高效液相色譜法測定食物中氨基酸含量北京液相色譜儀分析案例最新

1、食物中氨基酸含量的高效液相色譜法測定一、簡介測定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析儀，柱后衍生測定，但氨基酸分析儀價格昂貴，分析時間長，且只能用于分析氨基酸，限 制了氨基酸分析技術(shù)的廣泛應(yīng)用。 七十年代以來，柱前衍生高效液相 色譜法開始應(yīng)用于氨基酸的測定。液相色譜通用性強，檢測靈敏度高, 可用于多種物質(zhì)的分析。南京科捷應(yīng)用研究所采用柱前衍生紫外檢測的方法對幾種食物 中的16種氨基酸進行了測定LC-10Tvp梯度高效液相色譜儀配置LC-10Tvp高壓恒流泵：2臺SPD-1OTvp紫外檢測器：1臺SCL-1OTvp系統(tǒng)控制器：1臺7725i手動進樣閥：1套色譜工作站：1套(VI2010、N2000

2、 N3000選用)液相色譜柱：1支(C18 4.6*250m n, 5um)微量進樣器：1支(50ul/100ul )進樣支架：1只（進樣閥用）三、LC-1OTvp梯度高效液相色譜儀特點LC-1OTvp梯度高效液相色譜儀是南京科捷分析儀器有限公司為了快速地滿足多樣化的客戶 需求，在原有的 STI501液相色譜儀的基礎(chǔ)上經(jīng)過優(yōu)化，利用美國先進技術(shù)開發(fā)設(shè)計，國內(nèi) 加工生產(chǎn)的的一款新型的液相色譜儀。LC-1OTvp等度高效液相色譜儀實現(xiàn)了人機對話，可實時對儀器的運行狀態(tài)進行監(jiān)控，并可對潛在和已出現(xiàn)的故障做出判斷，同時提供在線解決方案。該儀器也全面實現(xiàn)了遠程的準無人操作，大大提高了儀器的使用效率，同時

3、通過高精度的AS1000自動進樣系統(tǒng)，實現(xiàn)自動化進樣，最大程度抑制了樣品的交叉污染，提供樣品 分析精度。LC-10Tvp等度高效液相色譜儀可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、 化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。主要特點豐富的功能符合客戶對分析的不同需求硬件具有VP功能，記錄維護信息和操作記錄，符合GLP/GMf要求；系統(tǒng)控制器增具有時鐘、溫度計、濕度計等人性化設(shè)計的功能。卓越的性能一一滿足客戶對儀器的嚴格要求檢測器采用進口氘燈、光電池以及 1200條/mm凹面光柵組成的雙光束單色器；精密加工 的雙透鏡流通池，控制波長調(diào)節(jié)的高精度微處理器以及雙路高速的采樣頻率，確保了低噪聲、低漂移及超高靈

4、敏度等特點。VI2010 工作站符合多種法規(guī)要求。可靠的結(jié)果一一滿足客戶對結(jié)果的準確要求與進口儀器做對比試驗，分析結(jié)果具有高度的一致性。簡便的操作便于客戶對軟件的熟練操作軟件采用多窗口模式，操作方便。精美的外觀一一滿足客戶對儀器的視覺要求外形精美，帶來視覺上的享受。技術(shù)指標LC-10Tvp高壓恒流輸液泵輸液方式微體積串聯(lián)雙柱塞最大輸液壓力0 9999Psi流量設(shè)定范圍0.001 9.999ml/min（以 0.001ml/min 步長調(diào)節(jié)流量）流量設(shè)定值誤差 0.5%流量穩(wěn)定性誤差 10最小檢測濃度w 1x 10-9g/mL（萘/甲醇溶液）定性重復性RSDW 0.1%定量重復性RSDW 0.5

5、%光譜帶寬6nm流通池體積8卩L光程10mm時間程序功能有尺寸W26X H130X D42 0mm重量11kg四、食物中氨基酸含量的檢測方法1、試劑濃鹽酸（優(yōu)級純），苯酚（分析純），混合氨基酸標準液，含17種蛋 白水解氨基酸，天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸 、 精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、胱氨酸、酪氨酸、擷氨酸、 蛋氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸，除胱氨酸濃度為1.25mmol/L夕卜，其余16種氨基酸濃度各為2.5mmol/L流動相A,磷酸 鹽緩沖液 用1： 10雙蒸水稀釋，pH4.95。亦可自行配制，流動相B: 乙睛，流動相C:雙蒸水，硼酸鹽緩沖液 衍生試劑6 一氨

