 不牢固的藥物。不牢固的藥物。 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 66 CCl3C(CH3)2OH 三氯叔丁醇三氯叔丁醇 溶于溶于NaOH溶液加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的溶液加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的 鹵素，經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后鹵素，經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后 選用間接銀量法進(jìn)行測(cè)定。選用間接銀量法進(jìn)行測(cè)定。 CCl3C(CH

41、3)2OH+NaOH(CH3)2CO+NaCl+HCOONa NaCl+AgNO3AgCl+NaNO3 AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3 回流回流 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 67 2.經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法 （2）酸水解后測(cè)定法）酸水解后測(cè)定法 將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)乃峁矡?，將不溶將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)乃峁矡?，將不?性的金屬鹽類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位性的金屬鹽類，水解置換為可溶性鹽，然后用配位 滴定或剩余酸堿滴定法滴定或剩余酸堿滴定法 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 68 硬脂酸鎂硬脂酸鎂 硬脂酸鎂與定

42、量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硬脂酸鎂與定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和 硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定 Mg(C17H35COO)2+H2SO4 MgSO4+2C17H35COOH H2SO4+NaOHNa2SO4+H2O 回流回流 一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 69 3.氧化還原后測(cè)定法氧化還原后測(cè)定法 鹵素結(jié)合于苯環(huán)，結(jié)合牢固，在堿性鹵素結(jié)合于苯環(huán)，結(jié)合牢固，在堿性(或酸性或酸性) 條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無機(jī)鹵化條件下加還原劑鋅粉，加熱回流。形成無機(jī)鹵化 物后用測(cè)定。物后用測(cè)定。 如：泛影酸含量測(cè)定。如：泛影酸含量測(cè)定。 一、

43、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 70 +3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O NaOH 回流回流 Zn粉粉 加熱加熱 NaI+AgNO3 AgI+NaNO3 曙紅為吸附指示劑曙紅為吸附指示劑黃色黃色玫瑰紅色玫瑰紅色 例：泛影酸的含量測(cè)定例：泛影酸的含量測(cè)定 銀量法銀量法 71 含氮、硫、磷有機(jī)藥物及有機(jī)金屬藥物中待測(cè)離子含氮、硫、磷有機(jī)藥物及有機(jī)金屬藥物中待測(cè)離子 與碳原子結(jié)合牢固，用上述方法難以成為無機(jī)的化與碳原子結(jié)合牢固，用上述方法難以成為無機(jī)的化 合物，此時(shí)必須采用有機(jī)破壞的方法，使之轉(zhuǎn)變?yōu)楹衔?，此時(shí)必須采用有機(jī)破壞的方法，使之轉(zhuǎn)變?yōu)?無機(jī)化合物，方

44、可進(jìn)行測(cè)定。無機(jī)化合物，方可進(jìn)行測(cè)定。 二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 （一）濕法破壞法（一）濕法破壞法 （二）干法破壞法（二）干法破壞法 72 （一）濕法破壞法（一）濕法破壞法 主要采用強(qiáng)酸進(jìn)行有機(jī)破壞，將有機(jī)結(jié)合的待測(cè)主要采用強(qiáng)酸進(jìn)行有機(jī)破壞，將有機(jī)結(jié)合的待測(cè) 元素轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定無機(jī)化合物。本法可用于生物制元素轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定無機(jī)化合物。本法可用于生物制 品中氮、磷或金屬元素的測(cè)定。品中氮、磷或金屬元素的測(cè)定。 根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為：根據(jù)所用試劑試劑不同，可分為： 1）硝酸）硝酸高氯酸法高氯酸法 2）硫酸）硫酸硫酸鹽法硫酸鹽法 3）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 4）其他濕法）其

45、他濕法 二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 73 例：例：凱氏定氮法凱氏定氮法 以以硫酸硫酸-硫酸鹽法硫酸鹽法為基礎(chǔ)的為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分含氮有機(jī)藥物定量分 析方法。析方法。 適用于含氮有機(jī)藥物的前處理。適用于含氮有機(jī)藥物的前處理。 二二 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 74 1.原理：原理： 供試品供試品 NH4HSO4+(NH4)2SO4 2NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2O NH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3 +H2O H2SO4 吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液 凱氏定氮法凱氏定氮法 75 （1）消解（凱氏燒瓶

