第八章分枝桿菌屬細菌檢驗

1、微生物學檢驗微生物學檢驗 微生物學檢驗微生物學檢驗 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會規(guī)劃教材國家衛(wèi)生和計劃生育委員會規(guī)劃教材 第十章 分枝桿菌屬、諾 卡菌屬、放線菌屬鑒定 張加林 楚雄醫(yī)藥高等專科學校 返回總目錄返回總目錄 本 章 內(nèi) 容 第一節(jié) 分枝桿菌屬 1 2 第三節(jié) 放線菌屬 3 第二節(jié) 諾卡菌屬 學習目標及重點 學習目標： 1.掌握結核分枝桿菌生物學特征，痰涂片抗酸染色及報告。 2.熟悉結核菌素試驗的臨床意義；結核分枝桿菌和麻風分枝桿菌； 星形諾卡菌的鑒別要點，諾卡菌與分枝桿菌、棒狀桿菌的鑒別。 3.了解結核分枝桿菌的致病物質；麻風分枝桿菌致病性；放線菌 屬的生物學特性、致病及免疫性 本章重

2、點： 結核分枝菌的生物學特性、培養(yǎng)特性 結核分枝菌的微生物學檢驗 結核分枝菌與其他分枝菌的鑒別 第一節(jié) 分枝桿菌屬 分枝桿菌屬（Mycobacterium）概述 是一類細長彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而得名主要特 點 細長彎曲，分枝狀生長 細胞壁含有大量脂質（分枝菌酸） 常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽性（紅色） 引起疾病多呈慢性，且伴肉芽腫 一、結核分枝菌 (一)生物學性狀 1.形態(tài)與染色：G+（不易著色），細長略彎，分枝狀，有莢膜，抗酸 染色陽性。菌體外有莢膜 2.培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求較高，最適pH6.56.8，在羅氏（Lowenstein-Jensen，L- J）培養(yǎng)基上生長良好 生長緩慢

3、，1418h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上25w才出現(xiàn)肉眼可見 的菌落 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色， 如菜花樣 第一節(jié) 分枝桿菌屬 結核菌抗酸染色結果 結核菌菌落 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 .生化反應 不發(fā)酵糖類，觸酶試驗陽性，而熱觸酶試驗陰性加熱68散失 活性（區(qū)別非結核菌） 煙酸合成試驗、硝酸鹽還原試驗、吡嗪酰胺試驗均陽性，可與牛型 結核分枝菌鑒別 .抵抗力 對乙醇、濕熱、紫外線、抗結核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等） 敏感 對干燥、酸（3% HCl或6% H2SO4) 或堿（4% NaOH)、堿性染料（孔雀 綠、結晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力 第一

4、節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 .變異性 （）形態(tài)結構變異： 結核桿菌的L型：顆粒狀（Much顆粒病灶中革蘭陽性非 抗酸性）、絲狀 （）毒力變異： 卡介苗(BCG)：Calmette和Gurin將牛型分枝桿菌經(jīng)13年 230次傳代而獲得的減毒菌株活疫苗 （）耐藥性變異： 耐異煙肼及其他抗結核藥物的結核菌株日益增多 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 （二）微生物檢驗 1.標本：根據(jù)感染部位的不同來采集不同的標本，最常用痰液 標本 2. 標本前處理 目前有酸（4%HCl）處理和堿（4%NaOH）處理兩種方法 3.檢驗程序 第一節(jié) 分枝桿菌屬 標本 核酸 檢測 接種固體培養(yǎng)基 可疑菌落 涂片抗酸

5、染色鏡檢 抗體 檢測 慢性生長菌快速生長菌 菌種鑒定 標本前處理 接種液體 培養(yǎng)基 接種小白鼠 豚鼠 臟器涂片 鏡檢 抗酸染色鑒定試驗 檢驗程 序 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 4.形態(tài)學檢查 （高壓滅菌后進行） （1）直接涂片染色鏡檢 （2）濃縮集菌涂片檢查法 （3）熒光染色：觀察形態(tài) 黃綠色、橙色熒光 （4）初步報告：檢出抗酸分枝桿菌（結核桿菌？） 第一節(jié) 分枝桿菌屬 報告方式抗酸染色鏡檢結果 -仔細檢查300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌 300個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)12條抗酸菌 100個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌 210個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌 3每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)19條抗酸菌 4每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸

