綜合項(xiàng)目開發(fā)一不同蔬菜水果中基本營(yíng)養(yǎng)成分分析

1、綜合項(xiàng)目一 不同蔬菜水果中基本營(yíng)養(yǎng)成分分析實(shí)驗(yàn)一 總糖含量的測(cè)定（ 3,5- 二硝基水楊酸法）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握總糖的測(cè)定原理。2、學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法。、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、2mol/L 氫氧化鈉溶液：稱取 4g 氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定 容至 50mL 。2、3,5-二硝基水楊酸試劑：稱取 0.325g 3,5- 二硝基水楊酸溶于 15mL 熱 蒸餾水中，溶解后移入 50ml 容量瓶中，加入 2mol/L 氫氧化鈉溶液 16.25mL ， 再加入 2.25ml 丙三醇，搖勻，冷卻后定容至 50mL 。3、2mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液： 稱取 0.04g 葡萄糖，加少量

2、的蒸餾水溶解后，定容至20mL。4、6mol/L鹽酸：取25mL濃鹽酸用蒸餾水稀釋至50mL。5、6mol/L氫氧化鈉：稱取12g氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取6支試管，按下表加入2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和蒸餾水：AvV 口呂號(hào)2mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL蒸餾水/mL葡萄糖濃度mg/mLOD 540101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102在上述試管中分別加入3,5-二硝基水楊酸試劑2mL，搖勻后于沸水浴中加 入2min進(jìn)行顯色，取出后用流動(dòng)水迅速冷卻，各加入蒸餾水 9mL，

3、搖勻，在 540nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL ）為橫坐標(biāo)，光吸收值為 縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程。2、總糖的提取稱取1g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬），充分研磨后，放在錐形瓶中，加入6mol/L 鹽酸10mL，蒸餾水15mL，在沸水浴中加熱30min。水解完畢后，冷卻至室溫 后，加入8mL 6mol/L氫氧化鈉，最終用蒸餾水定容至50mL ,此為總糖水解液, 用于總糖測(cè)定。3、總糖含量的測(cè)定取4支試管，按下表加入不同溶液：AvV 口呂號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mLOD 5401102201230124012加完試劑后，搖勻后于沸水浴中加入

4、2min進(jìn)行顯色，取出后用流動(dòng)水迅速 冷卻，各加入蒸餾水9mL，搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。測(cè)定后，取 樣品的光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的糖含量( mg/mL )。4、計(jì)算總糖的百分含量總糖=(CXV / m X1000 )稀釋倍數(shù)X0.9 X100%式中,C為總糖提取液的濃度 mg/mL ; V為總糖提取液的總體積 mL ; m為 樣品質(zhì)量g五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制(1) 光吸收值測(cè)得結(jié)果AvV 口呂號(hào)2mg/mL 葡萄蒸餾水/mL葡萄糖濃度OD 540糖標(biāo)準(zhǔn)溶液/mLmg/mL101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21

5、.66102(2) 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖:(3) 回歸方程為：2、樣品總糖含量的測(cè)定(1) 材料總糖含量的測(cè)定AvV 口呂號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mL0D 5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為 請(qǐng)說明具體計(jì)算過程：從而得出樣品總糖的百分含量為 說明具體計(jì)算過程：(2) 材料總糖含量的測(cè)定AvV 口呂號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mL0D 5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為請(qǐng)說明具體計(jì)算過程:從而得出樣品總糖的

6、百分含量為 說明具體計(jì)算過程：(3) 材料總糖含量的測(cè)定AvV 口呂號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mL0D 5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為 請(qǐng)說明具 體計(jì)算過程:從而得出樣品 總_ 糖的百分含量為算過程：請(qǐng)_ 說明具體計(jì)3、對(duì)比分析不同樣品總糖含量實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定（考馬斯亮藍(lán)法）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本原理與方法。2、了解考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的優(yōu)缺點(diǎn)。、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、0.15mol/L氯化鈉溶液：稱取0.2633g氯化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，

