衛(wèi)生化學實驗總結(jié)-預防醫(yī)學

1、ICP發(fā)射光譜測頭發(fā)樣品中的元素【試劑和儀器】中性洗發(fā)液、丙酮、無水乙醇、混合酸、去離子水，鈣鐵鋅標準品。100ml燒杯2只，10ml比色管1個，玻璃棒，剪刀，電子天平，烘箱，濾紙。日本島津公司ICPS-7000型電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀，高純氬氣，通風裝置，循環(huán)水系統(tǒng)，容量瓶，移液管?！緦嶒灢襟E】1、消化處理 采樣：后枕部頭發(fā)距頭皮13cm（為了反映近期金屬元素蓄積的情況）樣品量約為0.05g。洗滌：中性洗發(fā)液洗滌蒸餾水洗凈（約3-5遍）去離子水洗至無泡沫淋干后放在丙酮中浸泡2min（去除有機污染物） 無水乙醇中浸泡1min 濾干110干燥箱中干燥0.5h 消化：精稱取樣品0.025g

2、左右混合酸5ml（10min）電爐上徐徐加熱（120左右）溶液由棕褐色變至淡黃色，加大火，200左右趕酸（小于1ml為宜）。若為較深的黃色，則繼續(xù)加數(shù)滴混合酸（完全冷卻后）電爐上加熱直至殘渣為白色時消化完成。注：混合酸是為了增加氧化性（硝酸：高氯酸=4:1，適用于含鈣較高的材料）；所有試劑為優(yōu)級純 稀釋：1%HNO3溶解后去離子水少量多次（至少3次）將樣品轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中定容，搖勻。貼簽備用（注：吸取硝酸和攪拌的吸管用兩根，避免損失及污染）2、儀器基本操作方法（1）打開主機電源，預熱3h以上。（2）打開循環(huán)水裝置，接通氬氣，打開通風罩。（3）打開電腦，進入ICPS操作系統(tǒng)，首先觀察儀器狀

3、態(tài)是否正常，點燃距焰，（此時毛細管不能空吸）吸入空白溶液，進行波長校正（通常使用O/C/Ar）。S50,應重復校正一次。（4）然后建立新文件（make new card命名定性or定量設一些參數(shù),如測量次數(shù)，為3次，最后取平均值選要測的元素選波長設置測量條件，采用人工方法進樣，將樣品提升時間設為0設置標準系列樣品濃度），根據(jù)測量需要設定條件。（5）測定標準系列和樣品。（6）測定結(jié)束后，應先關(guān)閉氬氣閥門，待距焰熄滅后，再關(guān)閉電源。3、 標準曲線的繪制（1） 首先用濃度最高的混合標準溶液測定ATT值（告訴儀器最高濃度是多少，測完之后用純水洗一下），然后依次測定不同濃度混合標準溶液中各元素的發(fā)射強度

4、，測量結(jié)束后，儀器自動繪出標準曲線。4、 發(fā)樣的測定 用與標準系列同樣方法測定光強度，然后從標準曲線上查出發(fā)樣中各元素含量。若某種元素濃度超過最高濃度限值，要進行稀釋?！窘Y(jié)果及公式】以c為橫坐標，原子發(fā)射譜線強度（）為縱坐標，根據(jù)樣品中各元素的從標曲中得到其濃度cx【注意事項】器皿等玻璃器材不要隨意放置，以免污染。進樣：樣品毛細管霧化器霧化霧化室進一步霧化炬管光學系統(tǒng)請預覽后下載！紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)的含量【實驗原理】 蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中的酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收波長為280nm左右。在一定實驗條件下，蛋白質(zhì)溶液的吸光度與其濃度符合Lambert

5、Beer定律，據(jù)此可對蛋白質(zhì)進行定量分析。結(jié)構(gòu)：光源單色器吸收池檢測器顯示系統(tǒng)注：此次試驗用紫外光，所以選用石英比色杯。Q或者S表示石英的意思，放置時字母要朝同一個方向。比色杯為成對的，不能混用?！緦嶒灢襟E】1.吸收光譜曲線的繪制：以生理鹽水作參比，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標，從200400nm掃描任一牛血清白蛋白標準液的吸收曲線并找出最大吸收波長（max）。2.標準曲線的繪制： 移取5.00mg/ml牛血清白蛋白標準應用液0.00、0.50、1.00、1.50和2.00ml，分別置于10ml比色管中，用生理鹽水稀釋至刻度，搖勻。以生理鹽水作參比，在max波長下測定吸光度，以溶液濃度為橫坐

