高二生物精品學(xué)案：專題3 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)(新人教版選修1)

1、專題3植物的組織培養(yǎng)技術(shù)第9課時菊花的組織培養(yǎng)目標(biāo)導(dǎo)航1.了解植物組織培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用和ms固體培養(yǎng)基的配方。2.熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程和影響植物組織培養(yǎng)的因素。3.理解細(xì)胞分化的概念及離體植物細(xì)胞的脫分化和再分化。一、基礎(chǔ)知識1植物組織培養(yǎng)的基本過程(1)細(xì)胞全能性的表達(dá)：_的植物組織或細(xì)胞，在一定的_、_和_的作用下，發(fā)育成完整植株的過程。(2)細(xì)胞分化：在植物的_過程中，細(xì)胞在_、_和_上都會出現(xiàn)_的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。(3)植物組織培養(yǎng)的基本過程來源:離體的植物器官、組織或細(xì)胞(又叫_)愈傷組織胚狀體、叢芽等新個體愈傷組織的特點(diǎn)：細(xì)胞_，是一群_的呈_的薄壁

2、細(xì)胞。脫分化(去分化)：由_的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生_的過程。再分化：由_重新分化成根或芽等器官的過程。(4)條件：_的植物組織或細(xì)胞，在一定的_、_和其他外界條件的作用下就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整植株。離體的植物組織或細(xì)胞叫做_。2影響植物組織培養(yǎng)的因素(1)培養(yǎng)材料的影響：不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度_。對于同一種植物材料，材料的_、_等也會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇_的莖_部_的側(cè)枝。(2)營養(yǎng)物質(zhì)的影響：常用的_培養(yǎng)基，主要成分包括_、_、_以及蔗糖等。其中_和_提供植物細(xì)胞所必需的無機(jī)鹽；_提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓。(3)植物激素的影響：ms培養(yǎng)基常需添加植物激素。

3、其中_和_是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素，這兩種激素的_、_以及_等，都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下表是關(guān)于兩種植物激素在組織培養(yǎng)過程中的作用。來源:使用順序或用量比實(shí)驗(yàn)結(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于_，但細(xì)胞_先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素細(xì)胞_同時使用分化頻率_生長素用量/細(xì)胞分裂素用量，比值高有利于_的分化、抑制_的形成生長素用量/細(xì)胞分裂素用量，比值低有利于_的分化、抑制_的形成生長素用量/細(xì)胞分裂素用量，比值適中促進(jìn)_的形成(4)環(huán)境因素的影響：_、_、_等條件也能影響植物組織培養(yǎng)。二、植物組織培養(yǎng)的操作流程1制備ms固體培養(yǎng)基：將各種營養(yǎng)成分按比例配制成_。利用母液配制

4、菊花組織培養(yǎng)所需要的培養(yǎng)基，菊花的組織培養(yǎng)比較容易，因此可以不加激素，而如果是其他植物的組織培養(yǎng)，則要配制成三種培養(yǎng)基，即_、_和_。配制菊花的組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基時先將稱好的瓊脂加入800 ml 蒸餾水中，加熱使_熔化；然后加入_30 g，加入一定量的_，充分混勻后加蒸餾水定容至1 000 ml，調(diào)節(jié)_；最后分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50 ml或100 ml。用包在紗布中的棉塞封嚴(yán)瓶口，外面包一層牛皮紙。將配制好的培養(yǎng)基放入_鍋，在121下滅菌15 min。2外植物體消毒：選取生長旺盛的菊花的嫩枝，先用清水洗凈，再用體積分?jǐn)?shù)為_浸泡67 s后，立即取出并用無菌水清洗，取出后吸干水分再放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為

5、_中浸泡 12 min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液。3接種：在超凈工作臺上鋪上無菌濾紙，將已消毒的菊花莖段切成小段(長0.51.0 cm)，迅速接種到培養(yǎng)基上。插入時應(yīng)注意方向，使嫩莖的形態(tài)學(xué)下端接觸培養(yǎng)基，不要_。每瓶接種68塊嫩莖。接種后，將錐形瓶的瓶口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動灼燒一遍，將封口膜重新扎好，貼上標(biāo)簽，做好記錄。4培養(yǎng)：接種后的錐形瓶放在_中培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度應(yīng)控制在1822，并且每日用日光燈光照12 h，并定期進(jìn)行_，保持適宜的_和_。5移栽：當(dāng)小苗長到56 cm，基部形成根原基的時候，即可進(jìn)行移栽。試管苗是在無菌、充分營養(yǎng)供給、適宜的光照和溫度以及100%相對濕度環(huán)境

6、中生長的。剛出瓶的試管苗對外界環(huán)境不太適應(yīng)。將試管苗培養(yǎng)瓶的瓶口敞開一半，放置在2025的遮陰環(huán)境中，適應(yīng)714 d。若試管苗不萎蔫、有新生長的趨勢，便可將試管苗取出，小心洗凈粘在根上的培養(yǎng)基，植入盛有_等材料的花盆中，澆足水分，罩上帶孔的塑料薄膜，將花盆放置在2025的陰涼處35 d。待幼苗長出新葉時，揭去塑料薄膜，再過710 d，幼苗即可移栽到土壤里。6栽培：將幼苗移載后，每天觀察并記錄幼菌生長情況，適時澆水、施肥，直至開花。提醒(1)植物組織培養(yǎng)一定要采用無菌技術(shù)。(2)實(shí)驗(yàn)選材是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。知識點(diǎn)一植物組織培養(yǎng)的基本過程及影響因素1請回答下列有關(guān)植物組織培養(yǎng)的幾個問題。(1)離體植