46、中進(jìn)行）消解（凱氏燒瓶中進(jìn)行） 操作操作將將樣品、樣品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱放入凱 氏燒瓶中一起加熱，使被測(cè)有機(jī)物含氮化合物中的氏燒瓶中一起加熱，使被測(cè)有機(jī)物含氮化合物中的N 全部轉(zhuǎn)化為銨鹽的形式全部轉(zhuǎn)化為銨鹽的形式 (NH4)2SO4、NH4HSO4 2.測(cè)定法測(cè)定法分為分為3個(gè)步驟個(gè)步驟 消解、蒸餾吸收、滴定消解、蒸餾吸收、滴定 凱氏定氮法凱氏定氮法 76 消解中各試劑作用消解中各試劑作用 H2SO4氧化劑和炭化劑，生成氧化劑和炭化劑，生成SO2和和H2O K2SO4提高提高H2SO4沸點(diǎn)縮短消解時(shí)間沸點(diǎn)縮短消解時(shí)間 CuSO4催化劑，使消解速度加快催化劑，使消解速度加

47、快 消解產(chǎn)物消解產(chǎn)物(NH4)2SO4、NH4HSO4 分解完全的依據(jù)是分解液應(yīng)為無色或綠色分解完全的依據(jù)是分解液應(yīng)為無色或綠色 凱氏定氮法凱氏定氮法 77 （2）蒸餾與吸收）蒸餾與吸收 蒸餾：消解液加入蒸餾：消解液加入40%的的NaOH溶液后蒸餾溶液后蒸餾 2NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2O NH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3 +H2O 吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液 凱氏定氮法凱氏定氮法 78 （3）滴定）滴定直接滴定法直接滴定法 滴定液：滴定液：H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 每每1ml的的0.05mol/L H2SO4

48、=1.401mg的氮的氮 指示劑：甲基紅指示劑：甲基紅溴甲酚綠混合指示劑溴甲酚綠混合指示劑 終點(diǎn)顏色：終點(diǎn)顏色：藍(lán)綠色藍(lán)綠色灰紫色灰紫色 NH3+H3BO3NH3H3BO3 (NH4)2SO4+2H3BO3 NH3H3BO3+H2SO4 傳遞作用傳遞作用 凱氏定氮法凱氏定氮法 79 （3）滴定）滴定剩余滴定法剩余滴定法 吸收液吸收液 將蒸餾出來的將蒸餾出來的NH3用定量、過量的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或用定量、過量的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或 硫酸吸收，過量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。硫酸吸收，過量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。 凱氏定氮法凱氏定氮法 80 81 凱氏定氮法可分為：凱氏定氮法可分為： 第一法（常量法）第一法（常量法）含氮量

49、含氮量2530mg H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 第二法（半微量法）第二法（半微量法）含氮量含氮量1.02.0mg H2SO4滴定液（滴定液（0.005mol/L） 凱氏定氮法凱氏定氮法 82 （二）干法破壞（二）干法破壞 適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)物的前處理，亦適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)物的前處理，亦 可用于含硒、砷鹽藥物的測(cè)定?？捎糜诤?、砷鹽藥物的測(cè)定。 1、高溫?zé)胱品?、高溫?zé)胱品?2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 三三 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 83 1、高溫?zé)胱品ā⒏邷責(zé)胱品?主要用于含鹵素藥物的鑒別。主要用于含鹵素藥物的鑒別。 本法將有機(jī)藥物經(jīng)高溫本法將

50、有機(jī)藥物經(jīng)高溫灼燒灰化灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分 解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或可溶性的無機(jī)鹽。解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或可溶性的無機(jī)鹽。 將適量樣品置坩堝中，常加入無水將適量樣品置坩堝中，常加入無水Na2CO3、 Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等輔助灰化等輔助灰化，混合均，混合均 勻后，先小火加熱，使樣品完全勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化炭化，然后放入，然后放入 高溫爐中灼燒，使其灰化完全。高溫爐中灼燒，使其灰化完全。 （二）干法破壞（二）干法破壞 84 （1）原理）原理 將將有機(jī)藥物有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進(jìn)行燃燒，放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進(jìn)行燃燒， 并將燃燒

