基因工程基礎(chǔ)知識(shí)梳理(一)

1、-作者xxxx-日期xxxx基因工程基礎(chǔ)知識(shí)梳理(一)【精品文檔】基因工程基礎(chǔ)知識(shí)梳理（一）一、DNA重組技術(shù)的基本工具基因工程又叫，指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過(guò)體外DNA重組和等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。其操作水平是在上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工，操作環(huán)境是在生物體外。1限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”（1）主要來(lái)源：生物。（2）特點(diǎn)：能夠識(shí)別DNA特定的，切開(kāi)兩個(gè)核苷酸之間的。（3）DNA末端：限制酶切割DNA產(chǎn)生的DNA末端有兩種形式： 和 。2DNA連接酶“分子縫合針”（1）作用：將雙鏈“縫合”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的。

2、（2）種類Ecoli DNA連接酶：只能縫合DNA的。T4DNA連接酶：即可縫合DNA的黏性末端，又可縫合雙鏈DNA的。3基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體“分子運(yùn)輸車”（1）載體的種類質(zhì)粒：是一種裸露、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有能力的。的衍生物。動(dòng)植物病毒。（2）質(zhì)粒載體的特點(diǎn)能夠在細(xì)胞內(nèi)。具有一個(gè)或多個(gè)，便于供外源DNA片段插入其中。具有特殊的，供重組DNA的鑒定和選擇。（3）質(zhì)粒載體的處理：真正被用作載體的質(zhì)粒，都必須在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行。二、基因工程的基本操作程序1目的基因的獲?。?）目的基因：指編碼蛋白質(zhì)的。（2）獲取目的基因的方法從基因文庫(kù)中獲取目的基因a基因文庫(kù)的含義：將含

3、有某種生物不同基因的許多，導(dǎo)入的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫(kù)。b基因文庫(kù)和種類（）基因組文庫(kù)：含有一種生物的基因（）部分基因文庫(kù)：含有一種生物的基因c目的基因的獲取依據(jù)：（）基因的序列；（）基因的功能；（）基因在染色體上的位置；（）基因的產(chǎn)物mRNA；（）基因的翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因aPCR的含義：是一項(xiàng)在生物體外特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。b條件：已知基因的。c過(guò)程：目的基因受熱形成，與引物結(jié)合，在的作用下延伸形成DNA。d方式：指數(shù)擴(kuò)增2n（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）人工合成法：若基因較小、序列已知，可以人工合成。2基因表達(dá)載體的構(gòu)建（1）

4、表達(dá)載體的組成：目的基因終止子標(biāo)記基因。（2）表達(dá)載體的功能使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且給下一代。使目的基因和發(fā)揮作用。（3）啟動(dòng)子：位于基因的，它是識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA。（4）終止子：位于基因的尾端，終止。（5）標(biāo)記基因：是否含有目的基因。3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化的含義：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持的過(guò)程。（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法a農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力；Ti質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。b轉(zhuǎn)化過(guò)程：目的基因插入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞穩(wěn)定維持和表達(dá)基因槍法。

5、花粉管通道法。（2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法：注射技術(shù)。操作程序：目的基因表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩╋@微注射新性狀的動(dòng)物。（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞原核生物特點(diǎn)：繁殖快、多為、遺傳物質(zhì)少。轉(zhuǎn)化：處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 細(xì)胞吸收DNA分子。4目的基因的檢測(cè)與鑒定（1）檢測(cè)方法：采用技術(shù)，抗原抗體雜交技術(shù)。內(nèi)容：a檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的上的目的基因。b檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。c檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。（2）鑒定：鑒定、抗病鑒定等?！敬鸢浮恳弧⒒蛑亟M技術(shù)轉(zhuǎn)基因DNA分子水平1原核核苷酸序列磷酸二酯鍵黏性末端平末端2DNA片段磷酸二酯鍵黏性末端平末端3自我復(fù)制雙鏈環(huán)狀DNA分子噬菌體自我復(fù)制限制酶切割位點(diǎn)遺傳標(biāo)記基因人工改造二、1結(jié)構(gòu)基因DNA片段受體菌所有一部分核苷酸轉(zhuǎn)錄復(fù)制核苷酸序列單鏈DNADNA聚合酶核苷酸 2 啟動(dòng)子終止子遺傳表達(dá)首端RNA