7、物組織和細(xì)胞培養(yǎng)常用的一種培養(yǎng)基是_，其主要成分中的大量元素有_，培養(yǎng)基中常用的兩種植物激素是_和_，兩者使用時的_、_、_等，都會影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。(2)下圖表示植物組織培養(yǎng)的部分過程：過程是_，過程是_，a是_。(3)組織培養(yǎng)過程中還需要維持一定的外界條件，一是要有適宜的_，二是_。2下列關(guān)于影響植物組織培養(yǎng)因素的說法，正確的是()a不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，同一種植物材料培養(yǎng)的難易程度相同b在植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中必須添加植物激素c植物激素中，生長素和細(xì)胞分裂素的作用是相互獨(dú)立的dph、溫度、光照條件等對植物組織培養(yǎng)也特別重要知識點(diǎn)二植物組織培養(yǎng)操作過程3下列哪組符合菊花組織培養(yǎng)的

8、基本步驟()a制備ms培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培b制備ms培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培移栽來源:c制備ms培養(yǎng)基外植體消毒接種栽培培養(yǎng)移栽d制備ms培養(yǎng)基外植體消毒接種移栽培養(yǎng)栽培4關(guān)于植物組織培養(yǎng)的內(nèi)容，以下說法錯誤的是()a一般來說容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)b對菊花莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)，不加植物激素也能成功c接種后的錐形瓶放入無菌箱中，給予適宜的溫度和光照即可d移栽生根的試管苗之前，先打開瓶口，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日一、選擇題1下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)中植物激素使用的說法，不正確的是()a植物組織培養(yǎng)中的關(guān)鍵性激素是生長素和細(xì)胞分裂素b先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素，有利于

9、細(xì)胞分裂和分化c先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素，細(xì)胞既分裂又分化d同時使用生長素和細(xì)胞分裂素時，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向2下列關(guān)于消毒的敘述，正確的是()a制備的ms固體培養(yǎng)基可用70%的酒精消毒b70%的酒精對外植體消毒效果好，但用時長，去除易c0.1%的氯化汞對外植體消毒效果最好，用時短，去除也易d試管苗長成后，需移栽到經(jīng)過消毒的蛭石或珍珠巖中生活一段時間，然后再移栽到土壤中栽培3當(dāng)植物脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時，下列有可能使其表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整植株的是()a細(xì)胞分裂素 b生長素c一定的營養(yǎng)物質(zhì) d以上三者均是4關(guān)于ms培養(yǎng)基與微生物培養(yǎng)基的配方相比

10、不同之處，說法錯誤的是()ams培養(yǎng)基中常常添加植物激素，微生物培養(yǎng)基中不需要bms培養(yǎng)基中的碳源和能源是蔗糖，微生物培養(yǎng)基中的碳源和能源主要是葡萄糖cms培養(yǎng)基中需提供植物生長必需的大量元素和微量元素dms培養(yǎng)基中不需加維生素，微生物培養(yǎng)基中要加維生素作生長因子5下列對植物組織培養(yǎng)過程中的脫分化的敘述，正確的是()a植物體的分生組織通過細(xì)胞分裂產(chǎn)生新細(xì)胞的過程b體內(nèi)分化的細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變的過程c高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程d愈傷組織分裂產(chǎn)生大量相同細(xì)胞的過程6月季組織培養(yǎng)選材部位最佳的是()a幼嫩的花瓣 b枝條基部的芽c枝條中部的芽 d幼嫩的葉7在植物組織培養(yǎng)

11、過程中，生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值高時，下列描述正確的是()a有利于根的分化和芽的形成b不利于根的分化和芽的形成c有利于芽的形成，抑制根的分化d有利于根的分化，抑制芽的形成8影響植物組織培養(yǎng)的因素包括()培養(yǎng)基的配制外植體的選取激素的運(yùn)用消毒溫度、ph、光照a bc d9下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是()a培養(yǎng)基中添加蔗糖的目的是提供營養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓b培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素影響愈傷組織的形成和分化c離體器官或組織的細(xì)胞都必須通過脫分化才能形成愈傷組織d同一株綠色開花植物不同部位的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因組成相同10某組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的愈傷組織被真菌嚴(yán)重污染，為查找污染原因

12、設(shè)計(jì)了4個實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)條件除圖示外其他均相同。下列各圖表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，據(jù)圖可得出的初步結(jié)論是(多選)()a污染主要不是培養(yǎng)基滅菌時間短造成的b污染主要來源于組織培養(yǎng)所用的離體組織c調(diào)節(jié)培養(yǎng)基ph不能解決污染問題d調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度不能解決污染問題二、簡答題11某班同學(xué)在學(xué)完菊花的組織培養(yǎng)內(nèi)容之后，決定利用課余時間去實(shí)踐這項(xiàng)技術(shù)，培養(yǎng)出美麗的菊花來美化教室的環(huán)境。(1)在制備ms固體培養(yǎng)基時先根據(jù)_進(jìn)行計(jì)算。ms培養(yǎng)基含有_種營養(yǎng)成分。其中_6種元素屬大量元素，_8種元素屬微量元素，能源物質(zhì)是_。由于菊花的莖段組織培養(yǎng)比較容易，所以不必加_。(2)將分裝好的培養(yǎng)基連同培養(yǎng)器械一起進(jìn)行_滅菌。來源:(3)選

