生物藥物的分離純化

1、主要講授內(nèi)容 1.生物藥物原料的選擇、預(yù)處理與保存方法生物藥物原料的選擇、預(yù)處理與保存方法 2. 生物藥物的提取生物藥物的提取 3. 蛋白質(zhì)類藥物的分離純化方法蛋白質(zhì)類藥物的分離純化方法 4. 核酸類藥物的分離純化方法核酸類藥物的分離純化方法 5. 糖類藥物的分離純化方法糖類藥物的分離純化方法 6. 脂類藥物的分離純化方法脂類藥物的分離純化方法 7. 氨基酸類藥物的分離純化方法氨基酸類藥物的分離純化方法 1.1 生物藥物原料的選擇生物藥物原料的選擇 生物藥物生產(chǎn)原料的選擇原則主要是：(1) 有效成分含量高，原料新鮮有效成分含量高，原料新鮮；(2)原料來(lái)源原料來(lái)源 豐富，易得，原料產(chǎn)地較近豐富，

2、易得，原料產(chǎn)地較近；(3)原料中雜原料中雜 質(zhì)含量少質(zhì)含量少；(4)原料成本低等原料成本低等。但是，同時(shí) 具備這4種有利因素的原料不多，生產(chǎn)研究 者可酌情選擇，但第一條是最重要的。 原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料 要注意要注意植物生長(zhǎng)的季節(jié)性植物生長(zhǎng)的季節(jié)性，選擇最佳采集，選擇最佳采集 時(shí)間；微生物原料要注意時(shí)間；微生物原料要注意微生物生長(zhǎng)的對(duì)微生物生長(zhǎng)的對(duì) 數(shù)期長(zhǎng)短數(shù)期長(zhǎng)短；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的類類 別別、年齡年齡與與性別性別。 也應(yīng)注意原料的也應(yīng)注意原料的采集地采集地和和批次批次。 1.2 原料的預(yù)處理與保存原料的預(yù)處

3、理與保存 動(dòng)物原料動(dòng)物原料采集后要立即處理，去除結(jié)締組采集后要立即處理，去除結(jié)締組 織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存；織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存；植物植物 原料確定后原料確定后，要擇時(shí)采集并就地除去沒(méi)有，要擇時(shí)采集并就地除去沒(méi)有 用的部分，將有用部分保鮮處理；用的部分，將有用部分保鮮處理；收集微收集微 生物原料生物原料時(shí)時(shí)，要及時(shí)將菌體細(xì)胞與培養(yǎng)液，要及時(shí)將菌體細(xì)胞與培養(yǎng)液 分開(kāi)，進(jìn)行保鮮處理。分開(kāi)，進(jìn)行保鮮處理。 原料的保存方法主要有：原料的保存方法主要有：冷凍法冷凍法。該。該 方法適用于所有生物原料。常用方法適用于所有生物原料。常用-40速速 凍。凍。有機(jī)溶劑脫水法有機(jī)溶劑脫水法。常用的

4、有機(jī)溶。常用的有機(jī)溶 劑是丙酮。該法適用于原料少而價(jià)值高、劑是丙酮。該法適用于原料少而價(jià)值高、 有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒(méi)有破壞作用的原有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒(méi)有破壞作用的原 料，如腦垂體等。料，如腦垂體等。防腐劑保鮮防腐劑保鮮。常用。常用 乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料， 如發(fā)酵液、提取液等。如發(fā)酵液、提取液等。 2. 生物藥物的提取生物藥物的提取 (1) 生物組織與細(xì)胞的破碎生物組織與細(xì)胞的破碎 (2) 生物組織細(xì)胞破碎后立即進(jìn)行提取生物組織細(xì)胞破碎后立即進(jìn)行提取 生物組織與細(xì)胞的破碎生物組織與細(xì)胞的破碎 生物藥物大部分存在于生物藥物大部分存在于生物組織或細(xì)胞生物

5、組織或細(xì)胞中，中， 要提高提取率，對(duì)生物組織與細(xì)胞的破碎要提高提取率，對(duì)生物組織與細(xì)胞的破碎 過(guò)程是非常重要的過(guò)程是非常重要的。 常用的破碎方法有5種： A. 磨切法磨切法，該法屬于機(jī)械破碎方法，使用該法屬于機(jī)械破碎方法，使用 的設(shè)備有組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、的設(shè)備有組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、 勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽等。勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽等。 B. 壓力法壓力法，這類方法有加壓與減壓兩種，這類方法有加壓與減壓兩種， 常用的常用的法蘭西壓釜法蘭西壓釜使用效果良好。使用效果良好。 C. 反復(fù)凍融法反復(fù)凍融法，該方法設(shè)備簡(jiǎn)便，活性保 持好，但用時(shí)較長(zhǎng)。 D.超聲波振蕩破碎法超聲波振蕩破碎法，該

