第十四章維生素類藥物的分析AnalysisofVitamins

1、第十四章第十四章 維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析 analysis of vitaminsanalysis of vitaminspharmaceutical analysisv 維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需 的微量營養(yǎng)物質(zhì)。的微量營養(yǎng)物質(zhì)。v 脂溶性：脂溶性：vitavita、d d2 2、d d3 3、 e e、k k1 1 等等v 水溶性：水溶性：vitbvitb族族(b(b1 1、b b2 2、b b6 6、b b1212) )、vitcvitc、 葉酸、煙酸、煙酰胺葉酸、煙酸、煙酰胺ch3ch3ch2orch3ch3ch3r : -h

2、 r : -h 維生素維生素a a醇醇 -coch-coch3 3 維生素維生素a a醋酸酯醋酸酯 -coc-coc1515h h31 31 維生素維生素a a棕櫚酸酯棕櫚酸酯第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素a a一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)環(huán)己烯環(huán)己烯共軛多烯醇共軛多烯醇ch2ohvita2ch2vita3鯨醇鯨醇ch2ohch2ohch3脫水脫水去氫去氫二聚體二聚體酸酸醛醛環(huán)氧化物環(huán)氧化物、氧化劑、氧化劑紫外線、紫外線、vitavitavitaoo22 2、 不穩(wěn)定性：共軛多烯側(cè)鏈不穩(wěn)定性：共軛多烯側(cè)鏈易被氧化，易被氧化，或有金屬離子存或有金屬離子存在時(shí)氧化在時(shí)氧化環(huán)氧化物環(huán)氧化物och2ohv

3、itavita醛醛hocvitavita酸酸cooh紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色3sbclvitachclchcl3 33. 3. 與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)（鑒別、含量測定）與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)（鑒別、含量測定）4. 4. 溶解性：不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑和植物溶解性：不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑和植物 油等。油等。條件：無水、無醇條件：無水、無醇紫紫紅紅藍(lán)藍(lán)色色 3sbclvitachclchcl3 3二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)1. 1. 三氯化銻反應(yīng)三氯化銻反應(yīng)-rcoosbcl5+ch2藍(lán)色藍(lán)色+ch2-rcoosbc l5紫紅紫紅vitavitahcl去水去水無水乙醇無水乙醇maxmax326nm326

4、nm一個(gè)吸收峰一個(gè)吸收峰maxmax350350390nm390nm三個(gè)吸收峰三個(gè)吸收峰2 2、uvuv法（法（bp 2000bp 2000）去水去水vitavita（vitavita3 3）ch2ch3ch3ch2orch3ch3ch3vitavita三、含量測定三、含量測定1.1. uvuv法法: :三點(diǎn)校正法三點(diǎn)校正法（chpchp 2010 2010 第一法）第一法）2. 三氯化銻比色法三氯化銻比色法3. hplc法法（chpchp 2010 2010 第二法）第二法）1 1、為何要采用三點(diǎn)校正法？、為何要采用三點(diǎn)校正法？維生素維生素a a原料藥中?；煊须s質(zhì)，如維生素原料藥中常混有雜質(zhì)

5、，如維生素a a2 2、維生、維生素素a a3 3等，這些雜質(zhì)在維生素等，這些雜質(zhì)在維生素a a的最大吸收波長附近的最大吸收波長附近有吸收，采用三點(diǎn)校正法可以消除這些雜質(zhì)的干擾。有吸收，采用三點(diǎn)校正法可以消除這些雜質(zhì)的干擾。2 2、測定原理、測定原理1 1）在）在310310340nm340nm范圍內(nèi)，雜質(zhì)吸收呈一直線，范圍內(nèi)，雜質(zhì)吸收呈一直線，且隨波長的增大吸收度下降。且隨波長的增大吸收度下降。2 2）物質(zhì)對光吸收呈加和性。）物質(zhì)對光吸收呈加和性。三點(diǎn)校正法三點(diǎn)校正法328340316328 32176 aaa 4 4、測定方法、測定方法首先判斷用哪個(gè)吸收度首先判斷用哪個(gè)吸收度(a(a328

6、328 or a or a328(328(校正校正) )）進(jìn)行）進(jìn)行含量計(jì)算。含量計(jì)算。第一法：第一法：供試液濃度為供試液濃度為9 915iu/ml15iu/ml，溶劑為環(huán)己，溶劑為環(huán)己烷，在烷，在300300、316316、328328、340340、360nm360nm五個(gè)波長處測五個(gè)波長處測定吸收度。定吸收度。1 1）最大吸收波長在）最大吸收波長在326326329nm329nm之間，計(jì)算吸收之間，計(jì)算吸收度比值度比值a ai i /a/a328328，并與規(guī)定值相減，差值不超過，并與規(guī)定值相減，差值不超過0.020.02，則用，則用a a328328計(jì)算含量。計(jì)算含量。2 2）如果最大