13、取菊花的_部分進(jìn)行外植體消毒，在消毒時既要考慮_，又要考慮_，所以分別用_的酒精和_的氯化汞消毒，消毒時間不宜過長。(4)接種時要特別注意_，每瓶接種_塊外植體。將接種后的錐形瓶放在_中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間定期消毒，溫度控制在_，并每日用日光燈照12 h。(5)若干天后發(fā)現(xiàn)有些錐形瓶中生長出可愛的菊花幼苗，有的錐形瓶中培養(yǎng)失敗還長出很多細(xì)菌菌落，試分析其原因。幼苗在移栽入土之前需進(jìn)行哪些處理工作？_。12下圖是胡蘿卜的韌皮部細(xì)胞通過無菌操作，接入試管內(nèi)的培養(yǎng)基后，在一定的條件下形成試管苗的培育過程。請據(jù)圖回答下列問題。(1)要促進(jìn)植物細(xì)胞分裂生長，培養(yǎng)基中應(yīng)含有營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素，營養(yǎng)物質(zhì)包括_和小

14、分子有機(jī)物；植物激素包括細(xì)胞分裂素和_兩類。(2)此過程依據(jù)的原理是_。a階段和b階段細(xì)胞進(jìn)行的分裂方式主要是_，b階段除了細(xì)胞分裂外，還進(jìn)行細(xì)胞_。(3)此過程要無菌操作，主要是指對_進(jìn)行滅菌消毒。b階段需要光照，原因是_。(4)試管苗的根細(xì)胞中沒有葉綠素，而葉的葉肉細(xì)胞中具有葉綠素，這是_的結(jié)果。(5)將胡蘿卜韌皮部組織塊接種到培養(yǎng)基上時，為防止雜菌污染，應(yīng)如何操作？_。第9課時菊花的組織培養(yǎng)知識清單一、1.(1)離體營養(yǎng)物質(zhì)激素其他外界條件(2)個體發(fā)育形態(tài)結(jié)構(gòu)生理功能穩(wěn)定性(3)外植體脫分化再分化排列疏松而無規(guī)則高度液泡化無定形狀態(tài)高度分化愈傷組織脫分化產(chǎn)生的愈傷組織(4)離體營養(yǎng)物質(zhì)

15、激素外植體2(1)差別很大年齡保存時間的長短未開花植株上新萌生(2)ms大量元素微量元素有機(jī)物大量元素微量元素蔗糖(3)生長素細(xì)胞分裂素濃度使用的先后順序用量的比例細(xì)胞分裂不分化既分裂又分化提高根芽芽根愈傷組織(4)ph溫度光照二、1.ms培養(yǎng)基母液脫分化培養(yǎng)基生芽培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基瓊脂蔗糖各種母液ph高壓蒸汽滅菌270%的酒精0.1%的氯化汞溶液3.倒插4.無菌鍋消毒溫度光照5.消過毒的蛭石或珍珠巖對點(diǎn)訓(xùn)練1(1)ms培養(yǎng)基n、p、k、ca、mg、s生長素(類)細(xì)胞分裂素(類)濃度使用的先后順序用量的比例(2)脫分化再分化愈傷組織(3)溫度無菌(環(huán)境)規(guī)律鏈接(1)愈傷組織與根尖分生區(qū)組織的比

16、較組織類型細(xì)胞來源來源:細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向根尖分生組織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點(diǎn)都通過有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖(2)ms培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)必需的物質(zhì)基礎(chǔ)，其中相關(guān)激素(細(xì)胞分裂素和生長素)的濃度及使用的先后順序和用量的比例是調(diào)節(jié)分化的關(guān)鍵。在植物組織培養(yǎng)中，應(yīng)把握好生長素和細(xì)胞分裂素的濃度、用量比例及使用順序。2d不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，同一種植物材料的不同器官或不同生長期細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度也不同，故a錯誤；在植物組織培養(yǎng)中，一般培養(yǎng)基中要加入植物激素，像菊花莖段的培養(yǎng)比較容易，就不必添加植物激素了，

17、故b錯誤；生長素與細(xì)胞分裂素共同起作用，促使愈傷組織、根、芽的形成，只是用量比值不同，作用效果不同而已，故c錯誤；在培養(yǎng)過程中，需要適宜的ph、溫度、光照(脫分化不需要)等適宜條件，即d正確。3a移栽是指將培養(yǎng)基上培養(yǎng)的幼苗長壯后移栽到土壤中，栽培是對移栽后的幼苗進(jìn)行精細(xì)管理培養(yǎng)的過程，應(yīng)先移栽后栽培。規(guī)律鏈接試管苗培養(yǎng)過程中應(yīng)注意的問題：(1)培養(yǎng)一株完整的試管苗，必須先進(jìn)行生芽培養(yǎng)，然后進(jìn)行生根培養(yǎng)，如果順序顛倒，先誘導(dǎo)生根，就不好誘導(dǎo)生芽了。(2)試管苗應(yīng)該進(jìn)行見光培養(yǎng)。(3)試管苗一般在高濕、弱光、恒溫下異養(yǎng)生長，出瓶后一定要保溫、保濕。(4)試管苗光合作用能力低，在移栽前給予較強(qiáng)光照