6、基喹琳基一 N 一羥基琥珀酞亞氨基甲酸酯，用時加入1mL乙睛,混勻于55C烘箱 加熱10min至溶解2、儀器高效液相色譜儀：LC-10Tvp,紫外檢測器：SPD-10Tvp真空泵超聲波清洗器渦旋混合器。3、色譜條件色譜柱，色譜柱：高效C18色譜柱柱溫：37C檢測波長：248nm進樣量：10uL 梯度洗脫條件，如表表1流動相梯度洗脫表Table 1 Conditions of gradient separation時間流速流動相A( %)流動相O)流動相C(%)(mm)(ni/ain)irubdemobilemobilefltw mtephffie Ajiiase Bphase C0UO1000

7、0171,0915.43.6241.08017334uo68201235uo682012371.006040381 .01000045uo100004、實驗方法4.1衍生反應(yīng)衍生試劑(AQC)與氨基酸迅速反應(yīng)生成在248nm有紫外吸收的高穩(wěn)定性的脲和羥基琥珀酰亞胺(NHS)，過量的試劑可在慢反應(yīng)中完全水解，過程如下o4.2氨基酸衍生步驟用微量注射器移取10uL稀釋的氨基酸標準液或樣品水解液放人6 (50mm樣品管底部加人70uL硼酸鹽緩沖液，渦旋混合10s），邊渦旋混合邊加入20uL衍生試 劑溶液，用封口膜密封樣品管，置于55C烘箱中加熱10min,從烘箱中取出樣品 管冷卻至室溫，供分析用。此

8、衍生樣品于4：C4.3樣品水解精密稱取適量樣品 約0.5-1.0g于水解管中，加入6mol/L鹽酸10-15ml，加入少 量新蒸餾的苯酚，抽真空，充高純氮氣，重復 3次。迅速將已充好氮氣的水解管 擰緊蓋子，放入110C烘箱中水解22h。水解完畢，將水解液過濾，定容。取適 量，于55 E減壓干燥至干，再用適量二次蒸餾水復溶，備用。工作曲線制作將氨基酸標準液配制成濃度分100,200,400,600,800,1000umol/L的溶液，每一標準液取10uL依上法衍生后進行測定，色譜分離見圖 113氨基酸標準；b雀巢奶粉l,asp; 2* ser; 3. glu; 4. gly; 5. his; 6

9、.NH3; 7. aig; 8t thr; 9- ala 10* pm; IL cys; 12. tyr; 13. val; 14. met; 15.1ys; 16ule; 17. leu; 18* phet圖1氨基酸標準及樣品的色譜4.4結(jié)果與討論回歸方程根據(jù)工作曲線，以峰面積（A）與濃度（C）進行回歸分析，回歸方程 結(jié)果見表2。各氨基酸的檢測限為0.54umol/LTable 2 The linear regreaaion equalion and the linear ranges of amino addsamina acicb線性回歸方軽linear ifpcsaLun equati

10、on耀性范圏“劇L)linear range梅關(guān)玉數(shù)TcoKidatiffin coefficientA = 34905 r?c+156824.610-000.9975A = 44246.?c + 2eO64.9910-1000.9995A = 33442Jc+lOT64310-80a.99&4A = 5658.55c-320271Q-1000 9946A = 52251. I7c+12165h610-1000.9980A=S393Sl23c+335&44,310-8Q0.9980A-5fi982.4lc+110590.1心1000.WS5A =3906S.44c +269224.4ID-1Q00.9914. = 45927.8 + 793274710-1000.99B9A-60066.48c-22245.410-lOT0 9997A = 52251J7c+128165.610-100Q.9980A61474.iac-3S6(fi10-1000.99%A = 83938.23c+ 335844.310-80Q99S0A = 56M0 66c+H4682.610- LOO0.