7、吸收波長在）如果最大吸收波長在326326329nm329nm之間，之間，5 5個(gè)波個(gè)波長下的差值有一個(gè)或幾個(gè)超過長下的差值有一個(gè)或幾個(gè)超過0.020.02，這時(shí)先計(jì)，這時(shí)先計(jì)算算a a328328（校正）：（校正）：a a328328（校正校正）=3.52=3.52（2 a2 a328 328 - a- a316316 - a - a340340） a a328328（校正）（校正）- a- a328328-100%100% a a328328 再計(jì)算再計(jì)算若所得的數(shù)值在若所得的數(shù)值在3%3%，則仍用，則仍用a a328328計(jì)算含量；計(jì)算含量；若所得的數(shù)值在若所得的數(shù)值在-15%-15%-

8、3%-3%之間，則用之間，則用a a328328（校正）（校正）計(jì)計(jì)算含量；算含量；若所得的數(shù)值小于若所得的數(shù)值小于-15%-15%或大于或大于+3%+3%，或最大吸收波，或最大吸收波長不在長不在326326329nm329nm之間，則應(yīng)采用第二法測定。之間，則應(yīng)采用第二法測定。第一法步驟小結(jié)：第一法步驟小結(jié)：最大吸收波長是否在：最大吸收波長是否在326-329nm間間 符合符合- ，不符合，不符合第二法第二法： 測定指定波長吸收度測定指定波長吸收度 ：計(jì)算（：計(jì)算（a指定波長指定波長/a328）比值）比值,并與規(guī)定值比較并與規(guī)定值比較 符合符合- ，不符合，不符合： 計(jì)算校正吸收度，并與實(shí)測

9、值比較，判斷是否需要校正計(jì)算校正吸收度，并與實(shí)測值比較，判斷是否需要校正：計(jì)算：計(jì)算328nm處樣品的處樣品的e 1cm1% ：計(jì)算效價(jià)及標(biāo)示量的百分含量：計(jì)算效價(jià)及標(biāo)示量的百分含量維生素維生素a a醋酸酯的醋酸酯的換算：換算：iu/g = e 1cm1% 1900 iu/丸丸 標(biāo)示量標(biāo)示量% = 100% 標(biāo)示量標(biāo)示量第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法i/kohanm334325310300ml/iu159vitavitas處測處測、于于稀釋至稀釋至溶解溶解異丙醇異丙醇除去植物油的干擾除去植物油的干擾甘油和脂肪酸鹽甘油和脂肪酸鹽植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化

10、液揮干乙醚揮干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇 %100aaaf325325)(325 校校正正 334310325325260455528156a.a.a.a 校正校正5 5、討論、討論 1 1）維生素）維生素a a醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法推導(dǎo)而來：維生素式法推導(dǎo)而來：維生素a a醇的吸收度校正公式是用相似醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推導(dǎo)而來。三角形法推導(dǎo)而來。 2 2）在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收）在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長處測定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)進(jìn)行測波長處測定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)進(jìn)

11、行測定。如果儀器波長精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因定。如果儀器波長精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此，在測定前務(wù)必要校正波長，并可用全反式維生素此，在測定前務(wù)必要校正波長，并可用全反式維生素a a進(jìn)行測定，比較測定結(jié)果和比值是否與對照品相符合，進(jìn)行測定，比較測定結(jié)果和比值是否與對照品相符合，以進(jìn)一步核對儀器波長是否準(zhǔn)確。測定的樣品應(yīng)不得少以進(jìn)一步核對儀器波長是否準(zhǔn)確。測定的樣品應(yīng)不得少于兩份。于兩份。 3 3）中國藥典（）中國藥典（20102010年版）收載的維生素年版）收載的維生素a a軟膠囊采軟膠囊采用三點(diǎn)校正法測定。用三點(diǎn)校正法測定。 求本品中維生素求本品中維生素a a的的含量。含量。

12、a300 /a328 ：0.555a316/a328 ：0.907a328/a328 ：1.000a340/a328 ：0.811a360/a328 ：0.299 規(guī)定比值規(guī)定比值a300 /a328 ：0.564a316/a328 ：0.893a328/a328 ：1.000a340/a328 ：0.833a360/a328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 605052305610628025232523340316328328.aaa.a 校正校正=%)3%15(%7 . 3%100aaaf32

