細(xì)菌的接種分離與鑒定.10

1、邵陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科邵陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科羅甫花羅甫花常用細(xì)菌培養(yǎng)方法常用細(xì)菌培養(yǎng)方法 需氧培養(yǎng)法需氧培養(yǎng)法（一般培養(yǎng)）一般培養(yǎng)） 適用于需氧菌和兼性厭氧菌培養(yǎng)。適用于需氧菌和兼性厭氧菌培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度：培養(yǎng)溫度：37（采用恒溫培養(yǎng)箱）。（采用恒溫培養(yǎng)箱）。培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)時(shí)間：1824h。 二氧化碳培養(yǎng)法二氧化碳培養(yǎng)法適用于奈瑟菌屬和布魯菌屬等苛養(yǎng)菌培養(yǎng)。適用于奈瑟菌屬和布魯菌屬等苛養(yǎng)菌培養(yǎng)。可采用燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱。可采用燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱。 微需氧培養(yǎng)法微需氧培養(yǎng)法 適用于空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等微需氧菌培養(yǎng)。適用于空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等微需氧菌培養(yǎng)。 可采用抽氣換氣法?？刹?/p>

2、用抽氣換氣法。 厭氧培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法 適用于專性厭氧菌培養(yǎng)。適用于專性厭氧菌培養(yǎng)。 厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等。鹽法等。細(xì)菌接種的基本程序細(xì)菌接種的基本程序 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本沾取標(biāo)本接種接種滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境 熱導(dǎo)法熱導(dǎo)法：從環(huán)的根部（靠近柄部）開始燒，通過(guò)熱傳導(dǎo)讓：從環(huán)的根部（靠近柄部）開始燒，通過(guò)熱傳導(dǎo)讓接種環(huán)或針上帶的菌慢慢受熱，直至干燥，最后放在氧化接種環(huán)或針上

3、帶的菌慢慢受熱，直至干燥，最后放在氧化焰（外層溫度高）上徹底滅菌。焰（外層溫度高）上徹底滅菌。 從還原焰開始法：（從還原焰開始法：（內(nèi)層溫度低），帶菌的接種環(huán)或針直內(nèi)層溫度低），帶菌的接種環(huán)或針直接置于此不會(huì)引起氣溶膠噴濺，待完全干燥后再移至氧化接置于此不會(huì)引起氣溶膠噴濺，待完全干燥后再移至氧化焰部位徹底滅菌。焰部位徹底滅菌。平板劃線法平板劃線法 原則和目的：通過(guò)劃線稀釋細(xì)菌原則和目的：通過(guò)劃線稀釋細(xì)菌 獲得單個(gè)菌落獲得單個(gè)菌落 要領(lǐng)： g g 劃線均勻而細(xì)密，不重復(fù)。劃線均勻而細(xì)密，不重復(fù)。 a a 充分的利用培養(yǎng)基的面積。充分的利用培養(yǎng)基的面積。 b b 培養(yǎng)基不能劃破。培養(yǎng)基不能劃破。

4、gbgb 培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)皿倒置。培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)皿倒置。 一一 防止培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)防止培養(yǎng)基的水分蒸發(fā) 二二 防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成染菌防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成染菌 三三 倒放可以在某種程度上防止菌落蔓延，好形倒放可以在某種程度上防止菌落蔓延，好形成單個(gè)菌落，利于計(jì)數(shù)成單個(gè)菌落，利于計(jì)數(shù) 四四 防止外來(lái)的污染防止外來(lái)的污染 （1）連續(xù)劃線法）連續(xù)劃線法 此法多用于含菌量相對(duì)少，無(wú)菌部此法多用于含菌量相對(duì)少，無(wú)菌部位來(lái)源的如血液，胸腹水，腦脊液等標(biāo)本位來(lái)源的如血液，胸腹水，腦脊液等標(biāo)本的細(xì)菌分離培養(yǎng)。的細(xì)菌分離培養(yǎng)。（2）分區(qū)劃線法）分區(qū)劃線法（可分二區(qū)，三區(qū)和四區(qū)）（可分二區(qū)，三