7、定容至30mL o2、0.1mg/mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液：(1) 母液：稱取0.01g牛血清白蛋白溶于10mL 0.15mol/L 氯化鈉溶液中， 配成濃度為1mg/mL的溶液。(2) 標(biāo)準(zhǔn)液：取母液1mL，用0.15mol/L 氯化鈉溶液定容至10mL，配成 0.1mg/mL的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。3、考馬斯亮藍(lán)G-250試劑：稱取0.005g考馬斯亮藍(lán)G-250溶于2.5mL95%乙醇，加蒸餾水40mL，加5mL 85%磷酸，最后加蒸餾水定容至 50mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取6支試管，按下表加入各種試劑。試劑加完后混勻，室溫靜置3min，以1號(hào)管為空白調(diào)零，在595nm處測(cè)定

8、其吸光值。以蛋白質(zhì)含量(mg/mL )為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程。試劑/mLAvV 口呂號(hào)1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L 氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán)G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ug/mL ）0204060801000D 5952、總蛋白的提取稱取1g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬），加5mL蒸餾水研磨，過濾后將濾液用蒸 餾水定容至10mL。3、總蛋白測(cè)定取3支試管，分別 力卩O.ImL未知濃 度的蛋白質(zhì) 樣品液，力卩0.9mL 0.15mol/L氯化鈉溶液，

9、再加入5mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，搖勻，室溫靜置 3min，以1號(hào)管為空白管調(diào)零，在595nm處測(cè)其吸光值。測(cè)定后，取樣品的 光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白濃度（ug/mL ）。4、蛋白質(zhì)含量（mg/g ）蛋白質(zhì)含量（mg/g ） = （CXVt） / （1OOO xVsXWf）式中，C為蛋白質(zhì)提取液的濃度ug/mL ; Vt為提取液總體積mL ; Vs為測(cè) 定時(shí)加樣量mL ； Wf為樣品鮮重g。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（1）光吸收值測(cè)得結(jié)果試劑/mLAvV 口呂號(hào)1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/

10、L 氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán)G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度(ug/mL )0204060801000D 595(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖:(3)回歸方程為：2、樣品蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(1)樣品的光吸收值分別為、，其平均值為。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為 請(qǐng)說明具體計(jì)算過程：從而得出樣品 蛋白質(zhì)的含量為 _請(qǐng)說明具體計(jì)算過程:（ 2 ）樣品的_ 光吸收值分別為、_ 、_，_ 其平均值為 。_根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為 。_請(qǐng)說明具體計(jì)算過程：從而得出樣品 蛋_白質(zhì)的含量為 。_請(qǐng)_ 說明具體計(jì)算過程：（ 3 ）樣品的_ 光吸收值分別為、_ 、_

11、，_ 其平均值為 。_根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為 。_請(qǐng)說明具體計(jì)算過程：從而得出樣品 蛋_白質(zhì)的含量為 。_請(qǐng)_ 說明具體計(jì)算 過程：3、對(duì)比分析不同樣品蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)三 維生素 C 含量的測(cè)定（ 2,6- 二氯酚靛酚滴定法）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握 2,6-二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素 C 的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中維生素 C 的含量情況。、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、2% 草酸：稱取 1g 草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL 。2、1% 草酸：稱取 0.5g 草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL3、0.1mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液：稱取 0.0025

12、g 抗壞血酸溶于少量 1% 草 酸溶液中，最終加1%草酸定容至25mL。用棕色試劑瓶保存于4 C。最好臨用 前配制。4、0.05% 2,6- 二氯酚靛酚溶液：稱取 0.025g 2,6- 二氯酚靛酚溶于 15mL 含有 0.0052g 碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后加水定容至 50mL 。濾去不溶物，用 棕色試劑瓶保存于4 C。約可保存1周。四、實(shí)驗(yàn)步驟1 、樣品的制備稱取 10g 實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬） ，加入 5-10mL 2%草酸，研磨成漿狀， 過濾后，將濾液定容至 25mL 。2、標(biāo)準(zhǔn)液滴定準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液 1mL 置于 50mL 錐形瓶中，加 9mL 1% 草酸， 以 0.05%

