中藥復(fù)方對急性輻射小鼠睪丸損傷的藥學(xué)防護(hù)效應(yīng)研究

1、中藥復(fù)方對急性輻射小鼠睪丸損傷的藥學(xué)防護(hù)效應(yīng)研究前 言1988年，世界衛(wèi)生組織（WHO）人類生殖研究特別規(guī)劃署首次提出了生殖健康;概念，即人類及其個(gè)體在整個(gè)生命過程中與生殖相關(guān)的機(jī)體的結(jié)構(gòu)、功能和行為過程中的生理、心理和社會(huì)的完滿和諧的健康狀態(tài)。男性雙側(cè)睪丸需要每天生產(chǎn)上億個(gè)健康精子和具有正常的性功能才能完成繁衍生命的使命，但是，諸多文獻(xiàn)報(bào)道，最近幾十年男性精液質(zhì)量呈逐年下降趨勢，同時(shí)不育癥發(fā)生率日趨增加，男性面對的生育形勢十分嚴(yán)峻。睪丸是產(chǎn)生生精細(xì)胞、分泌雄激素的重要器官，也是輻射高度敏感組織，超過一定劑量的射線輻射可致睪丸的生精細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞等損傷，進(jìn)而引發(fā)生精功能障礙及不育等問

2、題。因此，從人類男性生殖健康的重大需求出發(fā)，尋求既能有效地預(yù)防男性系統(tǒng)輻射損害、又無毒副作用的物質(zhì)是人類生殖健康發(fā)展的迫切需要。在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的寶庫中，中醫(yī)藥擁有豐富的研究資源，中藥則有整體調(diào)節(jié)、療效確切、毒副作用小等優(yōu)勢。故研制一種療效可靠、安全無毒的抗輻射損傷的防護(hù)中藥，是保障臨床上放療患者生命安全的迫切之需。中醫(yī)藥作為我國醫(yī)學(xué)中的瑰寶，研究證明已有大量中藥具有治療男性不育的確切作用。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)源自臨床的中藥復(fù)方，可以在一定程度上防護(hù)小鼠睪丸輻射損傷。本實(shí)驗(yàn)醫(yī)藥學(xué)與放射醫(yī)學(xué)相結(jié)合，應(yīng)用于輻射所致的雄性生殖系統(tǒng)損傷的防護(hù)作用，研究具有良好應(yīng)用基礎(chǔ)的中藥復(fù)方的防護(hù)效應(yīng)，其順利開展可

3、為本病患者提供安全可靠的抗生殖系統(tǒng)輻射的健康促進(jìn)措施。同時(shí)，因?yàn)楝F(xiàn)在核能和核技術(shù)廣泛應(yīng)用于能源、醫(yī)療、食品加工等方面，與人們?nèi)粘Ｉ钕⑾⑾嚓P(guān)，可能受到放射線損傷的人群日益擴(kuò)大，因此，輻射所引起的雄性生殖系統(tǒng)損傷研究的順利開展，無疑也具有重要價(jià)值。.第一部分 理論研究從腎精虧虛;探討急性輻射致睪丸損傷的中醫(yī)病因病機(jī)18 世紀(jì)末 19 世紀(jì)初，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了放射性元素的電離特性，開始應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷等方面，但短時(shí)間內(nèi)人體受照射劑量超過 1Gy 即可導(dǎo)致急性輻射損傷1，其中作為急性輻射敏感系統(tǒng)之一的生殖系統(tǒng)，它的損傷直接導(dǎo)致了睪丸生精功能遭到破壞，進(jìn)而引起男性不育的人群增多。而在我國古代，人們可能極少接

4、觸到電離輻射，也從未曾有機(jī)會(huì)深入了解和認(rèn)識急性輻射致雄性生殖系統(tǒng)的損傷情況。因此，中醫(yī)古籍中無相關(guān)記載。近幾十年來，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究中，我國中草藥在輻射致雄性生殖系統(tǒng)損傷的防治過程中作用較為突出，如黃精、巴戟天等諸多中藥對睪丸輻射損傷的防治效果均較為顯著2、3，但由于人們對急性輻射致睪丸損傷的中醫(yī)病因病機(jī)尚未形成統(tǒng)一、明確和系統(tǒng)的認(rèn)識，尤其是在臨床實(shí)驗(yàn)中的中醫(yī)證候分類不明確4，臨床研究的實(shí)驗(yàn)療效結(jié)果報(bào)告資料相對于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究較少，進(jìn)而影響了中醫(yī)藥在輻射致睪丸損傷防治領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展。本課題組前期根據(jù)急性輻射損傷的發(fā)病、病程、轉(zhuǎn)歸等特點(diǎn)認(rèn)為：電離輻射是一種毒邪，因其與傳統(tǒng)熱毒、火毒、溫毒、光毒等