6、菌 一、結核分枝菌 （5）報告方式 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 5.分離培養(yǎng) L-J斜面或平板：生長緩慢，涂片抗酸染色 快速培養(yǎng)系統(tǒng)：自動報告 6.核酸檢測：PCR法 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 (三)臨床意義 1.致病物質：主要與菌體成份有關。 （1）脂質 分枝菌酸：與抗酸性有關 蠟質D:具有佐劑作用 硫酸腦苷脂:阻礙吞噬 磷脂:促類上皮細胞形成 索狀因子:與該菌毒力有密切關系 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 （2）蛋白質 誘發(fā)超敏反應 （3）糖類 抵抗吞噬作用 2.所致疾病 （1）經(jīng)多途徑感染，引起全身各組織結核病，以肺結核最多見 （2）類型 原發(fā)感染和繼發(fā)感染 3.免

7、疫性 抗結核免疫以細胞免疫為主 抗結核免疫屬帶菌免疫或稱傳染性免疫 抗結核免疫與型超敏反應同時出現(xiàn) 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 4.結核菌素試驗 （1）原理 用結核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結核 桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應的試驗。 （2）結核菌素試劑 （PPD 5單位）舊結核菌素（old tuberculin，OT)，純蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) （3）結果 48h-72h ,根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結果 5mm為陰性 5mm為陽性 15mm為強陽性 第一節(jié) 分枝桿菌屬 一、結核分枝菌 （4）結核菌素試驗意義 u選擇卡

8、介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果 u了解人群結核菌的自然感染率 u作為嬰幼兒結核病的輔助診斷 u測定腫瘤患者的細胞免疫功能 第一節(jié) 分枝桿菌屬 二、麻風分枝菌 1.生物學特性 1873年挪威學者Armauer Hansen從麻風患者皮膚結節(jié)中發(fā)現(xiàn)， 又名Hansen桿菌，具抗酸性 細胞內(nèi)寄生，有麻風桿菌寄生的細胞呈泡沫狀，稱為麻風細胞 體外人工培養(yǎng)尚未成功 犰狳是動物感染模型 第一節(jié) 分枝桿菌屬 麻 風 分 枝 菌 犰狳 第一節(jié) 分枝桿菌屬 二、麻風分枝菌 2.所致疾病: 傳播途徑：主要是密切接觸 麻風：侵害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng) 臨床分型：（臨床表現(xiàn)、病理特征和菌檢結果） 瘤型麻風（占

9、20%30%，傳染性強） 結核樣型麻風（占60%70%，傳染性弱） 界線類綜合癥（占5%，可轉化為以上兩型） 3.防治原則：早發(fā)現(xiàn)（檢驗時，標本通常采用刮片），早隔離、 早治療，治療藥物主要有砜類（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福 平、氯苯吩嗪及丙硫異煙胺 第一節(jié) 分枝桿菌屬 麻風“獅面” 第一節(jié) 分枝桿菌屬 三、非典型分枝菌 1.非典型分枝桿菌：除人型結核分枝桿菌、牛型結核分枝桿菌與麻風 分枝桿菌以外的分枝桿菌菌群，也稱為非結核分枝桿菌 2.致病性：多存在于自然界，為條件致病菌 3.分類：根據(jù)菌落色素和生長速度分為4組 第組（Runyon群）：光產(chǎn)色菌 第組（Runyon 群）：暗產(chǎn)色菌 第

10、組（Runyon 群）：不產(chǎn)色菌 第組（Runyon 群）：迅速生長菌 光產(chǎn)色菌 第一節(jié) 分枝桿菌屬 4.代表菌種 第組（Runyon群）：光產(chǎn)色菌：堪薩斯分枝桿菌、猿猴分 枝桿菌 第組（Runyon 群）：暗產(chǎn)色菌：蟾蜍分枝桿菌、蘇加分 枝桿菌、瘰疬分枝桿菌 第組（Runyon 群）：不產(chǎn)色菌：鳥分枝桿菌復合群 (Mlvium complex ,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌 第組（Runyon 群）：迅速生長菌：龜分枝桿菌、膿腫分 枝桿菌、偶發(fā)分枝桿菌 返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容 第一節(jié) 分枝桿菌屬 第二節(jié) 諾卡菌屬 一、諾卡菌屬 （一）種類：諾卡菌屬（Nocordio ）中有22個種

