平堅(jiān)洗劑對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎的療效及關(guān)節(jié)液中MiR-140的影響

1、 平堅(jiān)洗劑對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎的療效及關(guān)節(jié)液中mir-140的影響 摘要目的:探討平堅(jiān)洗劑對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎（koa）的療效及關(guān)節(jié)液中mir-140的影響。方法:選擇2018年2月2019年1月于我院住院治療的100例koa患者為研究對(duì)象，簡(jiǎn)單隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組，每組50例。對(duì)照組患者使用硫酸氨基葡萄糖治療，觀察組患者在對(duì)照組患者基礎(chǔ)上使用平堅(jiān)洗劑外洗治療。隨訪1個(gè)月，記錄并比較兩組患者治療前后關(guān)節(jié)液中mir-140表達(dá)情況、骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)（womac）、炎性因子水平變化及臨床療效。結(jié)果:治療前，兩組患者的mir-140表達(dá)情況、womac評(píng)分、il-1、il-6水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.

2、05）。治療后，兩組患者的mir-140水平均較治療前升高，且觀察組患者高于對(duì)照組患者，而womac評(píng)分及il-1、il-6水平均較治療前降低，且觀察組患者低于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。兩組患者的臨床療效比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。觀察組患者的臨床療效總有效率為94.00%，優(yōu)于對(duì)照組患者的80.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。結(jié)論:平堅(jiān)洗劑可提高koa患者關(guān)節(jié)液中的mir-140表達(dá)情況，有效減輕炎癥反應(yīng)，改善關(guān)節(jié)活動(dòng)功能，療效顯著。關(guān)鍵詞 平堅(jiān)洗劑；膝骨膝關(guān)節(jié)炎；關(guān)節(jié)液；mir-140；臨床療效膝骨膝關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis,

3、koa）是多發(fā)于老年群體的慢性關(guān)節(jié)疾病，患者主要表現(xiàn)為繼發(fā)性骨質(zhì)增生及關(guān)節(jié)退行性病變?；颊叨喟殡S膝關(guān)節(jié)活動(dòng)困難、疼痛、腫脹，嚴(yán)重者甚至癱瘓1。目前，西醫(yī)臨床針對(duì)早期koa患者多以藥物控制為主，而晚期患者則需接受關(guān)節(jié)置換術(shù)，但術(shù)后并發(fā)癥情況較多2。隨著中醫(yī)理論在臨床治療中的廣泛應(yīng)用，中藥方劑在koa的治療中獲得不錯(cuò)的療效3。雖然中藥外用在蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)等方面對(duì)治療koa具有尚佳療效，但關(guān)于中藥外用在koa治療的報(bào)道相對(duì)匱乏4。而有研究表明，mir-140表達(dá)于多種骨關(guān)節(jié)炎病變患者的膝關(guān)節(jié)液中，且mir-140的表達(dá)與骨關(guān)節(jié)炎病變存在顯著相關(guān)性5?；诖耍狙芯刻接懥酥兴幫庥梅絼┢綀?jiān)洗劑對(duì)k

4、oa患者關(guān)節(jié)液中mir-140的影響及臨床療效，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1 資料與方法1.1一般資料選擇2018年2月2019年1月于我院住院治療的100例koa患者為研究對(duì)象，簡(jiǎn)單隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組，每組50例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的koa診斷標(biāo)準(zhǔn)6：就診前1個(gè)月內(nèi)膝關(guān)節(jié)疼痛天數(shù)14d、膝關(guān)節(jié)活動(dòng)伴骨摩擦聲、x線顯示膝關(guān)節(jié)骨端邊沿骨贅形成或是骨質(zhì)增生、膝關(guān)節(jié)晨僵時(shí)間30min、年齡40歲、關(guān)節(jié)液清亮、黏稠，白細(xì)胞計(jì)數(shù)0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。此研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)同意，患者家屬知曉并簽署知情同意書。表1 兩組患者的基線資料比較n=50,(%),組別性別（男/女）平均年

5、齡（歲）病程（年）k-l分級(jí)（例）中醫(yī)證候分型（例）級(jí)級(jí)級(jí)腎虛髓虧陽(yáng)虛寒凝瘀血阻滯觀察組28/2255.249.783.440.7117（34.00）20（40.00）13（26.00）22（44.00）16（32.00）12（24.00）對(duì)照組29/2155.329.873.540.8415（30.00）23（46.00）12（24.00）20（40.00）17（34.00）13（26.00）x2/t值0.0410.0410.6430.1840.3670.0530.1640.0450.053p值0.8400.9680.5220.6680.5450.8170.6850.8320.8171.2方