6、標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。 3.未知蛋白質(zhì)溶液的測定：準確移取血清樣本0.1ml，置于10ml比色管中，定容至刻度。以生理鹽水作參比，在max波長下測定吸光度?！緦嶒灲Y(jié)果】Cx=C稀釋倍數(shù)其中Cx為待測蛋白質(zhì)溶液的質(zhì)量濃度；C為由標準曲線確定的被測溶液蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度【注意事項】1.由于蛋白質(zhì)的紫外吸收峰常因溶液pH的改變而改變，測定時未知溶液與標準溶液的pH要一致。2.紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)的準確度較差，其主要原因為不同蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸的含量不同，使得不同蛋白質(zhì)溶液在280nm的吸光系數(shù)也不同。樣品中若含有核酸，可分別測定在280nm和260nm的吸光度值，用經(jīng)驗校正公式計算

7、蛋白質(zhì)的濃度。蛋白質(zhì)濃度=1.45A280 0.74A260 (mg/mL)【儀器電腦操作】儀器連接自檢光譜掃描（設置200400nm高速掃描）方法設置（選擇max，多點，固定波長，改單位）進行測定（輸入號碼和濃度，記錄吸光度值）請預覽后下載！熒光分析法測定尿中核黃素（VB2）含量【實驗原理】 核黃素（VB2）在一定波長的光波照射下發(fā)熒光。在PH67的溶液中熒光最強，在其他條件恒定時，熒光強度F與VB2濃度C成正比，即F=KC；當PH11時熒光消失。尿中共存物質(zhì)干擾VB2的測定，需要將尿液通過硅鎂吸附柱，使其中VB2被硅鎂吸附柱吸附，再用洗脫液洗脫，測定洗脫液中VB2的熒光強度。采用標準曲線法

8、進行測量。光源（氙弧燈200800nm；高壓汞燈鹵鎢燈一般用于熒光計）分光系統(tǒng)（兩個單色器，第一單色器在光柵和樣品池之間用于選擇發(fā)射波長；第二單色器位于樣品池和檢測器之間與激發(fā)光源成90以消除透過光影響，選擇熒光波長）樣品池檢測器顯示系統(tǒng)注：比色皿四面光滑【實驗步驟】1、 裝柱 脫脂棉塞住吸附柱下端硅鎂吸附劑與蒸餾水混合裝柱（約占柱長的2/3左右）用雙蒸水測試流速，控制流速在6080滴/分，柱內(nèi)應無氣泡。2、 標準曲線的的繪制 標準液配制（0.5mg/L）：取25mg/L的標儲液1ml于50ml棕色容量瓶，定容混勻。（1） 吸附：取VB2標準應用液0.00,0.50,1.00,1.50,2.0

9、0,2.50ml，分別過柱，用1520ml熱水（6070）淋洗柱子（去除共存雜質(zhì)）。（2） 洗脫：將10ml比色管接在柱子下方，每個吸附柱中加入5ml洗脫液（洗脫VB2），待流盡后再用不足5ml的蒸餾水淋洗柱子，流出液一并盛入比色管中，雙蒸水定容至10ml?；靹?，避光保存。（3） 測定：取任意標準管溶液，固定熒光波長535nm，在350500nm的波長范圍內(nèi)，測定不同激發(fā)光波長下的熒光強度，以激發(fā)光的波長為橫坐標，熒光強度為縱坐標，繪制激發(fā)光譜，選擇激發(fā)光波長（ex）。固定激發(fā)波長ex，在450600nm的波長范圍內(nèi)，測定不同熒光波長下的熒光強度，以熒光波長為橫坐標，熒光強度為縱坐標，繪制熒光