6、方法破碎效果較 好，但由于局部發(fā)熱，對(duì)活性有損失。 E. 自溶法或酶解法自溶法或酶解法，用得較少。 生物組織活性物質(zhì)的提取要在細(xì)胞破碎后生物組織活性物質(zhì)的提取要在細(xì)胞破碎后 立即進(jìn)行。立即進(jìn)行。 提取過(guò)程中提取過(guò)程中 （1）要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，選擇提取要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，選擇提取 試劑。試劑。提取試劑主要有：水、緩沖溶液、提取試劑主要有：水、緩沖溶液、 鹽溶液、乙醇、其他有機(jī)溶劑鹽溶液、乙醇、其他有機(jī)溶劑(如氯仿、丙如氯仿、丙 酮等酮等)。 （2）考慮提取溶劑的用量（料液比）及考慮提取溶劑的用量（料液比）及 提取次數(shù)、提取時(shí)間。提取次數(shù)、提取時(shí)間。 （3）注意提取的溫度、注意提取的溫度、p

7、H、變性劑等、變性劑等 因素。因素。這樣才可以保證活性物質(zhì)提取充這樣才可以保證活性物質(zhì)提取充 分而且不變性。分而且不變性。 3. 蛋白質(zhì)類藥物的分離純化方法蛋白質(zhì)類藥物的分離純化方法 蛋白質(zhì)類藥物主要包括蛋白質(zhì)、多肽和酶蛋白質(zhì)類藥物主要包括蛋白質(zhì)、多肽和酶 類等藥物。它們的分離純化方法有：類等藥物。它們的分離純化方法有： (1) 沉淀法沉淀法 (2) 按按分子大小分離分子大小分離的方法的方法 (3) 按按分子所帶電荷分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法進(jìn)行分離的方法 (4) 親和層析法親和層析法 (1) 沉淀法沉淀法 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。該蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。該 法的原理是使

8、蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而法的原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而 沉淀蛋白質(zhì)。常用的有沉淀蛋白質(zhì)。常用的有鹽析法鹽析法、有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 沉淀法沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法等電點(diǎn)沉淀法、與靶物質(zhì)結(jié)合沉與靶物質(zhì)結(jié)合沉 淀法淀法(如抗體一抗原如抗體一抗原)等。等。 (2) 按分子大小分離的方法按分子大小分離的方法 這類方法有這類方法有超濾法超濾法和和透析法透析法(即膜分離方法即膜分離方法)、 凝膠層析法凝膠層析法、超速離心法超速離心法等。其中膜分離等。其中膜分離 法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和 脫鹽。脫鹽。 (3) 按分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法按分子所帶電荷進(jìn)行分離的

9、方法 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解 質(zhì)。它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的質(zhì)。它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的pH 時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電 點(diǎn)為點(diǎn)為7.0，當(dāng)溶液，當(dāng)溶液pH為為4.0時(shí)，分子則帶有時(shí)，分子則帶有 正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì)正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì) 進(jìn)行分離是極其有效的方法。進(jìn)行分離是極其有效的方法。 利用蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)行分離的方法有：利用蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)行分離的方法有： 離子交換柱層析法離子交換柱層析法； 電泳法電泳法； 等電聚焦法等電聚焦法。 （4）親和層析法）親和層

10、析法 大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)， 如如酶與底物酶與底物(或抑制劑或抑制劑)、抗原與抗體抗原與抗體、激素激素 與受體與受體等，它們之間有特異的親合作用，等，它們之間有特異的親合作用， 利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱為利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱為 親和層析。親和層析。親和層析分離專一性強(qiáng)親和層析分離專一性強(qiáng)，操作，操作 簡(jiǎn)便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。簡(jiǎn)便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。 親和層析法主要包括：親和層析法主要包括：疏水反應(yīng)層析、金疏水反應(yīng)層析、金 屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親和層屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親