5、區(qū)和四區(qū)） 此法多用于含菌量較多的糞便、膿此法多用于含菌量較多的糞便、膿汁等標(biāo)本的細(xì)菌的分離培養(yǎng)。汁等標(biāo)本的細(xì)菌的分離培養(yǎng)。 第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán) 第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線 滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)用于藥敏實(shí)驗(yàn)試管培養(yǎng)基接種法試管培養(yǎng)基接種法 瓊脂斜面接種法瓊脂斜面接種法 該法主要用于純種增菌及保存菌種，也可用該法主要用于純種增菌及保存菌種，也可用于某些生化鑒定試驗(yàn)如雙糖鐵培養(yǎng)基的接種。于某些生化鑒定試驗(yàn)如雙糖鐵培養(yǎng)基的接種。斜面斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基基接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌 勾取細(xì)菌勾取細(xì)菌 取棉塞取棉塞 接種接種 塞棉塞塞棉塞 接種環(huán)滅菌接種

6、環(huán)滅菌 標(biāo)記標(biāo)記 培養(yǎng)。培養(yǎng)。細(xì)菌分離培養(yǎng)細(xì)菌分離培養(yǎng) 選擇適合細(xì)菌生長(zhǎng)的條件和溫度選擇適合細(xì)菌生長(zhǎng)的條件和溫度革蘭氏染色法步驟革蘭氏染色法步驟一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染1）涂片干后加熱固定。）涂片干后加熱固定。 2）結(jié)晶紫染）結(jié)晶紫染30s，水洗，水洗3）加碘液約）加碘液約30s，水洗，水洗 4）加加95%酒精數(shù)滴，搖動(dòng)脫色，酒精數(shù)滴，搖動(dòng)脫色，30秒秒-1分鐘，至無(wú)紫色脫落為止，水洗分鐘，至無(wú)紫色脫落為止，水洗 5）加復(fù)紅染色染，染）加復(fù)紅染色染，染30秒后，水洗。秒后，水洗。干燥，鏡檢。干燥，鏡檢。+c鑒定思路鑒定思路乳糖- 觸酶觸酶+微球菌科微球菌科o

7、/fo/f試驗(yàn)氧化型試驗(yàn)氧化型微球菌屬微球菌屬h2o2h2o2+ 觸酶觸酶-鏈球菌科鏈球菌科血漿凝固酶血漿凝固酶-新生霉素敏感試驗(yàn)新生霉素敏感試驗(yàn)s表皮表皮葡萄球菌o/f試驗(yàn)發(fā)酵型葡萄球菌屬血漿凝固酶血漿凝固酶+金黃色金黃色葡萄球菌新生霉素敏感試驗(yàn)新生霉素敏感試驗(yàn)r腐生腐生葡萄球菌macmac生長(zhǎng)試驗(yàn)陽(yáng)性生長(zhǎng)試驗(yàn)陽(yáng)性腸鏈球菌屬腸鏈球菌屬靛基質(zhì)靛基質(zhì)- macmac生長(zhǎng)試驗(yàn)陰性生長(zhǎng)試驗(yàn)陰性溶血溶血optochinoptochins s為肺鏈為肺鏈r r為甲鏈為甲鏈溶血溶血桿菌肽桿菌肽s s為為a a群鏈群鏈campcamp試驗(yàn)試驗(yàn)+ +為為b b群鏈群鏈-b鑒定思路鑒定思路乳糖- ox+雙糖雙糖-非發(fā)酵菌科非發(fā)酵菌科鞭毛染色鞭毛染色- -為為黃桿菌屬莫拉黃桿菌屬莫拉菌屬菌屬h2o2h2o2+ ox 雙糖雙糖+腸桿菌科腸桿菌科端鞭毛為假單胞端鞭毛為假單胞一根鞭毛為綠膿一根鞭毛為綠膿周鞭毛為產(chǎn)堿桿菌周鞭毛為產(chǎn)堿桿菌動(dòng)力動(dòng)力-nit-nit-不動(dòng)桿菌不動(dòng)桿菌動(dòng)力動(dòng)力+nit+嗜麥牙單胞菌嗜麥牙單胞菌imvcimvc+ + - -+ + - -為大腸為大腸- + +- + +為產(chǎn)氣和肺克為產(chǎn)氣和肺克-+ - + - +為沙門為沙門d + - -d + - -為志賀為志賀pd葡萄糖酸鹽葡萄糖酸鹽ox-雙糖雙糖-非發(fā)酵菌科非發(fā)酵菌科ox+雙糖發(fā)酵型雙糖發(fā)酵型弧菌科弧菌科0/129r為