5、不同，故將其名為電離毒;5，并已從毒邪的角度探討了電離輻射所導(dǎo)致的急性輻射損傷的致病特點(diǎn)進(jìn)行了概述6，即：射線為陽邪，可直中臟腑；射線易傷津耗氣；射線易入絡(luò)動(dòng)血；射線易致瘡癰。睪丸，又稱外腎;，正如類證治裁2卷之首7所述：睪丸者，腎之外候也;，亦由腎主，和附睪、前列腺等均屬于精室的一部分，也是精室中最重要的組成部分，它具有化生和貯藏精液的功能。因此，當(dāng)急性輻射致睪丸損傷發(fā)生時(shí)，射線傷腎、精室受損，睪丸生精功能損傷的危害尤其不可小覷，故理論研究將從中醫(yī)腎精虧虛;證型的臨床表現(xiàn)入手，對急性輻射致睪丸損傷的病因病機(jī)進(jìn)行初步探討。1.腎主生殖;的生理作用中醫(yī)對男子不育的認(rèn)識已有 2000 多年的歷史。

6、早在周易中就已有了不育;之病名8，黃帝內(nèi)經(jīng)中首次提出了以腎;為軸心的生殖系統(tǒng)基本理論，認(rèn)為腎藏精，主生殖;是腎臟的重要生理功能，其中藏;的含義是貯存、封藏之意, 而腎精的含意則主要是指生殖之精;, 此外還包括水谷之精;9。正如素問2六節(jié)臟象篇10云：腎主驚蟄,封藏之本,精之處也;；素問2上古天真論：腎者主水，受五臟六腑之精而藏之，;即論證了男性自身產(chǎn)生的生殖之精貯藏在腎臟, 施精致孕則直接由腎臟所藏生殖之精而成，同時(shí)對五臟六腑所藏水谷之精也具有閉藏作用，水谷之精是促進(jìn)人體生長發(fā)育、維持人體生命活動(dòng)的物質(zhì)。生殖之精;和水谷之精;同藏于腎, 統(tǒng)稱腎精;11。因此，腎精的充盛直接關(guān)系到人整個(gè)生命的生

7、、長、壯、老、已;全過程，它可以促進(jìn)生長、發(fā)育和生殖，其生理功能的發(fā)揮均以腎藏精為基礎(chǔ)，其中腎主生長、發(fā)育和生殖，均是腎藏精的生理效應(yīng)。腎精，無論男女老少，人人皆有，只是多少而已，而對于成年男女而言，則意味其生育功能的強(qiáng)弱或有無。因此，腎精對于男性來講，為生命之源泉，是繁衍生息的物質(zhì)基礎(chǔ)。.1.1 腎為封藏之本，主藏精腎精不僅能促進(jìn)人體的生長發(fā)育,同時(shí)也是人類生育繁殖的根本,腎精的盛衰常是決定生殖能力有無的關(guān)鍵。黃帝內(nèi)經(jīng)2上古天真論12：丈夫八歲腎氣實(shí)，發(fā)長齒更；二八腎氣盛，天癸至，精氣溢瀉，陰陽和，故能有子八八天癸竭，精少，腎藏衰，形體皆極，則齒發(fā)去，而無子耳;，這段原文通過年齡的遞增闡述了

8、腎精;從盛到衰的規(guī)律以及對男性生育功能的影響13。男子從童稚開始，腎精逐漸長養(yǎng)，到了二八;之年，腎精充實(shí),人體就會(huì)產(chǎn)生促使性功能成熟的天癸物質(zhì),使任通沖盛，聚精液于精室，于是天癸按時(shí)來潮，從而具有生殖能力。男子至八八;之后，腎氣漸衰，天癸竭絕，精液閉止，男子也就喪失了生育能力14。1.2 腎藏精，精是生殖所需的原始物質(zhì)腎精和生殖之精既有區(qū)別又有聯(lián)系：腎精是產(chǎn)生生殖之精的物質(zhì)基礎(chǔ)，生殖之精是腎精的濃縮與升華；腎精存在于生命的全過程，生殖之精則只存在于育齡階段15。生殖之精;男女皆有，是人類繁衍后代的物質(zhì)基礎(chǔ)，正如靈樞2決氣所言：兩神相搏，合而成形，常先身生，是謂精;，當(dāng)腎中精氣充盛、天癸按時(shí)而至