10、光譜，選擇熒光光波長（em）。在固定ex和em的條件下，分別測定不同濃度標準溶液洗脫液中VB2的熒光強度，以VB2的濃度C為橫坐標，相對熒光強度為縱坐標，揮之標準曲線。注：洗脫液（丙酮：冰醋酸：超純水=5:2:9）3、 測定樣品 取尿樣5ml，通過吸附柱進行吸附（VB2和雜質(zhì)都會被吸附，熱水將雜質(zhì)洗脫，VB2易溶于有機溶劑，被保留在吸附柱上）、洗脫（洗脫液洗脫VB2）和熒光測定?！倦娔X操作】打開熒光光度計電源預熱30min打開操作軟件采集模式選光譜模式ex(激發(fā)波長為橫坐標，熒光強度為縱坐標)em（以熒光波長為橫坐標，熒光強度為縱坐標）改為定量模式輸入ex，em測定【實驗結(jié)果及處理】公式：尿中

11、VB2含量（mg/L）=樣品管中VB2濃度10取尿量 【注意事項】1、 操作應在避光下進行。2、 裝住時要與水混裝，以免柱內(nèi)形成氣泡和空隙。3、 測定前用洗脫液通過硅鎂吸附柱，檢查是否有熒光物質(zhì)，有則用丙酮清洗烘干待用請預覽后下載！石墨爐原子吸收法測定樣品中鉛的含量【實驗原理】樣品用基體改進劑稀釋后直接注入石墨管中，通過程序升溫將樣品灰化及原子化。在=283.3nm條件下測定鉛基態(tài)原子蒸汽的吸光度，在一定實驗條件下，其吸光度與溶液中鉛的濃度呈正比，即A=Kc，據(jù)此進行定量分析。組成：鉛元素燈共振線石墨爐中原子分光系統(tǒng) 水循環(huán)系統(tǒng)防止石墨管氧化，高純氬氣保護石墨管原子化過程：干燥、灰化、原子化、

12、凈化【實驗步驟】1、 血清樣品處理 用微量移液管吸取血清100g置于1.5ml的塑料離心管中，加入0.9ml的純水（稀釋10倍），在漩渦混合器上充分震搖均勻。2、 儀器工作條件 =283.3nm，燈電流為13mA，狹縫寬度為0.4nm，氘燈背景矯正，氬氣流量0.6L/min。石墨爐工作條件使用儀器推薦條件（因本次試驗不使用基體改進劑，灰化溫度應改為550）。進樣體積20l，讀數(shù)方式為峰面積。3、 工作曲線的繪制 將100g/ml的鉛儲備液逐級稀釋1000倍至100g/L的鉛標準溶液放入自動進樣器，用稀釋液稀釋（機器自動稀釋）到10、20、30、40g/L，以稀釋液為標準空白，依次進樣測定，得到

13、工作曲線。4、 樣品測定 按儀器測定條件測定血清樣品和試劑空白?！緦嶒灲Y(jié)果】【注意事項】1、 鉛標準應用液的配制應采用逐級稀釋法，以減小誤差。（1ml10ml1ml10ml1ml10ml）2、 鉛是高溫下易揮發(fā)元素，在不使用基體改進劑時，灰化溫度不能超過600。【儀器操作】1、開機預熱光源開關(guān)打開接通氬氣打開電腦系統(tǒng)（xxx32xxA？）將元素燈點亮（預熱15min30min）背景校正（看AA，BG值是否正常）建立方法（new method）設置（settings）測量次數(shù)、溫度自動采樣量、設置采樣位置標準系列（方程選擇回歸線性過零點，看單位，設置標準系列稀釋濃度及儲備液位置）2、設置樣品信息

14、設置樣品位置、樣品身份（血清）、體積3、看看燈的穩(wěn)定性（預熱時間不夠，壽命等影響穩(wěn)定性）4、石墨爐設置手動校準自動進樣器自動檢查清潔石墨爐5、檢測稀釋劑的純水放在1號位鉛的標準品2號血清樣品3號請預覽后下載！電化學實驗實驗一 溶出伏安法測定水中鉛含量【實驗原理】當在工作電極上加上一定電位進行預電解時，待測樣品中的鉛還原富集在電極上并與電極上的汞生成汞齊，然后施加反向掃描電壓，此時汞齊中的鉛便氧化溶出，其氧化電流與待測樣品中的鉛濃度成正比，因此可作定量分析?！緦嶒灢襟E】1.打開LK2006A型電化學分析系統(tǒng)，選擇“線性掃描溶出伏安法”，設置鍍汞實驗。參數(shù):靈敏度10A/ V ；起始電位 0.00