11、，廣泛分布于土壤， 與醫(yī)學有關的13個菌種： 膿腫諾卡菌 星形諾卡菌 新星諾卡菌 非洲諾卡菌 豚鼠耳炎諾卡菌 少食諾卡菌 巴西諾卡菌 假巴西諾卡菌 短鏈諾卡菌 南非諾卡菌 肉色諾卡菌 老兵諾卡菌 皮瘟諾卡菌 諾卡菌屬主要形成基內(nèi)菌絲，菌絲纖細，一般無氣生菌絲。少 數(shù)菌產(chǎn)生一薄層氣生菌絲，成為孢子絲?；鶅?nèi)菌絲和孢子絲均有橫 隔，斷裂后形成不同長度的桿形 一、諾卡菌屬 （二）生物學特性 1.專性需氧 2.菌體內(nèi)含分枝菌酸 3.分布：土壤中，多數(shù)為非致病菌 4.常見致病菌： 星形諾卡菌（N. asteroides） 巴西諾卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠諾卡菌（N. caviae） 5.

12、培養(yǎng)：菌落表面多皺、致密、干燥或濕潤，呈黃、黃綠、橙紅等色。 用接種環(huán)一觸即碎 第二節(jié) 諾卡菌屬 （三）星形諾卡菌 1.形態(tài)：球形、絲狀（與以色列放線菌相 似，但末端不膨大） 革蘭染色：陽性 抗酸染色：陽性 脫色時間延長陰性(與TB區(qū)別) 2. 類似“硫磺樣顆?！保ǚQ色素顆粒） 滲出液、痰或膿汁中有時可見淡黃、 紅色或黑色小顆粒 美藍染色 G+絲狀，弱抗酸性 第二節(jié) 諾卡菌屬 （三）星形諾卡菌 3.培養(yǎng)： 營養(yǎng)要求：不高（沙氏或普通瓊脂培養(yǎng)基） 氣體環(huán)境：需氧，有氣生菌絲 培養(yǎng)溫度：室溫或37 生長速度：緩慢生長，約1w 色素：星形諾卡菌：黃色或深橙色，無白色菌絲 巴西諾卡菌：有白色菌絲 菌絲

13、斷裂： 5d后鏈球狀或鏈桿狀（放線菌屬：24h開始) 培養(yǎng)特征：菌落：有皺褶、顆粒狀 液體：菌膜 第二節(jié) 諾卡菌屬 （三）星形諾卡菌 4.鑒定： （1）“硫磺樣顆?！眽浩?（2）取痰、腦脊液、膿汁 涂片革蘭染色及抗酸染色 （3）分離培養(yǎng) 沙保弱或普通瓊脂培養(yǎng)基 （4）生化試驗 第二節(jié) 諾卡菌屬 （四）巴西諾卡菌 巴西諾卡菌及星形諾卡菌因侵入皮下組織，引起慢性化膿性 肉芽腫，表現(xiàn)為皮下腫脹、膿腫及多發(fā)性瘺管，如發(fā)生于足 部或腿部，稱足分枝菌?。∕ycotoma）。 本病也可能由馬 杜拉放線菌及某些真菌引起 該菌七葉苷、黃嘌呤、肌醇、甘露醇均陽性，可與星形諾卡 菌區(qū)別 返回章內(nèi)容返回章內(nèi)容 第二節(jié)

14、 諾卡菌屬 第三節(jié) 放線菌屬 一、放線菌屬 1.致?。悍啪€菌能引起牛和人的放線菌?。ˋctinomycosis）的病 原菌，屬于內(nèi)源性感染。因菌落生長呈放射狀而得名。 2.常見種類： 衣氏放線菌(A.israelii) (最多見) 牛放線菌(A.bouis) 內(nèi)氏放線菌（A.naeslundii) 黏液放線菌(A.viscous) 齲齒放線菌（A.adontolyticus) 3.培養(yǎng)：厭氧或微需氧 氣體環(huán)境：5 CO2 培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板 溫度與時間：37，24h48h 菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)則結節(jié)狀或臼齒狀菌落, 初次分離時 (粗糙) 4.生化特性：葡萄糖() 甘露醇()吲哚() 溶血() 觸酶 試驗()(黏液放線菌除外) 第三節(jié) 放線菌屬