9、，生殖之精能夠順利地排泄，標(biāo)志著生命體具有生殖需求和繁衍新生命體的強(qiáng)大能力：男女媾精，陰陽調(diào)和，胎孕方成，故能繁衍后代，對子代生殖能力而言是先天之精，來源于父母的生殖之精，是構(gòu)成胚胎發(fā)育的原始物質(zhì)，它藏之于腎，其產(chǎn)生必須以腎精充盈為先決條件, 腎氣實(shí)和腎氣盛為天癸發(fā)揮作用的重要因素。所謂天癸至;、天癸竭;是以腎氣盛、衰為前提的16：腎氣盛了,精液溢泄，則生殖功能強(qiáng)盛；腎氣衰了,性功能亦隨之減弱或衰退，精液分泌量減少，則生殖功能減弱。可見生殖之精是人類生殖和繁衍后代的物質(zhì)基礎(chǔ)，先天之精是新的生命個(gè)體的本原17。.實(shí)驗(yàn)二 中藥復(fù)方對急性輻射小鼠精子損傷的防護(hù)效果研究.511. .512.實(shí)驗(yàn)方法.

10、513.實(shí)驗(yàn)結(jié)果.524.討論.625.小結(jié).65實(shí)驗(yàn)三 中藥復(fù)方對急性輻射小鼠睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)的防護(hù)作用.671. .672.實(shí)驗(yàn)方法.673.實(shí)驗(yàn)結(jié)果.684.討論.755.小結(jié).76實(shí)驗(yàn)四 中藥復(fù)方對急性輻射小鼠雄激素水平的防護(hù)效果研究.781.材料.782.實(shí)驗(yàn)方法.783.實(shí)驗(yàn)結(jié)果.794.討論.845.小結(jié).864.討論雄性生殖功能主要體現(xiàn)在精液質(zhì)量（精子數(shù)量、精子活動(dòng)率、精子密度和精子運(yùn)動(dòng)速度等）和雄激素分泌水平這兩方面1。其中雄激素在雄性個(gè)體生長發(fā)育和生殖功能的各方面都有非常重要的作用，睪酮和雌二醇是雄性動(dòng)物體內(nèi)最主要的雄激素和雌激素，雌、雄激素在體內(nèi)維持相對動(dòng)態(tài)的平衡2。睪酮是雄

11、激素水平中最為典型的代表，由男性的睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌，腎上腺亦分泌少量，它對雄性機(jī)體生殖功能起著重要作用，如促進(jìn)精子的生成和發(fā)育、刺激雄性外生殖器官及內(nèi)生殖器官發(fā)育成熟、維持雄性第二性征等3。雄性小鼠體內(nèi)的雌二醇也是調(diào)控雄性生殖系統(tǒng)內(nèi)分泌的重要因素4，它可以刺激雄性小鼠睪丸中生精干細(xì)胞的增殖，具有抑制生精細(xì)胞凋亡、促進(jìn)精子生成和維持動(dòng)態(tài)生殖功能平衡的作用5。本實(shí)驗(yàn)在照后 1 天，模型組雌、雄激素水平均呈現(xiàn)不降反升的趨勢，分別高出空白組 92.3%和 20.86%，各給藥組雌、雄激素在照后四個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)也均為最高水平，這可能是由于急性輻射早期小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)合成和分泌雄激素水平的能力呈現(xiàn)應(yīng)激性地升

12、高，進(jìn)而刺激了照射各組小鼠的精液質(zhì)量各參數(shù)（精子數(shù)量、精子活動(dòng)率、精子密度和精子運(yùn)動(dòng)速度）在照后 1 天也均不降反升，從而影響了雄性小鼠體內(nèi)精液質(zhì)量各參數(shù)也均呈現(xiàn)一過性上升的趨勢6，本次實(shí)驗(yàn)扣合了實(shí)驗(yàn)二的結(jié)果。.結(jié) 語本課題從腎精虧虛;的角度，初步探討了急性輻射致睪丸損傷的中醫(yī)病因，根據(jù)中醫(yī)補(bǔ)腎益精;的理論，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評價(jià)中藥復(fù)方對急性輻射致睪丸損傷的預(yù)防作用。證明了中藥復(fù)方對急性輻射致睪丸損傷的預(yù)防效果，初步探究了中藥復(fù)方對睪丸輻射損傷的防護(hù)作用，進(jìn)一步豐富了急性輻射致睪丸損傷的中醫(yī)理論研究。理論研究：腎精對于成年男性來講，為生命之源泉，是繁衍生息的物質(zhì)基礎(chǔ)，急性輻射致睪丸損傷的發(fā)病及防治中均與腎精虧虛密切相關(guān)：腎為封藏之本，主