6、法1.2.1治療方法對(duì)照組患者使用硫酸氨基葡萄糖治療：硫酸氨基葡萄糖膠囊（國(guó)藥準(zhǔn)字h20041317，新興同仁藥業(yè)有限公司，0.314克(相當(dāng)于硫酸氨基葡萄糖0.25克)）口服，進(jìn)餐時(shí)服用，1-2片/次，3次/d，30d為1療程，連續(xù)服用1個(gè)療程。觀察組患者在對(duì)照組患者基礎(chǔ)上使用平堅(jiān)洗劑治療：洗劑配方：5g細(xì)辛，10g花椒，白芷、獨(dú)活、羌活、艾葉、透骨草、伸筋草各20g、500g威靈仙。將上述組方藥物放于專門治療儀器中，反復(fù)2次煎汁后，將藥渣倒入布袋內(nèi)并置入盆中，并加入適量清水及陳醋，予以加熱，趁熱充分熏蒸患膝，邊熏蒸邊按摩，溫度降低，重新加熱，反復(fù)熏蒸。30min/次，2次/d，2周為1療程

7、，連續(xù)治療2個(gè)療程。1.2.2檢測(cè)方法采集兩組患者治療前（入院時(shí)）、治療后（治療后1個(gè)月）的關(guān)節(jié)液：囑患者取平臥位，局部消毒、麻醉膝關(guān)節(jié)，髕上外側(cè)穿刺膝關(guān)節(jié)腔，抽取約2ml關(guān)節(jié)液，室溫靜置1h，再3000r/min，離心處理20min，棄關(guān)節(jié)組織碎片及細(xì)胞，得上清液，-80冷藏待檢。mir-140檢測(cè)：提取總rna：trizol法。分光光度計(jì)檢測(cè)rna濃度，變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)rna質(zhì)量；逆轉(zhuǎn)錄：反應(yīng)體系組成：2 l 10rt buffer、0.3 l rna酶抑制劑（40 iu/l）、2 l mmlv反轉(zhuǎn)錄酶（10 iu/l）、0.5 l rt特異引物（1m）、2 l dntp（2.5 m

8、m each）、0.3 g總rna，共20 l。反應(yīng)條件：16，30min42，40min85，5min，反應(yīng)結(jié)束，先于冰上冷卻5min，再-80冷存；rt-pcr擴(kuò)增：0.2 l 2rox reference dye、0.4 l 10 m的pcr特異引物r、0.4 l 10 m的pcr特異引物f、0.25至終濃度 sybergreen i、0.5 iu taq聚合酶、0.6 lmgcl2溶液、1.0 l 10pcr緩沖液、1.0 l dntp（2.5 mm each），共8 l。反應(yīng)條件：先95，3min；再95，15s60，30s70，30s，循環(huán)40次，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。內(nèi)參為u6 snrn

9、a，上游引物為5-gcct-cagtggttttacccta-3，下游引物為5-gtgcagggtc-cgaggt-3，數(shù)據(jù)根據(jù)公式2-ct法分析8。1.3觀察指標(biāo)隨訪1個(gè)月，記錄并比較兩組患者治療前（入院時(shí)）、治療后（治療后1個(gè)月）關(guān)節(jié)液中mir-140表達(dá)情況、骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)（womac）、炎性因子水平變化及臨床療效。骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)womac量表包括17項(xiàng)功能活動(dòng)條目、2項(xiàng)僵硬條目、5項(xiàng)關(guān)節(jié)疼痛條目，共24項(xiàng)，每項(xiàng)條目04分，總分096分，分?jǐn)?shù)越高表示癥狀越嚴(yán)重9。炎性因子包括白細(xì)胞介素-1（il-1）、白細(xì)胞介素-6（il-6），采集兩組患者治療前（入院時(shí)）、治療后（治療后1個(gè)月）清晨空腹?fàn)?/p>

10、態(tài)外周血，2000r/min，離心處理5min，得血清，酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）檢測(cè)il-1、il-6水平，試劑盒均由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。療效標(biāo)準(zhǔn)10：臨床治愈：關(guān)節(jié)活動(dòng)恢復(fù)正常，臨床癥狀完全消失，womac評(píng)分減少95%；顯效：關(guān)節(jié)活動(dòng)無(wú)限制，臨床癥狀明顯改善，womac評(píng)分減少7095%；有效：關(guān)節(jié)活動(dòng)輕微受限：臨床癥狀有所改善，womac評(píng)分減少3070%；無(wú)效：關(guān)節(jié)活動(dòng)嚴(yán)重受限，臨床癥狀為改善甚至加重，womac評(píng)分減少30%。療效總有效率=（臨床治愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)*100%。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)使用spss 22.0軟件處理。

11、其中，計(jì)數(shù)資料用n(%)表示，組間用x2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（）表示，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)治療前后用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，臨床療效等級(jí)資料用mann-whitney u 檢驗(yàn)，p0.05）。治療后，兩組患者的mir-140水平均較治療前升高，且觀察組患者高于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），見(jiàn)表2。表2 兩組患者治療前后的關(guān)節(jié)液中mir-140表達(dá)情況比較（）組別例數(shù)時(shí)間t值p值治療前治療后觀察組501.020.311.480.4425.0210.001對(duì)照組501.030.211.270.3710.6070.05）。治療后，兩組患者的womac評(píng)分及il-1、il-6水