13、8328)(328 校正校正 %0 .99%1001000008262. 010020125022399. 01900605. 0%100)ml100/g(c1900a%328 標(biāo)示量標(biāo)示量平均丸重平均丸重標(biāo)示量標(biāo)示量校正校正藍(lán)藍(lán)色色 3sbclvitav 優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速v 缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定 （5 510s10s內(nèi)）內(nèi)） 水分干擾（反應(yīng)需要無水條件）水分干擾（反應(yīng)需要無水條件） 專屬性差（有關(guān)物質(zhì)的干擾）專屬性差（有關(guān)物質(zhì)的干擾） 三氯化銻有腐蝕性（注意安全）三氯化銻有腐蝕性（注意安全）max max 618nm618nm620nm620nm2 2、 三氯化銻

14、比色法三氯化銻比色法( (標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法) )第二節(jié)第二節(jié) 維生素維生素e e一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 名稱：名稱：消旋消旋生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯 母核：苯駢二氫吡喃衍生物母核：苯駢二氫吡喃衍生物 苯環(huán)上有一乙酰苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基的酚羥基 側(cè)鏈：脂肪烷烴側(cè)鏈：脂肪烷烴och3ch3ch3ch3ch3ch3ch3h3coch3co1458化學(xué)性質(zhì)：化學(xué)性質(zhì)：1 1、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水2 2、uv:284nm(uv:284nm(乙醇乙醇) ) 3 3、酯鍵易水解、酯鍵易水解4 4、對氧敏感，易氧化、對氧敏感，易氧化 oorohhvite醌醌型型化

15、化合合物物生生育育酚酚 ohno3vite生生育育紅紅生生育育酚酚橙紅色橙紅色二、鑒別二、鑒別1. 硝酸反應(yīng)（硝酸反應(yīng)（chp2010）取本品約取本品約30mg30mg，加無水乙醇，加無水乙醇10ml10ml溶解后，加硝溶解后，加硝酸酸2ml2ml，搖勻，在，搖勻，在7575加熱加熱1515分鐘，溶液應(yīng)顯橙分鐘，溶液應(yīng)顯橙紅色。紅色。ooch3c16h33h3cch3o生育紅（橙紅色）生育紅（橙紅色）ch3hooch3c16h33ch3h3c生育酚生育酚hno3強(qiáng)氧化劑強(qiáng)氧化劑紅紅色色生生育育醌醌對對生生育育酚酚聯(lián)聯(lián)吡吡啶啶 2fekohfevite3o2.2.三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)三氯化鐵聯(lián)吡啶

16、反應(yīng)+23fe3+2fennnn紅色紅色ooh3cch3ohch3c16h33ch3ch3hooch3c16h33ch3h3c生育酚生育酚對對-生育醌生育醌+3feo弱氧化劑弱氧化劑3. uv3. uv法法284nm254nm4. tlc4. tlc法法薄層板薄層板 硅膠硅膠g g展開劑展開劑 環(huán)己烷環(huán)己烷 - -乙醚（乙醚（4 4 ：1 1）顯色劑顯色劑 硫酸（硫酸（105 5105 5） vite rvite rf f = 0.7 = 0.7硫酸鈰滴定液（硫酸鈰滴定液（0.01mol/l0.01mol/l）指示劑：二苯胺（亮黃指示劑：二苯胺（亮黃灰紫）灰紫）生生育育醌醌對對生生育育酚酚 3

17、422cece 2. 2. 試劑試劑1. 1. 原理：利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰原理：利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰還原成硫酸亞鈰 取本品取本品0.10g0.10g，加無水乙醇，加無水乙醇5ml5ml溶解后，加二苯溶解后，加二苯胺試液胺試液1 1滴，用硫酸鈰液（滴，用硫酸鈰液（0.010.01mol/lmol/l）滴定，消耗）滴定，消耗硫酸鈰液（硫酸鈰液（0.010.01mol/lmol/l）不得過）不得過 1.0ml1.0ml。四、含量測定四、含量測定載氣載氣n n2 2固定液固定液硅酮（硅酮（ov-17ov-17）擔(dān)體擔(dān)體硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱

18、溫柱溫265265檢測器檢測器fidfid內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)正三十二烷正三十二烷色色譜譜條條件件適用性試驗(yàn)適用性試驗(yàn) n 500， r2樣品樣品 dldl生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相流動(dòng)相甲醇甲醇- -水（水（49 49 ：1 1）檢測波長檢測波長292nm292nm r r2.62.6 rsd0.8% rsd0.8%色色譜譜條條件件利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性二苯胺（亮黃二苯胺（亮黃灰紫）灰紫）生生育育醌醌對對生生育育酚酚溶溶解解）（無無水水乙乙醇醇 socesohvite3 3、鈰量法、鈰量法nsch3ch2ch2ohnnh3cnh2ch2+cl