18、閉瓶煉苗，以促進(jìn)小苗向自養(yǎng)轉(zhuǎn)化。(5)無菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。植物組織培養(yǎng)不同于扦插、壓條等常規(guī)的無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，所以對培養(yǎng)條件的要求較高，對無菌操作的要求非常嚴(yán)格。若不小心引起污染，將可能造成培養(yǎng)工作前功盡棄，因此實(shí)驗(yàn)過程始終貫穿著滅菌消毒。對培養(yǎng)材料進(jìn)行表面滅菌時，一方面要考慮藥劑的消毒效果；另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官都要區(qū)別對待。4c在植物組織培養(yǎng)過程中，分化程度越低的材料，越容易脫分化形成愈傷組織，接種后的錐形瓶放入無菌箱中，給予適宜的溫度和光照進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒，防止細(xì)菌等微生

19、物污染。達(dá)標(biāo)測試1b植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中除營養(yǎng)成分外還須添加植物激素，一般包括生長素和細(xì)胞分裂素；外植體脫分化、再分化的誘導(dǎo)方向取決于二者的比例。先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化；先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素，對細(xì)胞的分裂和分化均有利。2d制備的ms固體培養(yǎng)基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌；70%的酒精對外植體的消毒效果好，放入其中搖動23次，浸泡67 s，去除易；0.1%的氯化汞消毒效果最好，時間較短，但消毒后難以去除殘余的汞。聯(lián)想無菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。因?yàn)樗貌牧象w積小、抗性差，對材料滅菌時，一要保持材料的活性，二要盡量除凈雜菌。所以使用化學(xué)藥劑消毒時

20、，一定要考慮藥劑的消毒效果和材料的耐受力。3d植物細(xì)胞表現(xiàn)全能性的條件：離體狀態(tài)、一定的營養(yǎng)條件、激素、適宜的溫度、ph等外界條件，無菌條件等。4dms培養(yǎng)基中需要加入甘氨酸、維生素等物質(zhì)，主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。5c6c月季芽在莖段上的位置對植物組織培養(yǎng)成功的難易有影響，接近枝條頂端的芽和緊挨著枝條基部的芽發(fā)育最慢；而枝條中部的芽發(fā)育比較快。幼嫩的花瓣和葉具有分裂能力，但不如芽的強(qiáng)。7d生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值高時，有利于根的分化，抑制芽的形成；比值低時，有利于芽的分化，抑制根的形成；比值適中時，促進(jìn)愈傷組織的形成。8a植物組織培養(yǎng)

21、過程受多種外界因素的影響，其中包括溫度、光照、ph等，而培養(yǎng)基的成分、外植體的選取和消毒是否嚴(yán)格等也影響組織培養(yǎng)。9d在植物組織培養(yǎng)過程中，蔗糖是最常用的碳源和能源物質(zhì)，蔗糖還可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，從而維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能；愈傷組織的分化常受細(xì)胞分裂素及生長素用量比例的調(diào)節(jié)，當(dāng)這一用量比值高時，可誘導(dǎo)芽的形成，反之則有促進(jìn)生根的趨勢；對于同一株綠色開花植物來說，花粉是通過減數(shù)分裂形成的，離體培養(yǎng)獲得的愈傷組織細(xì)胞和體細(xì)胞培養(yǎng)獲得的愈傷組織細(xì)胞基因組成并不完全一樣，假定該植株基因型為aa，花粉培養(yǎng)獲得的愈傷組織細(xì)胞基因型為a或a，而體細(xì)胞培養(yǎng)獲得的愈傷組織細(xì)胞基因型為aa，二者不一樣。10

22、abcd由(1)、(3)、(4)曲線較為平緩可知，滅菌時間、ph、溫度等對污染率影響不大；離體組織的滅菌時間與污染率呈反相關(guān)關(guān)系，影響較大。11(1)植物組織對各物質(zhì)的需求量20多n、p、k、ca、mg、sb、mn、cu、zn、fe、mo、i、co蔗糖植物激素(2)高壓蒸汽(3)生長旺盛的嫩枝藥劑的消毒效果植物的耐受能力70%0.1%(4)插入時的方向，不要倒插68無菌箱1822(5)接種時操作不規(guī)范，培養(yǎng)基中混入細(xì)菌或培養(yǎng)基滅菌不徹底。移栽生根的試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日；然后用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時間，等幼

23、苗長壯后再移栽到土壤中12(1)無機(jī)物生長素(2)植物細(xì)胞的全能性有絲分裂分化(3)培養(yǎng)基芽發(fā)育成葉，葉肉細(xì)胞中葉綠素的合成需要光照條件(4)基因選擇性表達(dá)(5)接種要在酒精燈火焰旁進(jìn)行解析解答本題應(yīng)著重從植物組織培養(yǎng)的原理、過程、影響因素及相關(guān)的無菌操作技術(shù)等方面入手。(1)植物組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基中應(yīng)含有供植物組織細(xì)胞生長發(fā)育所需要的無機(jī)物和小分子有機(jī)物，還需調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育方向的細(xì)胞分裂素和生長素等激素。(2)植物細(xì)胞的全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)，脫分化和再分化階段中細(xì)胞的增殖方式均為有絲分裂，再分化階段愈傷組織經(jīng)細(xì)胞有絲分裂和分化形成試管苗。(3)植物組織培養(yǎng)過程一定要做到無菌操作，包

24、括外植體、培養(yǎng)基、容器、接種工具等均應(yīng)消毒滅菌，其中培養(yǎng)基的滅菌最為重要；再分化階段需要光照，因?yàn)橛兹~中葉綠素的合成需要光照條件。(4)同一植株的所有體細(xì)胞所含有的遺傳信息相同，但表達(dá)不同，故形態(tài)、功能存在差異。(5)酒精燈火焰旁溫度較高，可有效殺死空氣中的細(xì)菌。第10課時月季的花藥培養(yǎng)目標(biāo)導(dǎo)航1.知道花粉是單倍體的生殖細(xì)胞，說出被子植物花粉發(fā)育的過程。2.理解產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑；知道選取適宜的材料和培養(yǎng)基組成是花粉植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵。一、月季花藥培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識1被子植物的花粉發(fā)育過程(1)被子植物的花粉是在花藥中由花粉母細(xì)胞經(jīng)過_形成的，是_的生殖細(xì)胞。(2)發(fā)育歷程：被子植物花粉的發(fā)育