51、所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收在適當(dāng)并將燃燒所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收在適當(dāng)吸收液吸收液中，中， 然后根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適當(dāng)分析方法進(jìn)行然后根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適當(dāng)分析方法進(jìn)行 鑒別、檢查或含量測(cè)定。鑒別、檢查或含量測(cè)定。 適用于含適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查的鑒別、檢查 和含量測(cè)定。和含量測(cè)定。 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 85 （2 2）儀器裝置）儀器裝置 86 容量大小隨樣品量而定，一般容量大小隨樣品量而定，一般500ml、1000ml。 取樣量通常為取樣量通常為1020 mg，使用，使用500 ml燃燒瓶。燃燒瓶。 含氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。含

52、氟藥物用石英或聚氯乙烯制成的燃燒瓶。 硬質(zhì)玻璃碘瓶硬質(zhì)玻璃碘瓶 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 87 鉑絲鉑絲 瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀，瓶塞底部熔封一根鉑絲，鉑絲下端做成螺旋狀， 長(zhǎng)度約為瓶身的長(zhǎng)度約為瓶身的2/3； 鉑絲作用鉑絲作用 a.固定樣品固定樣品 b.催化作用催化作用使樣品分解完全使樣品分解完全 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 88 無灰濾紙無灰濾紙 樣品研細(xì)后放中間，樣品研細(xì)后放中間， 按照虛線折疊固定于鉑絲按照虛線折疊固定于鉑絲 下端螺旋處。下端螺旋處。 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 89 稱樣用材料及稱樣稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品固體樣品 無灰濾紙無灰濾紙 B.

53、液體樣品液體樣品 紙袋紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分 的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 90 （4）操作）操作 取樣取樣1020mg，放入濾紙包好，放入濾紙包好 樣品樣品燃燒產(chǎn)物燃燒產(chǎn)物吸收液吸收液適宜法測(cè)定適宜法測(cè)定 吸收于吸收于 燃燒燃燒 O2/Pt 加吸收液、通氧加吸收液、通氧 燃燒燃燒 吸收吸收 測(cè)定測(cè)定 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 91 （5）注意事項(xiàng)）注意事項(xiàng) 氧氣要充分氧氣要充分 使樣品燃燒完全，燃燒完全時(shí)沒有黑色炭化物。使樣品燃燒完全，燃燒完全時(shí)沒有

54、黑色炭化物。 樣品燃燒時(shí)，溫度很高，燃燒瓶?jī)?nèi)壓力很大，有爆樣品燃燒時(shí)，溫度很高，燃燒瓶?jī)?nèi)壓力很大，有爆 炸的可能性，必須采取防護(hù)措施。炸的可能性，必須采取防護(hù)措施。 防爆防爆 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 92 吸收液吸收液定量吸收待測(cè)元素各種價(jià)態(tài)并轉(zhuǎn)化為單一定量吸收待測(cè)元素各種價(jià)態(tài)并轉(zhuǎn)化為單一 價(jià)態(tài)。價(jià)態(tài)。 根據(jù)被測(cè)物種類及分析方法選擇根據(jù)被測(cè)物種類及分析方法選擇: H2O、H2O-NaOH、H2O-NaOH-H2O2 吸收完全吸收完全:一般振搖一般振搖30min，燃燒瓶看不到煙霧。，燃燒瓶看不到煙霧。 吸收液選擇吸收液選擇 Cl-、F- 白色煙霧白色煙霧 Br- 棕色、棕色、I- 紫色紫色

55、2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 93 含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物 氟化物、氯化物氟化物、氯化物 R- X X-+CO2+H2O O2/Pt 氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選氟或氯以離子狀態(tài)存在，可選用水或水用水或水-氫氧化鈉氫氧化鈉 吸收后可直接測(cè)定。吸收后可直接測(cè)定。 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 94 R-BrR-BrBrBr2 2+Br+Br- -+CO+CO2 2+H+H2 2O O O O2 2/Pt/Pt 量大量大 量少量少 含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物 溴化物溴化物 燃燒后以溴化氫和單質(zhì)溴的混合物存在，可在水燃燒后以溴化氫和單質(zhì)溴的混合物存在，可在水- 氫氧化鈉吸收

