淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定

1、淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定方法流式細(xì)胞儀（BeckmanCoulter，貝克曼庫爾特）原理：雙/三色/四色直接免疫熒光法。熒光素標(biāo)記的各種單克隆抗體加入到全血中， 與白細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合，經(jīng)過溶血、洗滌（和固定）等步驟后，在流式 細(xì)胞儀上進(jìn)行分析，從而得到淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)，加入Flow-Count即可得出絕對(duì)計(jì)數(shù)。淋巴細(xì)胞表面抗原分布如下：T淋巴細(xì)胞：CD3+ B淋巴細(xì)胞：CD3-, CDI9+;輔助性T淋巴細(xì)胞：CD3+CD4+抑制性T淋巴細(xì)胞：CD3+CD8+ NK細(xì)胞：CD3-CDI6+56等。根據(jù)淋巴細(xì)胞膜上 CD分子表達(dá)的不同，流式細(xì)胞 儀可以分辨出淋巴細(xì)胞及其各種不同的亞群，利用計(jì)算

2、機(jī)軟件計(jì)算出淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)，加入 Flow-Count 組會(huì)自動(dòng)得出絕對(duì)計(jì)數(shù)。標(biāo)本采集與處理受檢者的準(zhǔn)備檢查對(duì)象生活飲食處于日常狀態(tài)。采集部位靜脈采血抗凝劑 EDTA或肝素抗凝血要求 1 .樣本量1ml。2 .樣本應(yīng)在采集后6小時(shí)內(nèi)處理，冷凍或溶血的標(biāo)本不能用。3 樣本白細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)在 4.0-10.0 X 109/L之間。若10.0 X 109/L， 樣本需要稀釋，用PBS稀釋；若4.0 X 109/L，應(yīng)分離單個(gè)核 細(xì)胞試劑品牌劑型 規(guī)格 貯存貝克曼庫爾特成分1 :單克隆抗體液體 2 8C（CD45/4/8/3No.6607013 CD45/56/19/3No.6607073CD4/8

3、/3NO.IM1650 同型對(duì)照 lgG1/lgG1/lgG1 NO.IM1672CD3/19NO.IM1293 CD3/16+56 No.IM2076CD19-PC5No.IM2643Flow-Count 熒光微球 No.7547053）2:全血溶血試劑（Q-Prep）液體（No.7546946）A:甲酸液體70ML室溫B:碳酸鈉等液體32ML室溫C:多聚甲醛液體14ML室溫(Optilyse C No.IM1401)液體室溫3鞘液(No.8546859)液體20L室溫4清洗液(No.8546930)液體5L室溫5熒光微球(No.6605359)液體10ML 2-8C (Flow-Check

4、)儀器Beckma nCoulter EPICS XL/FC500/Altra樣本制備：1）按照要求，分別向已編好號(hào)的試管中加入10/20 ul單克隆抗體和同型對(duì)照2）分別向試管中加入混勻的100u1抗凝血。3）混勻，避光，室溫孵育20-30分鐘4）溶血：a. OptiLyse C（按說明書步驟溶血）b. 使用COULTERPREP制備系統(tǒng)開機(jī)-顯示READYT亮-選擇35SEC燈亮-開門-放入試管 關(guān)門-自動(dòng)進(jìn)行溶血-顯示READY丁亮-開門-取出試管 -再進(jìn)行下一個(gè)樣品測(cè)定。（*溶血前確認(rèn)A/B/C管路充滿并能打出液體）5）上機(jī)測(cè)樣（可根據(jù)樣本情況選擇洗或不洗上樣）6）需要做絕對(duì)計(jì)數(shù)的指標(biāo)

5、，在相應(yīng)管中加入與血樣等量的 Flow-Count（務(wù)必做 到三同：同槍，同人，同種方法加 Flow-Count，而且加完即上機(jī)）報(bào)告結(jié)果報(bào)告百分?jǐn)?shù)（和絕對(duì)值）操作性能精密度 批內(nèi)五次重復(fù)CV%參考值（百分?jǐn)?shù)（絕對(duì)值）CD3+ 60.8-75.4%（1141-1880） CD4+ 29.4-45.8%（478-1072）CD8+ 18.2-32.8%（393-742）NK 9.5-23.5% （175-567）Th/Ts 1.05-2.03臨床意義1.T、B淋巴細(xì)胞亞群是重要的免疫狀態(tài)檢測(cè)指標(biāo)，在腫瘤、免疫缺陷、病毒感染，自身免疫性疾病、創(chuàng)傷、急性感染、多臟器功能衰竭、器官移植等具 有臨床診斷

6、、病情判斷、治療等價(jià)值。臨床常用Th/ Ts比值來判斷病人的免疫狀況。Th/Ts比值升高：表示免疫功能亢進(jìn)：見于自身免疫性疾病，如SLE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性溶血性貧血、重癥肌無力以及HBsAg乙肝等。Th/Ts比值減低：表示免疫功能下降：艾滋病、病毒感染、腫瘤病人、慢活肝 和活動(dòng)性肝硬化、再生障礙性貧血、粒細(xì)胞減少患者。2： NK細(xì)胞主要破壞各種腫瘤細(xì)胞和感染某些病毒、細(xì)菌的細(xì)胞，所以在抗腫瘤和防御疾病中起主要作用。NK活性減低主要見于各種惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、應(yīng)用免疫抑制劑，疲勞綜合征病人等，NK活性隨年齡增長(zhǎng)而減退。NK細(xì)胞也參與第二型超敏反應(yīng)和移植物抗宿反應(yīng)，白介素

7、-2治療后；外周血NK細(xì)胞增加。方案（Protocol）1選參數(shù)rfe Edt vw Dwert Tod? RS? AtbIww rtAGE CytmrtBr Mhdw 閥p金G 口爭(zhēng)1 IJ liR申占創(chuàng)3 ft1畔刃些0mIDOhvwiIIeCytcmijta 榻dtp 皿F鋌侍tiMp w FRi omc 噠卜扛毗旳 ftMTZtrfo*曲 ArcracVEdY.pl MKF3cE35ettin -：F3cE3RI QFI|5hl： DW1Z *ilu?Ffc Edt Ttw rwsft Tods R旳 JkH曲 FpwP*Z 匚Yt3Y宙terFet點(diǎn)擊5:胡血區(qū)皿lOOMflfcfi

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