25、要經(jīng)歷_、_和_等階段。提醒(1)花粉萌發(fā)進(jìn)行受精作用時，每個花粉?？舍尫懦鰞蓚€_，從而完成被子植物的_。(2)被子植物的花粉發(fā)育要經(jīng)過小孢子四分體時期、單核期、雙核期三個階段，其中單核期又分單核居中期和單核靠邊期兩個時期，雙核期包括花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核兩個核。(3)被子植物花粉發(fā)育過程中的“四分體”是指由一個花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂產(chǎn)生的連在一起的4個_(4個小孢子)；而減數(shù)分裂中的“四分體”是指在聯(lián)會狀態(tài)下的一對同源染色體，因?yàn)楹兴臈l染色單體，所以叫做“四分體”。2產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑(1)通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑一種是花粉通過_階段發(fā)育成植株；另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先

26、形成_，再將其誘導(dǎo)分化成植株。生根移栽通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中_。(2)單倍體育種的過程在花藥培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，用_繼續(xù)處理單倍體幼苗，染色體加倍，重新恢復(fù)為二倍數(shù)。因?yàn)樗鼈兊亩稊?shù)染色體是由單倍數(shù)染色體本身加倍而來的，所以都是純系，不會發(fā)生性狀分離。詳見下圖：單倍體育種的優(yōu)點(diǎn)后代都是_，自交產(chǎn)生的后代不會發(fā)生性狀分離；明顯地縮短了_；另外為新品種的培育開辟了新途徑。3影響花藥培養(yǎng)的因素(1)誘導(dǎo)花粉植株能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種因素影響，其中_和_是主要的影響因素。(2)不同植物的誘導(dǎo)成功率_。同一種植物_對誘導(dǎo)成功率也有直接影響。選擇適宜的

27、_也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素；不同生物的適宜的_不同，但對絕大多數(shù)植物而言，適宜花藥培養(yǎng)的時期是_期。二、花藥培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作流程1材料的選取確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是_法，對一些花粉細(xì)胞核不易著色的植物，需采用_法。2材料的消毒通常將選取的材料先用_浸泡約_ s，在無菌水中清洗，然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為_溶液消毒24 min，最后用無菌水沖洗_次。3接種和培養(yǎng)先在_條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上?；ㄋ幣囵B(yǎng)的第一步是接種的花藥開裂，長出_或釋放出_。下一步將_及時轉(zhuǎn)移到_培養(yǎng)基上培養(yǎng)，或?qū)⒋罅康挠仔≈仓攴珠_，分別移植到新的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度控制在25左右，不需要_。_形成后

28、才需要光照。4鑒定和篩選在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體組的數(shù)目的變化。因此還需要對培養(yǎng)出來的植株作進(jìn)一步的鑒定和篩選。提醒(1)花藥培養(yǎng)的第一步成功的標(biāo)志是接種的花藥長出愈傷組織或釋放胚狀體。下一步將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。(2)選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，因此學(xué)生應(yīng)學(xué)會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。(3)花蕾的選擇要符合實(shí)驗(yàn)的要求，過早過晚都是不利的。(4)培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等都應(yīng)嚴(yán)格按無菌技術(shù)的要求進(jìn)行操作，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)對象被污染。知識點(diǎn)一月季花藥培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識1回答下列有關(guān)花藥培養(yǎng)的

29、問題：(1)通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株一般有兩種途徑：一種是花粉通過_階段發(fā)育為植株；另一種是在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成_，再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑主要取決于培養(yǎng)基中_的種類及濃度配比。(2)通過上述兩種途徑得到的單倍體植株具有的特點(diǎn)是_。應(yīng)如何解決？_。2如圖表示某植物的花藥培養(yǎng)過程，請據(jù)圖判斷下列說法中錯誤的是()aaf不能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性bc中是高度液泡化的薄壁細(xì)胞c植株a和f中的染色體組數(shù)不同d植株f一般不能直接應(yīng)用于生產(chǎn)知識點(diǎn)二月季花藥培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)流程3下列關(guān)于花藥培養(yǎng)過程的說法，正確的是()a花藥中的花粉在培養(yǎng)基上發(fā)育成胚狀體還是愈傷組織是隨機(jī)的，不受環(huán)境的影響b接種后的花藥需要每

30、天用日光燈照射12 hc花藥培養(yǎng)過程中，誘導(dǎo)形成愈傷組織時不需要光照，幼小植株形成后需要光照d如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥將產(chǎn)生一個幼小植株4下列關(guān)于月季花藥培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是()a材料的選擇與培養(yǎng)基的組成影響花藥培養(yǎng)的成功率b選擇花藥時常用的方法是醋酸洋紅法c選取材料時一定要進(jìn)行消毒d培養(yǎng)形成的胚狀體可繼續(xù)在原培養(yǎng)基中分化形成植株一、選擇題1花藥培養(yǎng)中材料消毒主要有以下幾步，順序正確的是()將花蕾在酒精中浸泡約30 s放入氯化汞溶液中24 min無菌水清洗，然后用無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分用無菌水沖洗35次a bc d2下列關(guān)于花藥培養(yǎng)過程的注意事項(xiàng)中，正確的是()a花藥培養(yǎng)成