15、0 V；濾波參數(shù)10 Hz ；電沉積電位 -1.000 V；放大倍率1 ；掃描速度100 mV/ s；平衡時間10 s；電沉積時間30 s電位增量1 mV；終止點位 0.00V2.將玻璃電極作工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑電極作對極，連接到LK2006A型電化學系統(tǒng)，并確認電化學主機與微機系統(tǒng)的連接正常。3.取30.0ml鍍汞液與50ml燒杯中，插入三電極系統(tǒng)，接鍍汞實驗參數(shù)設定，鍍汞，檢查汞膜完好，即可測定樣品，記錄峰電流值h1 。4.取30ml 待測樣品于燒杯中。選擇“方波溶出伏安法”，設定樣品測定的實驗條件參數(shù):靈敏度10A/ V ；起始電位 - 0.100 V ； 方波周期40

16、 ms濾波參數(shù)10 Hz ； 電沉積電位 - 1.000 V ；方波幅度20 mV放大倍率1 ； 電位增量4 mV ；平衡時間10 s；電沉積時間30 s終止電位0.00V5.在待測樣品中加入5ml鉛標準溶液按上述步驟進行測定，記下峰電流值h2?！窘Y(jié)果計算】根據(jù)公式：Cx=h1CsVs/h2（Vx+Vs）-h1Vx5、 討論本次實驗過程中出現(xiàn)了一個錯誤： 待測液和鉛標準溶液的加樣順序搞混了，即在30ml的鉛標準溶液中加入了5ml的待測溶液，故我們的實驗結(jié)果可能存在誤差。實驗二酸度計測水溶液PH【實驗原理】酸度計主要是由參比電極（銀-氯化銀電極）、測量電極（玻璃電極）和精密電位計三部分組成。銀-

17、氯化銀電極由金屬銀、氯化銀和飽和氯化鉀溶液組成，電極電位不隨溶液的PH變化而變化，在一定溫度下和濃度下是一個定值。在25時為0.2V。玻璃電極：電極電位會隨溶液的PH變化而變化。主要部分頭部的玻璃球泡，是由特殊的敏感玻璃膜構(gòu)成。玻璃膜對氫離子敏感，浸入被測溶液時，被測溶液的氫離子與電極玻璃球泡表面水化層進行離子交換，玻璃球泡內(nèi)層也同樣產(chǎn)生電極電勢。由于內(nèi)層氫離子濃度不變，外層氫離子濃度變化，因此內(nèi)外層的電勢差在變化，所以該電極電勢隨待測液的PH值不同而改變。請預覽后下載！離子選擇性電極電位與待測離子呈能斯特響應。K值包括內(nèi)參比電極電位和難于測量和計算的液接電位，因此要用已知PH的標準緩沖液（與

18、被測溶液PH接近）進行校正，減小由液接電位和不對稱電位帶來的誤差?！咀⒁馐马棥?. 使用前浸泡于蒸餾水或緩沖溶液中活化玻璃膜表面2. 玻璃電極的使用范圍：pH =193. 避免碰碎或擦傷玻璃膜4不能測含 F- 的溶液和具有脫水性的溶液5復合pH電極需浸泡在KCl溶液中6電極浸入溶液需足夠的平衡穩(wěn)定時間7間隔中用蒸餾水浸泡，以穩(wěn)定其不對稱電位，用已知pH值的標準緩沖溶液進行定位校正可消除不對稱電位的影響 8、讀取PH時，還要讀取溫度！離子選擇性電極電位有兩部分組成，一個是內(nèi)參比電極電位，一個是膜電位。當玻璃膜與待測溶液接觸之后，就會由于玻璃膜相和待測溶液相的氫離子濃度的不同進行離子交換，經(jīng)過一段

19、時間達到平衡，就產(chǎn)生了兩個相間電位，其差值就是膜電位。電極電位與待測溶液中氫離子離子呈能斯特響應。實驗三電導率的測定【實驗原理】電解質(zhì)具有導電能力，并遵循歐姆定律在一定條件下，一定濃度的電解質(zhì)溶液的電阻與電極間的距離成正比，與電極截面積成反比電導是衡量電解質(zhì)溶液導電能力的物理量，是電阻的倒數(shù) （其中k為電導率：兩電極板為1，距離1m的平行電極板之間電解質(zhì)溶液的電導）與電解質(zhì)溶液的濃度有關(guān)?！咀⒁馐马棥?、 電導率儀要預熱30min才能進行電導率的測定。2、 測定前用純水清洗電導電極。請預覽后下載！高效液相色譜法（HPLC）測定飲料中山梨酸和苯甲酸【實驗方法與原理】苯甲酸和山梨酸廣泛用于食品防腐

