《血型鑒定方法》

1、1 ABO血型鑒定 不規(guī)則抗體篩選 n玻片法（正定型） n試管法（正定型,反 定型） n鹽水法 n聚凝胺法 n抗人球法 2 ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)原理 n抗原抗體反應(yīng)在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞 膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A 和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗 B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測(cè)知受試者紅 細(xì)胞膜上有無A或/和B抗原判斷血型 n抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋 形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見圖見圖 3 IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖 4 IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖 IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集

2、 5 試劑試劑 n抗A、抗B試劑血清 n5%的A型、B型及O型試劑紅細(xì)胞懸液 n受檢者血清 n5%的受檢者紅細(xì)胞懸液 (從指尖或耳垂取血一 滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻， 即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)注意先用75 酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì) 胞（約0.20.5 ml）用生理鹽水洗滌3次，然 后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。) 6 四 實(shí)驗(yàn)步驟.swf n 1. 玻片法 n（1） 取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端 用記號(hào)筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。 n（2） 用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清 上，注意勿使滴管與血清

3、相接觸。 n（3） 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分別用來混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn) 血清和紅細(xì)胞懸液 n（4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集 塊浮起。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時(shí)，則在低倍 顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。 n（5） 判斷血型 根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集， 判斷其血型。 7 2.試管法(正定型) n A B nA標(biāo)準(zhǔn)血清 2滴 nB標(biāo)準(zhǔn)血清 2滴 n受試者的紅細(xì)胞懸液 1滴 1滴 n混勻后1000rpm離心1min或3000rpm離心15秒。 。 n取出觀察結(jié)果。完全凝集的管底部有紅細(xì)胞的凝塊， 管底細(xì)胞邊緣呈花邊狀，

4、輕彈試管凝塊不散；完全不 凝的試管，血細(xì)胞均勻的沉到管底，邊緣整齊，用手 輕彈試管，紅細(xì)胞像一縷煙似的立即上升，隨即成為 均勻的懸液;輕微凝集的，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上鏡 檢后判定凝集程度。 8 試管法(反定型) n Ac Bc Oc n受檢者血清 2滴 2滴 2滴 n5%的A型紅細(xì)胞懸液 1滴 n5%的B型紅細(xì)胞懸液 1滴 n5%的O型紅細(xì)胞懸液 1滴 n立即以1000rpm離心1分鐘或3000rpm離心15秒。 n輕輕扣動(dòng)試管底部，觀察結(jié)果-同前 9 血型判定swf 正定型正定型反定型反定型 結(jié)果結(jié)果 抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC ORBC O型型RBCR

5、BC - -+ + - O + - + - A - + + - - B + +- - - AB 10 五 注意事項(xiàng) n玻片、試管都要標(biāo)記！玻片、試管都要標(biāo)記！， A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對(duì)不能相混,不 要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。工作中要形成自己的習(xí)慣！ n所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。 n紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，竹簽一端去混勻一 側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。 n一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)是否漏加血清。 n離心時(shí)間、速度嚴(yán)格要求，以防假陽 性或假陰性結(jié)果。 n試驗(yàn)用血清和試劑紅細(xì)胞都應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。 n要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時(shí)應(yīng) 注

6、意觀察凝集強(qiáng)度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄 觀察結(jié)果。 11 正反定型結(jié)果不一致的常 見原因有哪些？ n（）人為因素：試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效或污染； 操作中加錯(cuò)樣本或試劑、離心速度不足或過 度、細(xì)胞與血清比例不當(dāng)、結(jié)果判斷錯(cuò)誤等。 n（）客觀因素：因某些疾病導(dǎo)致抗原減弱 如：白血病，MDS（骨髓增生異常綜合征）患 者血型抗原減弱導(dǎo)致誤定血型。受檢者抗體 效價(jià)低（如嬰幼兒、老年人、大量輸液的患者， 血漿蛋白低下等）某些藥物干擾如輸注右旋 糖酐后會(huì)干擾血型檢定。 12 為什么這次試驗(yàn)沒有安排玻片法 的反定型？ n 因?yàn)榇嬖谟诓∪嘶颢I(xiàn)血者血清中的抗 及抗，個(gè)體差異很大，如果效價(jià)較 弱，在玻片上不足以凝集大量抗原陽性 的紅細(xì)胞，造成假陰牲的結(jié)果所以采用 玻片法作反定型的結(jié)果常不可靠玻片法作反定型的結(jié)果常不可靠。而用 試管離心法作反定型，則促進(jìn)抗原抗體 反應(yīng)，形成肉眼可見的凝塊，使結(jié)果更 為可靠 13 二 實(shí)驗(yàn)原理 n 血型就是紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。 在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩 種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。血 型鑒定是將受試者的紅細(xì)胞加入標(biāo)準(zhǔn)A型血清