11、和層 析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)親和析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)親和 層析等。層析等。親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì) 分離和純化。分離和純化。 4. 核酸類藥物的分離純化方法核酸類藥物的分離純化方法 核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有提取法提取法和和發(fā)酵發(fā)酵 法法。 提取法提取法生產(chǎn)生產(chǎn)DNA和和RNA的主要技術(shù)是，先的主要技術(shù)是，先 提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與 蛋白質(zhì)，然后分離蛋白質(zhì)，然后分離RNA與與DNA。 發(fā)酵法發(fā)酵法主要用于生產(chǎn)單核苷酸。主要用于生產(chǎn)單核苷酸。 5糖類藥物的分離純化方法糖類

12、藥物的分離純化方法 由于各種糖類藥物的性質(zhì)和原料來(lái)源不同，由于各種糖類藥物的性質(zhì)和原料來(lái)源不同， 沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只 介紹介紹多糖多糖和和粘多糖粘多糖的一般分離純化方法。的一般分離純化方法。 提取方法提取方法 非降解法非降解法：適用于從含一種粘多糖的動(dòng)物：適用于從含一種粘多糖的動(dòng)物 組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是水水 或或鹽鹽溶液。溶液。 降解法：降解法：適用于從組織中提取結(jié)合比較牢適用于從組織中提取結(jié)合比較牢 固的粘多糖。例如從軟骨中分離提取硫酸固的粘多糖。例如從軟骨中分離提取硫酸 軟骨素，就是用堿處

13、理進(jìn)行降解，又如用軟骨素，就是用堿處理進(jìn)行降解，又如用 酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。 (2) 分離方法分離方法 常用的分離純化多糖的方法是常用的分離純化多糖的方法是乙醇沉淀法乙醇沉淀法 和和離子交換層析法離子交換層析法。 乙醇沉淀法乙醇沉淀法是從提取液中沉淀多糖的最簡(jiǎn)易是從提取液中沉淀多糖的最簡(jiǎn)易 方法，也適用于方法，也適用于分級(jí)分離分級(jí)分離。用。用45倍體積的倍體積的 乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉 淀。淀。 季銨化合物季銨化合物也可用于沉淀粘多糖也可用于沉淀粘多糖,其原理是其原理是 粘多糖的聚陰離子粘多糖

14、的聚陰離子能與某些陽(yáng)離子表面活性能與某些陽(yáng)離子表面活性 劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如十六烷基三甲基劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如十六烷基三甲基 銨銨(CTA)等。等。 離子交換層析法：離子交換層析法：粘多糖的聚陰離子能夠粘多糖的聚陰離子能夠 很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如 Dowex-I-X2離子交換樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂、DEAE-離子離子 交換纖維素交換纖維素*等。洗脫可用等。洗脫可用NaCl溶液進(jìn)行溶液進(jìn)行 梯度洗脫。梯度洗脫。 注意從粗多糖中除去蛋白常用的方法有：注意從粗多糖中除去蛋白常用的方法有： Sevag法法、三氯乙酸法三氯乙酸法和和蛋白酶解法蛋白酶解法。

15、 *二乙氨基乙基纖維素二乙氨基乙基纖維素 6. 脂類藥物的分離純化方法脂類藥物的分離純化方法 (1) 提取方法提取方法 脂類自然狀態(tài)下是以結(jié)合脂類自然狀態(tài)下是以結(jié)合 形式存在的。形式存在的。非極性脂是與其他脂質(zhì)分子非極性脂是與其他脂質(zhì)分子 或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的。因此，。因此， 提取脂質(zhì)藥物就是提取脂質(zhì)藥物就是要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)破要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)破 壞這種結(jié)合鍵壞這種結(jié)合鍵，將脂質(zhì)溶解出來(lái)。常用的，將脂質(zhì)溶解出來(lái)。常用的 溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分，溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分， 此外還有氯仿、甲醇、水等。此外還有氯仿、甲醇、水等。 (2) 純

16、化方法純化方法 沉淀法：沉淀法：由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度 不同，故常用它進(jìn)行沉淀。不同，故常用它進(jìn)行沉淀。 吸附層析法：吸附層析法：常用吸附劑有硅膠、氧化常用吸附劑有硅膠、氧化 鋁等。它是通過(guò)極性和離子鍵力等把各鋁等。它是通過(guò)極性和離子鍵力等把各 種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。一般是種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。一般是 采用極性逐漸增大的洗脫液來(lái)進(jìn)行，非采用極性逐漸增大的洗脫液來(lái)進(jìn)行，非 極性組分先流出，極性組分后流出。極性組分先流出，極性組分后流出。 離子交換層析法：離子交換層析法：脂質(zhì)分子的存在有脂質(zhì)分子的存在有非非 解離解離和和酸式解離酸式解離兩兩種狀態(tài)種狀態(tài)。根

