乙肝五項操作規(guī)程

1、昆侖泌尿外科醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號；SZKL-MY-05版本/修訂號；1/0主題內(nèi)容乙肝五項檢測（乳膠法）操作規(guī)程生效日期：20150101頁碼：第1頁共4頁乙肝五項（乳膠法）操作規(guī)程1. 檢測目的乙型肝炎病毒標(biāo)志物（HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb檢測。2. 測定原理HBsAg檢測采用雙抗體夾心法原理，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的抗體。檢測時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒（即標(biāo)記物）結(jié)合的 HBsAb （即標(biāo) 記抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，乳膠抗體（標(biāo)記抗體）在 層析過程中先與標(biāo)本中的HBsAg結(jié)合

2、，隨后結(jié)合物會被固定在 T區(qū)膜上的HBsAb甫獲，形成 HBsAt標(biāo)記抗體-HBsAg-HBsAb復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則 T區(qū)沒有紅 杠。HBsAb檢測采用雙抗原夾心法原理，試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的HBsAg檢測時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的HBsAg反應(yīng)（即標(biāo)記抗原）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，乳膠抗原（標(biāo)記抗原）在層析過程 中先與標(biāo)本中的HBsAb結(jié)合，隨后結(jié)合物會被固定在 T區(qū)膜上的HBsAg捕獲，形成HBsAg標(biāo) 記抗原-HBsAb-HBsAg復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則 T區(qū)沒有紅杠。HB

3、eAg檢測采用雙抗體夾心法原理。試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的HBeAb檢測時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的乳膠顆粒結(jié)合的HBeAb反應(yīng)（即標(biāo)記抗體）反應(yīng)，該結(jié)合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，乳膠抗體（標(biāo)記抗體）在層析過程 中先與標(biāo)本中的HBeAg!吉合，隨后結(jié)合物會被固定在 T區(qū)膜上的HBeAb捕獲，形成HBeAb標(biāo) 記抗原-HBeAg-HBeAb復(fù)合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則 T區(qū)沒有紅杠。HBeAg、HBcAb采用競爭抑制法原理，試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（ T區(qū)）的抗體。 檢測時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，隨之標(biāo)本在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如標(biāo)本中含有相應(yīng)的

4、抗體， 則同膜上測試區(qū)（T）的單克隆抗體競爭，與預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。如標(biāo)本中沒有相應(yīng)的抗體，則預(yù)包被在乳膠顆粒上的相應(yīng)抗原與膜上測試區(qū) （T）的單克隆抗體全部結(jié)合。 陽性標(biāo)本，測試區(qū)（T）將沒有紅色條帶；陰性標(biāo)本，測試區(qū)（T）會出現(xiàn)明顯的紅色條帶。昆侖泌尿外科醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號；SZKL-MY-05版本/修訂號；1/0主題內(nèi)容乙肝五項檢測（乳膠法）操作規(guī)程生效日期：20150101 頁碼：第2頁共4頁3.標(biāo)本米集樣本采集后應(yīng)盡快分離血清或血漿以避免溶血。檢測進(jìn)應(yīng)盡量使用新鮮的樣本。樣本若 不能及時送檢，可在2-8 C冷藏3天。長期保存需冷凍于-20 C,忌反復(fù)凍

5、融。發(fā)臭、溶血等 異常樣本請勿使用。4. 試劑艾博生物醫(yī)藥有限公司5. 操作步驟5.1使用前將試劑板和血清/血漿標(biāo)本恢復(fù)至室溫（2030%）。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒（注意：在扣開鋁箔前應(yīng)先恢復(fù)至室溫），在1小時內(nèi)應(yīng)盡快地使用。5.2將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取血清/血漿標(biāo)本，逐滴垂直加入于試劑板 的五個加樣子L中（每孔2-3滴）。5.3加樣后立刻開始計時，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時讀取測試結(jié)果。在20分鐘后讀 取的結(jié)果無效。6. 結(jié)果判定由于前三個項目HBsAg、HBsAb HBeAg使用雙抗體（原）夾心法原理，后兩個項日HBeAb HbcAb使用競爭法原理。因此前一：個