31、功與否與材料選擇無關(guān)b花藥培養(yǎng)成幼苗后，一定不能分瓶培養(yǎng)c花藥培養(yǎng)成幼苗的過程中，除了適宜的溫度、ph等，還要注意照光d一般地講，材料選在單核期時花藥培養(yǎng)成功率較高3下列有關(guān)花藥培養(yǎng)的說法，錯誤的是()a選擇材料時最常用的方法是焙花青鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色b材料消毒時需先用酒精浸泡，然后用氯化汞溶液或次氯酸鈣溶液浸泡，最后用無菌水沖洗c接種花藥后一段時間內(nèi)不需要光照，但幼小植株形成后需要光照d若接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體后，要適時轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便進(jìn)一步分化成再生植株4對產(chǎn)生花粉植株的途徑的敘述，錯誤的是()a花粉可通過胚狀體階段發(fā)育成植株b花粉可先形成愈傷組織再誘導(dǎo)

32、分化成植株c花粉培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比d花粉經(jīng)脫分化形成胚狀體，再分化出根，然后誘導(dǎo)生芽5關(guān)于被子植物花粉的發(fā)育階段，順序正確的是()a小孢子四分體時期雙核期單核居中期單核靠邊期花粉粒b小孢子母細(xì)胞單核靠邊期單核居中期雙核期花粉粒c小孢子母細(xì)胞小孢子四分體時期單核居中期單核靠邊期雙核期花粉粒d小孢子四分體時期小孢子母細(xì)胞雙核期單核期花粉粒6下列關(guān)于月季花藥培養(yǎng)的步驟，正確的是()a選材消毒接種培養(yǎng)b選材接種消毒培養(yǎng)c選材消毒接種培養(yǎng)鑒定和篩選d選材接種培養(yǎng)鑒定和篩選7材料的選擇是花粉植株能否培養(yǎng)成功的主要影響因素之一，下列與之相關(guān)的內(nèi)容正確的是()a不同植物的

33、誘導(dǎo)成功率相同，同一植物的不同生理狀況誘導(dǎo)成功率也相同b不同植物及同一植物的不同生理狀況誘導(dǎo)成功率都不相同c不同植物的誘導(dǎo)成功率不同，同一植物的不同生理狀況誘導(dǎo)成功率相同d不同植物的誘導(dǎo)成功率相同，同一植物的不同生理狀況誘導(dǎo)成功率不同8以下關(guān)于花藥接種和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作中的敘述，錯誤的一項(xiàng)是()a每瓶接種花藥710個，2030天后，花藥開裂形成幼小植株后才給予光照b花藥培養(yǎng)至開裂后，將長出的愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上c花藥培養(yǎng)至開裂后，將釋放出的胚狀體整體移到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)d對培養(yǎng)出來的植株作進(jìn)一步鑒定和篩選二、簡答題9被子植物的花粉粒是由花粉囊里的小孢子母細(xì)胞(也叫做花粉母細(xì)胞)發(fā)育而

34、成的。每個小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂，形成4個細(xì)胞，叫做小孢子。初始形成的4個小孢子排列在一起，以后相互分離，形成4個單核的花粉粒。單核花粉粒形成不久，便進(jìn)行一次有絲分裂，形成2個細(xì)胞：一個是營養(yǎng)細(xì)胞，另一個是生殖細(xì)胞。有些植物的生殖細(xì)胞接著又進(jìn)行有絲分裂，形成2個精子，這樣，成熟的花粉粒中就有3個細(xì)胞。有些植物的生殖細(xì)胞的分裂，是在花粉管中進(jìn)行的，因此，成熟的花粉粒中只有兩個細(xì)胞，如下圖所示。請據(jù)此分析回答：(1)被子植物的雄蕊通常包括_，作用是_。(2)被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷_、_、_和_等階段。(3)花粉發(fā)育時期的單核期細(xì)胞所具有的特征是_。(4)一個小孢子能形成_個花粉管細(xì)胞核、_個生

35、殖細(xì)胞核、_個精子。10現(xiàn)有高稈抗病(ddtt)和矮稈不抗病(ddtt)的兩個小麥品種，這兩對性狀是完全顯性。(1)現(xiàn)要用最短的時間培育出矮稈抗病植株純合子，最好采用_方法，其主要步驟是_。(2)育種過程首先將高稈抗病純合子與矮稈不抗病純合子雜交得f1，其基因型是_。(3)將f1種下去，取f1的花粉進(jìn)行離體培養(yǎng)，為了提高花粉誘導(dǎo)成功率，選擇_花藥做實(shí)驗(yàn)材料。對所選擇的花藥一般要通過進(jìn)一步的鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育期最常用的方法是_。對不易著色的花粉細(xì)胞核需用_法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成_色。(4)f1花粉基因型理論上有4種，分別是_。若這些花粉都有可能長成植物

36、體，這些植物體的基因型是_，這些植物體稱為_，在花粉發(fā)育成植物體過程中，細(xì)胞的分裂方式是_。(5)假如每種基因型的花粉細(xì)胞都有機(jī)會發(fā)育成幼苗，如何對這些幼苗進(jìn)行篩選，才能選出矮稈抗病個體？_。(6)對篩選出的矮稈抗病幼苗用_處理即可得到所需要的純合子品種。第10課時月季的花藥培養(yǎng)知識清單一、1.(1)減數(shù)分裂單倍體(2)小孢子四分體時期單核期雙核期提醒(1)精子雙受精(3)單倍體細(xì)胞2(1)胚狀體愈傷組織激素的種類及其濃度配比(2)秋水仙素純合子育種周期3(1)材料的選擇培養(yǎng)基的組成(2)很不相同親本植株的生理狀況花粉發(fā)育時期花粉發(fā)育時期單核二、1.醋酸洋紅焙花青鉻礬2體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精3

