高效液相色譜儀器分析實驗教案

1、 儀器分析實驗 課程教案實驗名稱：高效液相色譜混合物的定量和定性測定實驗類型驗證性教學(xué)時數(shù)7每組人數(shù)8一、實驗?zāi)康募耙螅? 掌握高效液相色譜定性和定量分析的原理及方法；2 了解高效液相色譜的構(gòu)造、原理；3 學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的操作。教學(xué)重點：1、 溶液配制的條件2、色譜工作站參數(shù)的設(shè)定。3、定量定性分析方法 教學(xué)難點：(1)、學(xué)習(xí)高效液相色譜的使用方法、了解該儀器的結(jié)構(gòu)；(2)、定量定性分析方法二、實驗原理高效液相色譜由儲液器，泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有

2、不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運(yùn)動，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。三、主要儀器和試劑主要儀器：安捷倫1260液相色譜儀，配有紫外檢測器，phenomenex ods 柱； 1自動進(jìn)樣器。試劑：色譜純甲苯、苯、丙酮、甲醇、超純水； 未知樣品1、2、3、4。教學(xué)內(nèi)容及過程（一）檢查實驗預(yù)習(xí)報告（二）上次實驗存在的問題（三）高效液相色譜操作（四）實驗內(nèi)容及步驟a、溶液配制1 配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 三組分混標(biāo)液：每ml溶液分別含5 ul苯、甲苯和丙酮。 分別準(zhǔn)確移取0、2.50、5.00

3、、10.00和20.00 ul甲苯容易溶于1.00ml甲醇中。2 流動相的配制、過濾和除氣。 標(biāo)準(zhǔn)苯測試液。 未知樣品1號、2號、3號和4號。 b、上機(jī)測定1 更換流動相。2 按操作規(guī)定開動儀器，排氣后讓色譜柱平衡（流動性為80%甲醇，速度1.0 ml/min）。3 設(shè)置色譜工作站參數(shù)。agilent hplc儀色譜柱：流動相：甲醇：水=8：2流速：1.0 ml/min檢測波長：254nm進(jìn)樣體積：10l4 進(jìn)樣、采集色譜圖。1）三組分混標(biāo)液2）標(biāo)準(zhǔn)溶液系列3）未知樣品5 色譜數(shù)據(jù)分析，打印色譜圖及分析報告。6 更換甲醇流動相，清洗色譜柱。7 關(guān)閉儀器。（五）提問1、高效液相色譜溶液配制需要注

4、意哪些操作？答：藥品需要色譜純的；配制好的溶液需要抽氣處理這步操作有些高效液相色譜能自動完成。2、 利用高效液相色譜進(jìn)行定量和定性分析的依據(jù)有哪些？答：定性分析根據(jù)相同色譜系統(tǒng)下同一物質(zhì)的保留時間相同；定量分析的依據(jù)是在一定濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積(或峰高)成正比。（六）數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果處理確定樣品內(nèi)的物質(zhì)，確定樣品中甲苯的濃度。1）定性分析實驗記錄2）定量分析實驗記錄 丙酮濃度（ul/ml）峰面積（uv*s）標(biāo)樣1501875145標(biāo)樣2752876718標(biāo)樣31003750275標(biāo)樣41254607851 丙酮標(biāo)樣標(biāo)準(zhǔn)曲線課后小結(jié)：本次儀器分析實驗高效液相色譜混合物的定量和定性測定，學(xué)生通過儀器分析實驗，基本了解高效液相色譜的性能及