6、項日與后兩個項目判讀方法是不同的，請注意區(qū)別。6.1. HBsAg、HBsAb HbeAg6.1.1陽性（+）:兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽性結(jié) 果表明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。6.1.2陰性（-）:質(zhì)控區(qū)（c）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測不出待測物質(zhì)。6.1.3無效：質(zhì)控區(qū)（c）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在 此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即 停止使用此批號產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。6.1.4注意：在進(jìn)行HBsAg HBsAb HbeA

7、g測試時，測試區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色 深淺 的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)昆侖泌尿外科醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號；SZKL-MY-05版本/修訂號；1/0主題內(nèi)容乙肝五項檢測（乳膠法）操作規(guī)程生效日期：20150101 頁碼：第3頁共4頁該判為陽性結(jié)果。6.2. HBeAb、HBcAb621陽性（+）:僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶.在測試區(qū)（T）內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果 表明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。6.2.2弱陽性（+）:質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。 陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。

8、6.2.3陰性（-）:兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果 表明：標(biāo)本中檢測不出待測物質(zhì)。6.2.4無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經(jīng)變質(zhì)損壞。在 此情況下，應(yīng)重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商 聯(lián)系。7. 質(zhì)量控制7.1請控制判讀時間，測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無效。7.2質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C區(qū)）一條紅色條帶的出現(xiàn)是試驗結(jié)果可靠的前提。質(zhì)控內(nèi) （C）所顯現(xiàn)的紅色條 帶是判定標(biāo)本是否足夠，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。8. 注意事項8.1乳膠法乙肝五項

9、檢測試劑板（血清/血漿）只是定性的篩選乙肝病毒血清標(biāo)志物的存在， 不能確定血樣中病毒的含量。8.2由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標(biāo)本中存在的干擾物質(zhì)，檢測結(jié)果 可能有錯誤。對可疑結(jié)果應(yīng)作相應(yīng)的進(jìn)一步檢測。8.生物安全防護8.1在檢測前，所有標(biāo)本均應(yīng)視為“陽性”標(biāo)本即生物危險品。8.2如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。8.3操作前一定要做好自身防護（穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套）昆侖泌尿外科醫(yī)院檢驗科 免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號；SZKL-MY-05版本/修訂號；1/0主題內(nèi)容乙肝五項檢測（乳膠法）操作規(guī)程生效日期：20150101頁碼：第4頁共4頁8.4 HBV

10、對低溫、干燥、紫外線、70%乙醇均有耐受性。煮沸100 C 10分鐘、高壓蒸汽滅菌121 T 15分鐘或加熱160C 2小時均可滅活HBV 510g/L次氯酸鈉30分鐘，1: 4000福爾 馬林37C 72小時，0.5 %過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。9. 臨床意義9.1 HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢者處于 HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多 乙肝檢驗對象體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。9.2 HBsAb陽性：多見于乙型肝炎處于恢復(fù)期或既往曾感染過HBV現(xiàn)在已恢復(fù)，而且對HBV有一定的免疫力；同時，HBsAb陽性是對接種乙肝疫苗后產(chǎn)生效果，即接種免

11、疫成功的指標(biāo)。9.3 HBeAg陽性：見于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細(xì)胞有進(jìn) 行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預(yù)測肝炎病情，HBeAg 持續(xù)陽性，易轉(zhuǎn)為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播病 毒給新生兒，其感染的陽性率為 70%90%。9.4 HBeAb陽性：多見于HBeAg轉(zhuǎn)陰的檢驗對象，意味著 HBV部分被清除或抑制，病毒復(fù)制 減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗對象可檢出HBeAb在HBsAgffi HBsAb 陰性時，如能檢出HBeAh和HBeAb,也能確診為乙型肝炎近期感染。9.5 HBeAb陽性：說明既往感染過乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈陽性,也是最晚轉(zhuǎn)陰性的一項，而且有些人一輩子都是陽性。附：HBcAb-IgG陽性：高滴度表示正在感染 HBV低滴度則是既往感染過 HBV的指標(biāo)，具有流行病學(xué)的意義。HB