56、液中加氫氧化鈉吸收液中加SO2飽和溶液還原飽和溶液還原Br2Br- 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 95 含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物含鹵素藥物的燃燒產(chǎn)物 碘化物碘化物 R-IR-II I2 2+I+I- -+IO+IO3 3- -+IO+IO_ _+CO+CO2 2+H+H2 2O O O O2 2/Pt/Pt 量大量大 微量微量 量少量少 銀量法銀量法 I-+Ag+ AgI 水水-氫氧化鈉氫氧化鈉-SO2飽和溶液飽和溶液 碘量法碘量法 I2+2S2O32- S4O62-+2I- 水水-氫氧化鈉溶液吸收，用氫氧化鈉溶液吸收，用溴溴-醋酸醋酸溶液氧化為溶液氧化為IO3- 再用再用KI還原為還原為I2 2、

57、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 96 含硫藥物的燃燒產(chǎn)物含硫藥物的燃燒產(chǎn)物 R-SSO3+H2O+CO2 O2/Pt SO3+H2O2+H2O SO42- SO42-+BaCl2 BaSO4 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 97 含磷藥物的燃燒產(chǎn)物含磷藥物的燃燒產(chǎn)物 R-PP2O5+H2O+CO2 O2/Pt P2O5+HNO3+H2O H3PO4 采用磷鉬藍(lán)比色法測(cè)定含量采用磷鉬藍(lán)比色法測(cè)定含量 磷酸磷酸+鉬酸銨鉬酸銨 磷鉬酸磷鉬酸 磷鉬藍(lán)磷鉬藍(lán) 還原劑還原劑 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 98 含硒藥物的燃燒產(chǎn)物含硒藥物的燃燒產(chǎn)物 R-SeSeO2+SeO3+H2O+CO2 O2/Pt SeO2+SeO

58、3+HNO3 H2SeO4 與與二氨基萘二氨基萘反應(yīng)生成反應(yīng)生成綠色熒光物質(zhì)綠色熒光物質(zhì) 比色法測(cè)定含量比色法測(cè)定含量 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 99 實(shí)例實(shí)例碘苯酯的含量測(cè)定碘苯酯的含量測(cè)定 原理：原理：有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解為碘化物，再 被氧化為游離碘后被吸收液吸收被氧化為游離碘后被吸收液吸收 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 100 燃燒燃燒吸收吸收（NaOH+H2O） R-II2+NaI+NaIO3+CO2+H2O+NaCl O 加入溴加入溴醋酸氧化醋酸氧化 劑劑 將將I-、I2氧化為氧化為IO3- 2NaI+Br2=2NaBr+I2 I2+5Br

59、2+6H2O=2HIO3+10HBr 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 101 加入甲酸除去過量的溴加入甲酸除去過量的溴 Br2+HCOOH2HBr+CO2 加加KI還原還原KI+IO3-3I2+H2O 滴滴 定定 I2+2Na2S2O32HNaI+Na2S4O6 至淀粉指示劑藍(lán)色消失至淀粉指示劑藍(lán)色消失 2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法 102 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 分析方法驗(yàn)證目的：證明采用的分析方法準(zhǔn)確、分析方法驗(yàn)證目的：證明采用的分析方法準(zhǔn)確、 可靠。（能反應(yīng)真實(shí)測(cè)定結(jié)果）可靠。（能反應(yīng)真實(shí)測(cè)定結(jié)果） 分析方法驗(yàn)證應(yīng)用對(duì)象分析方法驗(yàn)證應(yīng)用對(duì)象 1.研究新藥

60、制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證；研究新藥制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證； 2.藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、原分析方法 修訂時(shí)需對(duì)質(zhì)量分析方法進(jìn)行驗(yàn)證；修訂時(shí)需對(duì)質(zhì)量分析方法進(jìn)行驗(yàn)證； 3.發(fā)表研究論文對(duì)建立的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。發(fā)表研究論文對(duì)建立的分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。 103 需驗(yàn)證的項(xiàng)目需驗(yàn)證的項(xiàng)目 驗(yàn)證的內(nèi)容驗(yàn)證的內(nèi)容 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 定量限定量限 防腐劑防腐劑 溶出度溶出度,釋放度釋放度 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查 含量測(cè)定含量測(cè)定 精密度精密度 專屬性專屬性 檢測(cè)限檢測(cè)限 線性線性 范圍范圍 耐用性耐用性 重復(fù)性重復(fù)性 中間精密度中間