19、cl- - hclhcl第四節(jié)第四節(jié) 維生素維生素b b1 1一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 ooh3. 3. 硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng)4. 4. 堿性：嘧啶環(huán)堿性：嘧啶環(huán) 伯氨，噻唑環(huán)伯氨，噻唑環(huán) 季銨季銨v 可與酸成鹽可與酸成鹽v 與生物堿與生物堿v 含量測定含量測定 非水堿量法非水堿量法1. 1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2. uv:246nm(2. uv:246nm(鹽酸液鹽酸液) )熒熒光光消消失失藍(lán)藍(lán)色色熒熒光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（環(huán)環(huán)合合 hcnfekohnaohvitb6321o oh1. 1. 硫

20、色素反應(yīng)（維生素硫色素反應(yīng)（維生素b1b1專屬反應(yīng)）專屬反應(yīng)）二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) 4242hgihbhgik 淡淡黃黃 2kiiihib2 紅紅色色h+白白色色硅硅鎢鎢酸酸 h+ oh4wo12ohsiob23222 2. 2. 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 h+3 3、硝酸鉛反應(yīng)、硝酸鉛反應(yīng)4 4、氯化物反應(yīng)、氯化物反應(yīng)三、含量測定三、含量測定1. 1. 非水溶液滴定法（非水溶液滴定法（chp2010chp2010） hcloclobhclohclclbachg）（喹那啶紅亞甲藍(lán)喹那啶紅亞甲藍(lán)（紫紅（紫紅天藍(lán)）天藍(lán)）加入醋酸汞的目的加入醋酸汞的目的消除氫鹵酸鹽對非水滴消

21、除氫鹵酸鹽對非水滴定的干擾。定的干擾。2. uv2. uv法法246nm3. 3. 硫色素?zé)晒夥蛏責(zé)晒夥蔁晒夤饬蛄蛏厮禺惍惗《〈即艰F鐵氰氰化化鉀鉀 vitbnaoh自學(xué)自學(xué)-維生素維生素d:d:1.1.了解雜質(zhì)檢查中麥角甾醇的檢查；了解雜質(zhì)檢查中麥角甾醇的檢查；2. 2. 初步掌握正相高效液相色譜法的應(yīng)用。初步掌握正相高效液相色譜法的應(yīng)用。654321oohhoo c ohhch2ohl l抗壞血酸抗壞血酸第五節(jié)第五節(jié) 維生素維生素c c一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1. 1. 強(qiáng)還原性強(qiáng)還原性：烯二醇結(jié)構(gòu)：烯二醇結(jié)構(gòu)顯顯色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚類類脫脫水水 h藍(lán)藍(lán)色色糠糠

22、醛醛吡吡咯咯脫脫水水 hvitc502. 2. 結(jié)構(gòu)與糖類相似，具糖的性質(zhì)結(jié)構(gòu)與糖類相似，具糖的性質(zhì)- - 糖類的顯色反應(yīng)糖類的顯色反應(yīng)3. uv3. uv特征特征(243nm)(243nm)4. 4. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。oohhoo c ohhch2oh1234565.5.酸性：一元酸酸性：一元酸c3oh，pka = 4.17c2oh，pka = 11.57單鈉鹽單鈉鹽32cona酮酮酸酸鹽鹽水水解解 naoh6. 6. 水解反應(yīng)：水解反應(yīng)：與堿反應(yīng)與堿反應(yīng)去去氫氫抗抗壞壞血血酸酸ovitc二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)1. 1. 與氧化劑的反應(yīng)與氧化

23、劑的反應(yīng)（銀鏡）（銀鏡）黑黑 agagnovitc1) 1) 與與agnoagno3 3反應(yīng)反應(yīng)(chp2010)(chp2010)2)2)與與2 2，6 - 6 - 二氯靛酚反應(yīng)二氯靛酚反應(yīng)(chp2010)(chp2010)無無色色二二氯氯靛靛酚酚， vitc62氧化型氧化型玫瑰紅色玫瑰紅色 h藍(lán)色藍(lán)色 ohohoh（還原型）（還原型）紅紅堿堿性性酒酒石石酸酸銅銅 ocuvitc3) 3) 與堿性酒石酸銅反應(yīng)（與堿性酒石酸銅反應(yīng)（uspusp）4) 4) 與與kmnokmno4 4反應(yīng)反應(yīng) mnkmnovitc2. 2. 糖類的反應(yīng)糖類的反應(yīng)ocho糠醛：糠醛：3. uv3. uv0.01mol/l hcl液中，max243nm iivitch去氫抗壞血酸去氫抗壞血酸2v 指示劑：淀粉指示液指示劑：淀粉指示液三、含量測定三、含量測定1. 1. 碘量法（碘量法（chp2010）原理原理 取本品約取本品約0.2g0.2g，精密稱定，加新沸過，精密稱定，加新沸過的冷水的冷水100ml100ml與稀醋酸與稀醋酸10ml10ml使溶解，加淀粉使溶解，加淀粉指示液指