13、2,6- 二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色， 并保持 15s 不褪色， 即達(dá)到終點(diǎn)； 取 10mL 1% 草酸作空白對(duì)照，按以上方法滴定。記錄所用染料溶液的體積（ m L ）， 計(jì)算出 1mL 染料溶液所能氧化抗壞血酸的量（ mg ）。3、樣品滴定準(zhǔn)備吸取樣品濾液 2 份，每份為 10mL ，分別放入 2 個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，另取 10mL 1%草酸作空白對(duì)照滴定； 按上面的操作滴定并記錄所用染料溶液的體積 （mL）。4、維生素 C 含量的計(jì)算取2份樣品滴定所用染料體積平均值， 代入下列公式中計(jì)算 100g 樣品還原 型抗壞血酸含量。維生素 C 含量(mg/100g 樣品)=(Va-Vb)xCXTX100/

14、 ( D XW)式中，VA為滴定樣品所好用的染料的平均用量 mL ; VB為滴定空白對(duì)照所 用的染料的平均用量 mL ； C為樣品提取液的總體積 mL ； D為滴定時(shí)所取的樣 品提取液體積mL ； T為1mL染料能氧化抗壞血酸質(zhì)量 mg (由操作2計(jì)算出)； W 為待測(cè)樣品的質(zhì)量 g。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液滴定時(shí)，所用染料溶液的體積為 ，_ 從而計(jì)算出1mL 染料溶液所能氧化抗壞血酸的量為 。_2、樣品維生素C含量的測(cè)定( 1)樣品 滴_定時(shí)所用染料溶液的體積分別為 和。其平均用量為。則樣品維生素C含量為 請(qǐng)說明具體計(jì)算過程。( 2)樣品 滴_定時(shí)所用染料溶液的體積分別為 和。其平

15、均用量為。則樣品維生素C含量為 請(qǐng)說明具體計(jì)算過程。( 3)樣品 滴_定時(shí)所用染料溶液的體積分別為 和。其平均用量為。則樣品維生素C含量為 請(qǐng)說明具體計(jì)算過程。3、對(duì)比分析不同樣品維生素 C 含量實(shí)驗(yàn)四 纖維素含量的測(cè)定（比色法）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握比色法測(cè)定纖維素的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中纖維素的含量情況。、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、60% 硫酸：量取 30mL 濃硫酸，緩慢倒入 15mL 蒸餾水中，最終加水定 容至 50mL 。2、濃硫酸3、2% 蒽酮試劑：將 1g 蒽酮溶解于 50mL 乙酸乙酯中，存放在棕色試劑瓶4、100ug/mL 纖維素標(biāo)準(zhǔn)液：(1) 母液：稱取25mg纖

16、維素，放入燒杯中，將燒杯放入冰浴中，然后加 冷的60%硫酸15-17mL，在冷的條件下消化處理20-30min ，用60%硫酸定容 至 25mL o(2) 吸取母液5mL放入另一個(gè)容量瓶中，將容量瓶放入冰浴中，加蒸餾水定容至50mL o四、實(shí)驗(yàn)步驟1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取6支試管，按下表加入不同試劑:試劑/mLAvV 口呂號(hào)123456100ug/ mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量ug/ mL020406080100OD 620將各管搖勻后，向每管加入0.5mL 2%蒽酮，再沿管壁加入5mL濃硫酸， 緩慢搖勻后，靜置1min。然后在62

17、0nm下，測(cè)得不同含量纖維素溶液的吸光 值。以測(cè)得的吸光值為丫值，以對(duì)應(yīng)的纖維素含量為x值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得 出回歸方程。2、樣品纖維素含量的測(cè)定(1) 稱取ig實(shí)驗(yàn)材料(如新鮮果蔬)置于燒杯中，將燒杯置于冷水浴中， 加入60%硫酸15mL，并消化30min，然后將消化好的纖維素溶液轉(zhuǎn)入 25mL容量瓶中，并用60%硫酸定容至25mL。然后用布氏漏斗過濾于另一個(gè)燒杯中(2) 取上述溶液2mL于試管中，加入0.5mL 2%蒽酮試劑，并沿管壁加 5mL濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置12min，然后在620nm波長(zhǎng)下測(cè)定光吸收值。3、纖維素百分含量纖維素百分含量=(XX10-6 xa / W )X100%式中，X為按按回歸方程計(jì)算出的纖維素含量 ug ; W為樣品重量g ; 10-6 為微克換算成克的系數(shù)；a為樣品稀釋倍數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制(1)光吸收值測(cè)得結(jié)果試劑/mLAvV 口呂號(hào)123456100ug/ mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量ug/ m