17、據(jù)它們?cè)?。根?jù)它們?cè)?一定一定pH條件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)臈l件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)?離子交換劑可將它們提純。如離子交換劑可將它們提純。如TEAE-纖纖 維素維素*對(duì)分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。對(duì)分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。 三乙氨基乙基纖維素三乙氨基乙基纖維素 7. 氨基酸類藥物的分離純化方法氨基酸類藥物的分離純化方法 氨基酸的生產(chǎn)方法：氨基酸的生產(chǎn)方法： 蛋白質(zhì)水解法蛋白質(zhì)水解法 發(fā)酵法發(fā)酵法 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成與酶促合成法 蛋白質(zhì)水解法蛋白質(zhì)水解法：水解法有：水解法有酸酸水解、水解、堿堿水水 解和解和酶酶水解三種。用鹽酸水解為常用方水解三種。用鹽酸水解為常用方 法，其

18、優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全 部是部是L-型氨基酸，缺點(diǎn)是色氨酸全部被型氨基酸，缺點(diǎn)是色氨酸全部被 破壞，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法破壞，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法 易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法 水解不夠完全。水解不夠完全。 發(fā)酵法：發(fā)酵法：發(fā)酵法主要是選育特異產(chǎn)生某發(fā)酵法主要是選育特異產(chǎn)生某 種氨基酸的菌株，經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，從培養(yǎng)種氨基酸的菌株，經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，從培養(yǎng) 液中提純氨基酸。液中提純氨基酸。 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成與酶促合成法：化學(xué)合成法化學(xué)合成法一般一般 得到的是得到的是D/L-型氨基酸型氨基酸，需要對(duì)需

19、要對(duì)這些這些異構(gòu)異構(gòu) 體拆分體拆分；酶促合成法酶促合成法也是酶工程在醫(yī)藥工也是酶工程在醫(yī)藥工 業(yè)上應(yīng)用的一個(gè)內(nèi)容，優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡(jiǎn)業(yè)上應(yīng)用的一個(gè)內(nèi)容，優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡(jiǎn) 單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)物少和易提純等。單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)物少和易提純等。 氨基酸的分離方法：氨基酸的分離方法： 沉淀法沉淀法 吸附法吸附法 離子交換法離子交換法 沉淀法：沉淀法：根據(jù)形成沉淀的原理不同分為根據(jù)形成沉淀的原理不同分為 兩種：一種是依據(jù)不同兩種：一種是依據(jù)不同氨基酸在水中氨基酸在水中或或 其他溶劑中的溶解度差異其他溶劑中的溶解度差異進(jìn)行沉淀分離。進(jìn)行沉淀分離。 另一是用另一是用特殊試劑沉淀特殊試劑沉淀某種氨基酸，如某種氨

20、基酸，如 用用鄰二甲苯鄰二甲苯-4-磺酸與亮氨酸磺酸與亮氨酸形成不溶性形成不溶性 鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離 出來(lái)。出來(lái)。 吸附法：吸附法：這是利用吸附劑根據(jù)氨基酸吸這是利用吸附劑根據(jù)氨基酸吸 附力的差異進(jìn)行氨基酸分離的方法。苯附力的差異進(jìn)行氨基酸分離的方法。苯 丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利 用活性炭對(duì)其吸附的原理。用活性炭對(duì)其吸附的原理。 離子交換法：離子交換法：氨基酸是兩性電解質(zhì)，在氨基酸是兩性電解質(zhì)，在 一定一定pH條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及 解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換

21、解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換 劑上被吸附的強(qiáng)度不同。常用的離子交劑上被吸附的強(qiáng)度不同。常用的離子交 換劑為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，洗脫主換劑為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，洗脫主 要用要用pH梯度洗脫。梯度洗脫。 主要是蛋白質(zhì)分離 （1）固相化金屬親和層析）固相化金屬親和層析(IMAC) IMAC是近十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種親和層析是近十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種親和層析 技術(shù)。其原理是利用蛋白質(zhì)分子中的咪唑基技術(shù)。其原理是利用蛋白質(zhì)分子中的咪唑基 和巰基與一些金屬元素和巰基與一些金屬元素(Cu2+、Zn2+等等)配位配位 結(jié)合，使蛋白質(zhì)得到分離純化。該法比傳統(tǒng)結(jié)合，使蛋白質(zhì)得到分離純化。該法比傳統(tǒng) 的的凝膠