20、劑，能夠引起人的再生障礙性貧血，粒狀白細胞缺乏等。因此國家嚴格限制其使用量。在本實驗中，樣品首先經(jīng)過超聲和加熱除去二氧化碳和乙醇，然后過濾注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相C18液相色譜柱分離后，紫外檢測器230 nm波長處檢測。以色譜峰的保留時間定性，色譜峰面積在一定范圍內(nèi)與濃度呈線性關(guān)系進行定量分析。 【實驗步驟】1、 樣品處理 碳酸飲料（雪碧）：吸取10 ml碳酸溶液超聲5 min（脫氣），然后用微孔濾膜（0.22 m）過濾，濾液備用。吸取100 l濾液于離心管中，并加入900 l超純水（稀釋了10倍），混合均勻標記為樣品。 2、 配制標準溶液 （1） 取一定量的苯甲酸儲備液，經(jīng)濾膜過濾于離心管

21、中。吸取濾液50 l于另一離心管并加入950 l超純水，得到50 g/ml的苯甲酸標準品，做好標記。 （2） 同理得到50 g/ml的山梨酸標準品，做好標記。 （3） 混合標準品配制：分別吸取500 l過濾后的苯甲酸和山梨酸儲備液于離心管中混合均勻，得到500 g/ml的混合標準品。吸取50 l混合標準品（500 g/ml）于離心管中并加入950 l超純水，得到25 g/ml的混合樣，標記為混標。 3、 色譜條件： 色譜柱：C18反相鍵合色譜柱 流動相：甲醇-0.02 mol/L醋酸銨溶液（5 : 95） 流速：1 ml/min 檢測波長：230 nm 進樣量10 l 4、 標準品和樣品測定

22、（1） 分別進苯甲酸（50 g/ml）、山梨酸（50 g/ml）標準品，確定保留時間。 （2） 記錄混合標準品（25 g/ml）的峰面積并按下式計算樣品中苯甲酸和山梨酸含量： （3）測樣品中的待測物質(zhì)，根據(jù)保留時間確定苯甲酸，山梨酸的峰面積。計算方法：Cx=FCsAxAs式中：Cx為樣品中被測物的含量（g/ml）；Cs為苯甲酸或山梨酸標準品的含量（g/ml）。F為稀釋倍數(shù)；Ax樣品的峰面積；As標準品的峰面積。 【儀器操作】 平衡柱子標準樣測試（樣品名、進樣模式-標準樣、方法-建立好的方法、位置-樣品放置的位置、進樣量、時間）inject進樣【注意事項】1、如果被測溶液含有氣泡，對測定和儀器的

23、使用均有影響，因此需要將被測溶液超聲加熱除去二氧化碳。 同時試驗中所用的所有試劑均需脫氣處理。2 、苯甲酸的靈敏波長為230 nm，山梨酸的靈敏波長為254 nm，在此波長測定時苯甲酸的靈敏度較低。因此波長選擇230 nm。 3、平衡前用甲醇：水（5:95）沖洗柱子15 min，再用甲醇-0.02 mol/L醋酸銨溶液（5:95）進行平衡。 4、開機順序：高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、柱溫箱、檢測器、電腦軟件。 5 、使用鹽做流動相的時候：水：甲醇=95: 5沖洗柱子20 min以上；然后用甲醇沖洗色譜柱20 min以上，保存色譜柱。 6 、關(guān)機：清洗結(jié)束后，點擊并將泵流量輸入為0，等壓力降為0時，關(guān)掉泵電源，退出Breeze工作站，再關(guān)閉儀器各部分電源及計算機。 請預覽后下載！GC-MS（氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用儀）法測定N-亞硝胺類化合物【實驗原理】 利用色譜對混合物的高分離能力和質(zhì)譜對化合物的而準確鑒定能力，可以對N-亞硝胺類化合物進行定性定量分析。氣相色譜的流動相為惰性氣體，氣固色譜法中以表面積大且具有一