12、平均較治療前降低，且觀察組患者低于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），見(jiàn)表3、4、5。表3 兩組患者治療前后的womac評(píng)分比較（分，）組別例數(shù)時(shí)間t值p值治療前治療后觀察組5064.9913.1825.257.5049.4730.001對(duì)照組5065.7413.2931.248.8610.6070.001t值-0.2833.649-p值-0.7780.001-表4 兩組患者治療前后的il-1水平比較（pg/ml，）組別例數(shù)時(shí)間t值p值治療前治療后觀察組5013.482.268.081.7372.0450.001對(duì)照組5012.973.158.741.3916.9950.001t值-

13、0.9302.103-p值-0.3550.038-表5 兩組患者治療前后的il-6水平比較（pg/ml，）組別例數(shù)時(shí)間t值p值治療前治療后觀察組5098.6521.1648.4110.3532.8630.001對(duì)照組50102.5616.5366.3512.1558.4570.001t值-1.0307.948-p值-0.3060.001-2.3 兩組患者的療效比較兩組患者的臨床療效比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。觀察組患者的臨床療效總有效率為94.00%，優(yōu)于對(duì)照組患者的80.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），見(jiàn)表6。表6 兩組患者的療效比較n=50，(%)組別臨床治愈顯效有效

14、無(wú)效總有效率觀察組5（10.00）18（36.00）24（48.00）3（6.00）47（94.00）對(duì)照組2（4.00）9（18.00）29（58.00）10（20.00）40（80.00）z/x2值-2.4844.332p值0.0130.0373討論mir-140是一種在軟骨細(xì)胞中特異性高表達(dá)的mirnas，其主要作用為參與人類軟骨生成、發(fā)育調(diào)控及維持軟骨細(xì)胞穩(wěn)定11。而最新研究發(fā)現(xiàn)，mir-140與koa的發(fā)生密切相關(guān)12。推斷mir-140在koa中的作用機(jī)制為：mir-140通過(guò)調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-受體1（tgf-r1）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（bmp-2）等靶基因降低koa發(fā)生率；koa

15、患者軟骨細(xì)胞病變，使得mir-140生成減少，而軟骨細(xì)胞凋亡則使得mir-140降解增加13。mir-140在koa中具體作用機(jī)制尚不明確，需進(jìn)一步深入研究。此外，炎癥反應(yīng)在koa的發(fā)生、進(jìn)展中扮演重要角色。李燦鋒14等研究表明，mir-140在不同程度的膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中的表達(dá)量逐漸降低，而經(jīng)il-1誘導(dǎo)后，mir-140的表達(dá)量又顯著升高，提示mir-140在koa中的作用受到炎性因子水平的影響。而作為最常見(jiàn)的炎性因子，il-1、il-6在koa中的作用機(jī)制為：il-1是koa中的重要促炎因子，而il-6是參與軟骨蛋白分解的負(fù)反饋調(diào)節(jié)的關(guān)鍵炎性因子，兩者不但共同抑制軟骨組織合成過(guò)程，而且

16、是破壞分解軟骨組織的重要介質(zhì)15。因而，il-1、il-6水平越高，關(guān)節(jié)軟骨病變程度越高，mir-140表達(dá)水平越低，關(guān)節(jié)僵硬、腫脹、疼痛及運(yùn)動(dòng)功能障礙等臨床癥狀更嚴(yán)重。本研究結(jié)果表明，治療后，兩組患者的il-1、il-6水平明顯降低且觀察組患者低于對(duì)照組，說(shuō)明平堅(jiān)洗劑可降低koa患者血清內(nèi)的il-1、il-6水平，可更為有效地減輕炎癥反應(yīng)；而兩組患者關(guān)節(jié)液中的mir-140表達(dá)情況均較治療前有明顯提升，且觀察組患者表達(dá)水平高于對(duì)照組患者，究其原因?yàn)椋浩綀?jiān)洗劑通過(guò)降低il-1、il-6等炎性因子水平，緩解炎癥反應(yīng)及軟骨病變進(jìn)程，故使得mir-140水平升高。此外，觀察組患者的womac評(píng)分改善

17、程度亦大于對(duì)照組患者，與王鑫等16研究結(jié)果相同，提示平堅(jiān)洗劑外洗的療效顯著。綜上所述，平堅(jiān)洗劑可提高koa患者關(guān)節(jié)液中的mir-140表達(dá)情況，有效減輕炎癥反應(yīng)，改善關(guān)節(jié)活動(dòng)功能，療效顯著。參考文獻(xiàn)1. yennan p,suputtitada a,yuktanandana p.effects of aquatic exercise and land-based exercise on postural sway in elderly with knee osteoarthritis.j.asian biomedicine,2018,4(5):739-745.2. mcalindon te,l

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