37、00.1%的氯化汞353無菌愈傷組織胚狀體愈傷組織分化光照幼小植株對點(diǎn)訓(xùn)練1(1)胚狀體愈傷組織激素(2)植株弱小，高度不育用秋水仙素處理幼苗解析產(chǎn)生單倍體植株的途徑有形成胚狀體或愈傷組織兩種，得到的單倍體植株表現(xiàn)為植株弱小、高度不育，通過秋水仙素處理其幼苗，可使其正常發(fā)育。規(guī)律鏈接來源:數(shù)理化網(wǎng)(1)在花藥培養(yǎng)過程中，材料和材料所處時期的選擇，以及培養(yǎng)基的組分是影響培養(yǎng)的主要因素。另外，親本植株的生理狀況、材料的低溫預(yù)處理及接種密度等對誘導(dǎo)成功率也有一定影響。(2)花藥的全能性高于植物組織。另外，花粉植株屬單倍體植株，高度不育。如果需要育種，需對花粉植株幼苗進(jìn)行秋水仙素處理，才能獲得正常的可

38、育個體。(3)花粉植株的產(chǎn)生過程 2a植物的任何細(xì)胞都具有全能性?；ㄋ幣囵B(yǎng)用到的花粉是生殖細(xì)胞，并且具有較高的全能性。3c在花藥培養(yǎng)過程中，花藥在培養(yǎng)基上的發(fā)育方向由培養(yǎng)基中生長素和細(xì)胞分裂素含量比例決定；在脫分化形成愈傷組織的過程中，花藥的同化作用為異養(yǎng)，即從培養(yǎng)基中獲取營養(yǎng)物質(zhì)，不需要光照；當(dāng)幼小植株形成后，需照光，進(jìn)行光合作用制造有機(jī)物；花藥開裂后釋放出的多個胚狀體要盡快分開，分別移植到新培養(yǎng)基上，否則以后將難以分開。規(guī)律鏈接實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵及注意事項(xiàng)(1)誘導(dǎo)花粉植株培育成功的關(guān)鍵是材料的選擇。要選擇合適的發(fā)育時期的花粉進(jìn)行離體培養(yǎng)，可以大大提高誘導(dǎo)成功率。選擇花藥時，一般通過鏡檢來確定

39、花藥中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期，常用的方法有醋酸洋紅法和焙花青鉻礬法。焙花青鉻礬法能將不易著色的花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。在花藥培養(yǎng)中，要使所選材料的發(fā)育時期完全一致是很困難的，這要靠不斷實(shí)踐來積累經(jīng)驗(yàn)。(2)材料一定要嚴(yán)格消毒，否則，一旦材料被微生物污染，將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。(3)花藥開裂釋放出的胚狀體需及時分離。(4)在花藥培養(yǎng)過程中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體組的數(shù)目的變化。因此還需要對培養(yǎng)出來的植株作進(jìn)一步的鑒定和篩選。4d培養(yǎng)基的組成和材料的選擇是影響花藥培養(yǎng)能否成功的主要因素，為了檢測花粉是否處于適宜的發(fā)育期，常用醋酸洋紅染色后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。為了避免微生物使

40、花藥腐爛，需對材料進(jìn)行消毒。在培養(yǎng)過程中，若花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，因此，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。達(dá)標(biāo)測試1b2d花粉植株能否培育成功受多種因素影響，其中材料的選擇與培養(yǎng)基組成是主要影響因素，所以a選項(xiàng)錯；對一般植物來講，選擇單核期往往成功率最高，所以d選項(xiàng)對；從花粉到幼苗階段，由于無葉綠體，所以不需照光，c選項(xiàng)錯；當(dāng)培養(yǎng)獲得愈傷組織或幼小植株時必須分瓶培養(yǎng)，才能誘導(dǎo)愈傷組織分化或幼苗分開，所以b選項(xiàng)錯。3a選擇材料時最常用的方法是醋酸洋紅法。4d產(chǎn)生花粉植株有兩種途徑：一是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植株

41、；二是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上形成愈傷組織，再誘導(dǎo)分化生芽、生根發(fā)育為植株。兩種途徑都是先誘導(dǎo)生芽，再誘導(dǎo)生根，并沒有絕對界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。5c6.c7b在花藥培養(yǎng)中，材料的選擇及培養(yǎng)基的組成是決定培養(yǎng)是否成功的關(guān)鍵因素，這是因?yàn)椴煌参锏恼T導(dǎo)成功率不同，而同一植物的花藥在不同的生理時期，其誘導(dǎo)成功率也不相同。8c花藥培養(yǎng)至開裂后，將釋放出的胚狀體盡快分開，并分別轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，否則，這些植株將很難分開。9(1)花藥和花絲花藥能夠產(chǎn)生花粉，花絲支撐花藥(2)小孢子母細(xì)胞(花粉母細(xì)胞)小孢子四分體時期單核期雙核期(3)細(xì)胞含有濃厚的原生質(zhì)，細(xì)胞核位于細(xì)胞的中央，隨著細(xì)

