百合懸浮細胞體系的建立及植株再生.doc

1、百合懸浮細胞體系的建立及植株再生為了建立良好的百合懸浮細胞培養(yǎng)體系 , 本試驗首先研究了其愈傷組織誘導 與再生體系 , 進而建立了 3 個基因型的 5個懸浮細胞系。試驗具體研究方法及取 得的結(jié)果和結(jié)論如下 :( 一) 愈傷組織誘導與再生體系研究 (1) 愈傷組織發(fā)生能力 的測試:為了選擇適宜的基因型和外植體類型 , 試驗選用多個百合基因型的多種 外植體(試管鱗莖、田間鱗莖、花器官或種子 )為試材, 利用激素 picloram 進行愈 傷組織誘導。試驗結(jié)果表明 ,愈傷組織發(fā)生能力為岷江百合、麝香百合 >OT 系百合、東 方百合、亞洲百合>蘭州百合,誘導效果為鱗片>花絲>種

2、子>花柱> 花藥和子房。但具體到某一基因型或同一基因型的不同外植體其愈傷組織發(fā)生能 力仍然存在差異。(2) 愈傷組織誘導與再生的研究 : 選用愈傷組織發(fā)生能力較強的岷江百合和 麝香百合白狐的試管鱗莖為試材。在愈傷組織誘導過程中 , 岷江百合研究了 picloram 濃度的影響 , 白狐 研究了光照、 起始材料狀態(tài)及激素種類 (picloram 和2,4-D)和濃度的影響；在愈傷組織再生過程中，兩個基因型均研究了 MS中大量 元素含量和蔗糖濃度的影響。試驗結(jié)果表明 , 岷江百合在 picloram 2.0 mg?L-1 條件下誘導效果最佳 , 誘導 率約為 80%;白狐在 piclo

3、ram 1.0 mg?L-1 條件下誘導效果最佳 , 誘導率約為 100%,光照和起始材料狀態(tài)對愈傷組織誘導的影響不顯著;2 個品種的最佳再生培養(yǎng)基均為 ?MS +蔗糖 15 g?L-1 。(3) 愈傷組織的再生 :將生長良好的愈傷組織接 種到培養(yǎng)基？MS蔗糖15 g?L-1上進行植株再生,試驗結(jié)果表明,基因型和愈傷組織類型在愈傷組織再生中起著重要作用在基因型相同的條件下 , 愈傷組織的再生能力主要與愈傷組織類型有關(guān)。胚 性愈傷組織的再生能力強 , 再生率基本為 100%,非胚性愈傷組織的再生能力差 , 再生率偏低。（ 二） 懸浮細胞系建立與植株再生的研究在 （ 一） 中選用生長良好且可成功再 生的愈傷組織接種到培養(yǎng)液 MS（NH4NO含量減半）+2.0mg?L-1 picloram+30g?L-1 蔗糖,置于25C恒溫搖床上,100 r min-1、黑暗條件下進行懸浮培養(yǎng)。懸浮細 胞在再生培養(yǎng)基？MS+15 g?L-1蔗糖上進行植株再生。試驗結(jié)果表明 , 各懸浮細胞系的狀態(tài)和再生情況與其起始愈傷組織的狀態(tài)和 再生情況相對應(yīng)。結(jié)構(gòu)松散的愈傷組織其懸浮細胞系的建立時間短 , 分散度、均 一度和生長速率高 , 但由于為非胚性愈傷組織 , 其懸浮細胞系的再生率也偏低 ; 顆 粒狀、結(jié)構(gòu)緊實的愈傷組織其懸浮細