22、過(guò)濾一離子交換法凝膠過(guò)濾一離子交換法簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單、省時(shí)，適于、省時(shí)，適于 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化。 （2）超擴(kuò)散層析）超擴(kuò)散層析 這種層析所用介質(zhì)是這種層析所用介質(zhì)是Biosepra公司生產(chǎn)的公司生產(chǎn)的 Hyper-D。該層析介質(zhì)的顆粒由。該層析介質(zhì)的顆粒由剛性框架剛性框架 結(jié)結(jié)構(gòu)中填充構(gòu)中填充官能化的軟凝膠組成官能化的軟凝膠組成。它兼?zhèn)?。它兼?zhèn)?了軟凝膠的了軟凝膠的高上樣量高上樣量和普通剛性介質(zhì)的和普通剛性介質(zhì)的高高 流速流速。 這種結(jié)構(gòu)可使層析操作在高流速下進(jìn)行而這種結(jié)構(gòu)可使層析操作在高流速下進(jìn)行而 保證高上樣量和高分辨率，并且無(wú)反壓產(chǎn)保證高上樣量和高分辨率，并且無(wú)反壓產(chǎn) 生生。Hyp

23、er-D具有化學(xué)隋性具有化學(xué)隋性?？捎盟釅A進(jìn)可用酸堿進(jìn) 行再生和殺菌行再生和殺菌，可用于純化免疫球蛋白、，可用于純化免疫球蛋白、 白蛋白、激素、酶、細(xì)胞培養(yǎng)或發(fā)酵產(chǎn)生白蛋白、激素、酶、細(xì)胞培養(yǎng)或發(fā)酵產(chǎn)生 的蛋白質(zhì)。適用于實(shí)驗(yàn)室小試直至工業(yè)化的蛋白質(zhì)。適用于實(shí)驗(yàn)室小試直至工業(yè)化 大生產(chǎn)。大生產(chǎn)。 (3) 灌注層析灌注層析 1987年由年由Regnier等人發(fā)明的等人發(fā)明的灌注填料技灌注填料技 術(shù)術(shù)使快速分離純化生物大分子得以實(shí)現(xiàn)。使快速分離純化生物大分子得以實(shí)現(xiàn)。 1989年與之相配套的灌注系統(tǒng)年與之相配套的灌注系統(tǒng)(BioCAD workstation)問(wèn)世，給微生物制藥領(lǐng)域的問(wèn)世，給微生物制

24、藥領(lǐng)域的 科學(xué)家提供了強(qiáng)有力的工具，給生物制藥科學(xué)家提供了強(qiáng)有力的工具，給生物制藥 業(yè)帶來(lái)了突破性的進(jìn)展。業(yè)帶來(lái)了突破性的進(jìn)展。 它所采用的它所采用的POROUS介質(zhì)以苯乙烯基二乙介質(zhì)以苯乙烯基二乙 烯基苯的聚合物構(gòu)成，為雙模式孔結(jié)構(gòu)，烯基苯的聚合物構(gòu)成，為雙模式孔結(jié)構(gòu)， 在介質(zhì)上有在介質(zhì)上有80150nm的的擴(kuò)散孔擴(kuò)散孔和和600 800nm的的貫穿孔貫穿孔。它允許液體對(duì)流到分離。它允許液體對(duì)流到分離 介質(zhì)的內(nèi)表面，從而大大加快了分離速度。介質(zhì)的內(nèi)表面，從而大大加快了分離速度。 灌注層析系統(tǒng)可有效、快速地純化各種蛋灌注層析系統(tǒng)可有效、快速地純化各種蛋 白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子。白質(zhì)、多肽

25、、核酸等生物大分子。 它比傳統(tǒng)柱快它比傳統(tǒng)柱快l0100倍，分析一個(gè)樣品只倍，分析一個(gè)樣品只 需要需要0.53min。日本制藥公司。日本制藥公司Otsuka使使 用博大生物技術(shù)公司的用博大生物技術(shù)公司的POROS-50介質(zhì)和介質(zhì)和 大生產(chǎn)規(guī)模系統(tǒng)大生產(chǎn)規(guī)模系統(tǒng)(autopilot)生產(chǎn)單克隆抗體，生產(chǎn)單克隆抗體， 從從320L樣品中純化出樣品中純化出13g抗體只花了抗體只花了80min， 收率收率95。 (4) 其他快速分離純化系統(tǒng)其他快速分離純化系統(tǒng) streamline擴(kuò)張柱床吸附技術(shù)擴(kuò)張柱床吸附技術(shù)：已廣泛：已廣泛 應(yīng)用于應(yīng)用于Ecoli如包涵體、胞內(nèi)、細(xì)胞膜、如包涵體、胞內(nèi)、細(xì)胞膜、