42、胞不斷長大，細(xì)胞核由中央移向一側(cè)(4)11210(1)單倍體育種花藥離體培養(yǎng)(2)ddtt(3)幼嫩醋酸洋紅法焙花青鉻礬藍(lán)黑(4)dt、dt、dt、dtdt、dt、dt、dt單倍體有絲分裂(5)在幼苗期用病原體進(jìn)行感染，葉片出現(xiàn)病斑的即為不抗病品種，淘汰掉，剩余為抗病品種。這些幼苗長大后對高矮進(jìn)行目測篩選，淘汰掉高稈植株，剩下的矮稈植株即為矮稈抗病個體(6)一定濃度的秋水仙素溶液解析單倍體育種可以大大縮短育種年限，其育種過程可以簡寫為：ddttddttf1(ddtt)單倍體(dt、dt、dt、dt)dt(矮稈抗病)ddtt(純合子)。在“選擇”過程中，對于高矮大小等性狀可以通過目測篩選，對于是

43、否抗病，則一般選擇用病原體侵染的辦法進(jìn)行識別植株是否抗病。第11課時專題復(fù)習(xí)來源:一、菊花莖的組織培養(yǎng)與月季花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同菊花莖的組織培養(yǎng)月季花藥培養(yǎng)不來源:同來源:點(diǎn)外植體細(xì)胞類型_細(xì)胞_細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果_植株_植株光的要求每日照射12 h幼苗形成后才需要光照相同點(diǎn)二者都是快速、大量繁殖花卉的技術(shù)手段，理論依據(jù)、培養(yǎng)基的配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同另外，花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花藥；花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度加大。訓(xùn)練1關(guān)于花藥培養(yǎng)技術(shù)與植物組織培養(yǎng)技術(shù)的不同，下列說法不正確的

44、是()a花藥培養(yǎng)需時期適宜的花蕾b花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格c培養(yǎng)基配制方法不同d花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體要及時更換培養(yǎng)基訓(xùn)練2在花藥的培養(yǎng)過程中，應(yīng)當(dāng)注意的問題是()a如果花藥開裂長出愈傷組織，使其在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可b如果花藥開裂釋放出胚狀體，應(yīng)盡快將其分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上培養(yǎng)c如果花藥開裂釋放出胚狀體，使其在原培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可d在花藥培養(yǎng)的整個過程中，都必須給予光照二、植物組織培養(yǎng)中污染的預(yù)防污染就是指在組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)容器內(nèi)滋生菌斑，使培養(yǎng)材料不能正常生長發(fā)育，從而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分葉、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)

45、所利用的植物材料體積小、抗性差，所以對培養(yǎng)條件的要求較高，對無菌操作的要求非常嚴(yán)格。1污染有兩種類型(1)細(xì)菌污染。菌斑呈黏液狀，界限比較明顯，一般接種后12天即能發(fā)現(xiàn)。主要是大腸桿菌和鏈球菌。一般是由接種人員造成的。(2)真菌污染。菌斑呈絨毛狀、絮狀，界限不明顯，伴有不同顏色的孢子，接種后310天才能發(fā)現(xiàn)。主要是霉菌污染，可能是植物材料滅菌不當(dāng)造成的。2可以通過以下措施做好預(yù)防(1)防止_帶菌。選擇好外植體采集時期和采集部位。外植體采集以春秋為宜，優(yōu)先選擇地上部分作為外植體，陰雨天勿采，晴天下午采，采前噴殺蟲劑、殺菌劑或套塑料袋。在室內(nèi)或無菌條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)。外植體嚴(yán)格滅菌。做滅菌效果試驗(yàn)，

46、多次滅菌和交替滅菌。(2)保證_及_徹底滅菌。分裝時，注射器勿與瓶接觸，培養(yǎng)基勿粘瓶口。檢查封口膜是否有破損。扎瓶口要位置適當(dāng)、松緊適宜。保證滅菌時間和高壓鍋內(nèi)溫度。接種工具用前徹底滅菌。工作服、口罩、帽子等布質(zhì)品定期進(jìn)行濕熱滅菌。(3)操作人員嚴(yán)格遵守_規(guī)程。如一定要規(guī)范著裝，操作過程中不說話等。(4)保證_與_環(huán)境清潔。污染瓶經(jīng)高壓滅菌后再清潔。接種環(huán)境定期熏蒸消毒、紫外燈照射或用臭氧滅菌和消毒。定期對培養(yǎng)室消毒、防止高溫。特別提醒對外植體進(jìn)行表面消毒時，既要考慮到藥劑的消毒效果，又要考慮到植物的耐受力。不同藥劑、不同植物材料，甚至不同器官要區(qū)別對待。消毒用過的有毒藥品應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部門處理，以免引起環(huán)境污染。一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)材料被污染，特別是真菌性污染，一定不要打開培養(yǎng)瓶。應(yīng)先將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌后，再打開培養(yǎng)瓶進(jìn)行清洗。訓(xùn)練3外植體接種前，需要將接種室、接種箱滅菌并對外植體消毒。某同學(xué)依次進(jìn)行了如下操作，你認(rèn)為合理的操作步驟依次是()接種前一天，將接種室的四個角用甲醛溶液和高錳酸鉀熏蒸將接種室和接種箱內(nèi)用紫外燈滅菌 接種前，操作者用肥皂清洗雙手并擦干，再用酒精棉球擦拭雙手接種前1 h，在接種室內(nèi)用噴霧器噴灑來蘇水；桌椅也用來蘇水擦拭；接種箱內(nèi)用甲醛溶液和高錳酸