26、胞外分泌和酵母、動(dòng)物、雜交瘤細(xì)胞、昆胞外分泌和酵母、動(dòng)物、雜交瘤細(xì)胞、昆 蟲(chóng)細(xì)胞等表達(dá)的重組蛋白的純化，也被用蟲(chóng)細(xì)胞等表達(dá)的重組蛋白的純化，也被用 于單抗及天然酶的純化。于單抗及天然酶的純化。 AKTA explorer快速純化開(kāi)拓系統(tǒng)快速純化開(kāi)拓系統(tǒng)：能能 高效地純化各種蛋白質(zhì)、肽、寡核苷酸和高效地純化各種蛋白質(zhì)、肽、寡核苷酸和 核酸等核酸等。系統(tǒng)有預(yù)編程序，放好樣品，按。系統(tǒng)有預(yù)編程序，放好樣品，按 啟動(dòng)按鈕，系統(tǒng)就會(huì)完成余下的工作，如啟動(dòng)按鈕，系統(tǒng)就會(huì)完成余下的工作，如 自動(dòng)取樣、制備適當(dāng)自動(dòng)取樣、制備適當(dāng)pH緩沖液、選擇適當(dāng)緩沖液、選擇適當(dāng) 的柱、再現(xiàn)顯示分離流程和檢測(cè)狀況、收的柱、再

27、現(xiàn)顯示分離流程和檢測(cè)狀況、收 集峰、自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理并打印純化報(bào)告。集峰、自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理并打印純化報(bào)告。 設(shè)置的預(yù)編程序可從分析到小試摸索至中設(shè)置的預(yù)編程序可從分析到小試摸索至中 試生產(chǎn)。試生產(chǎn)。 快速蛋白液相色譜快速蛋白液相色譜(FPLC)：已用于蛋白已用于蛋白 質(zhì)、多肽、核酸等質(zhì)、多肽、核酸等400余種生物分子的純化。余種生物分子的純化。 利用利用FPLC發(fā)展的純化流程可直接放大到中發(fā)展的純化流程可直接放大到中 試或大規(guī)模生產(chǎn)。試或大規(guī)模生產(chǎn)。 biological system：它視為高分辨生：它視為高分辨生 物分子純化而設(shè)計(jì)的層析系統(tǒng)。其軟件物分子純化而設(shè)計(jì)的層析系統(tǒng)。其軟件 充分利

28、用了微軟視窗操作系統(tǒng)的優(yōu)良圖充分利用了微軟視窗操作系統(tǒng)的優(yōu)良圖 形界面，加速了開(kāi)發(fā)和優(yōu)化生物分子分形界面，加速了開(kāi)發(fā)和優(yōu)化生物分子分 離流程的方案。離流程的方案。 謝謝！ 5. 糖類藥物的分離純化方法糖類藥物的分離純化方法 6. 脂類藥物的分離純化方法脂類藥物的分離純化方法 7. 氨基酸類藥物的分離純化方法氨基酸類藥物的分離純化方法 原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料 要注意要注意植物生長(zhǎng)的季節(jié)性植物生長(zhǎng)的季節(jié)性，選擇最佳采集，選擇最佳采集 時(shí)間；微生物原料要注意時(shí)間；微生物原料要注意微生物生長(zhǎng)的對(duì)微生物生長(zhǎng)的對(duì) 數(shù)期長(zhǎng)短數(shù)期長(zhǎng)短；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的

29、；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的類類 別別、年齡年齡與與性別性別。 也應(yīng)注意原料的也應(yīng)注意原料的采集地采集地和和批次批次。 親和層析法主要包括：親和層析法主要包括：疏水反應(yīng)層析、金疏水反應(yīng)層析、金 屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親和層屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親和層 析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)親和析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)親和 層析等。層析等。親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì) 分離和純化。分離和純化。 離子交換層析法：離子交換層析法：粘多糖的聚陰離子能夠粘多糖的聚陰離子能夠 很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如 Dowex-I-X2離子交換樹(shù)