第三章紫外可見分光光度法ppt課件

1、學(xué)習(xí)目的學(xué)習(xí)目的經(jīng)過本章學(xué)習(xí)，為后續(xù)藥物分析、中藥分析課經(jīng)過本章學(xué)習(xí)，為后續(xù)藥物分析、中藥分析課程中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測程中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定的學(xué)習(xí)奠定根底。定的學(xué)習(xí)奠定根底。學(xué)習(xí)要點(diǎn)學(xué)習(xí)要點(diǎn) 紫外紫外- -可見分光光度法的根本原理；可見分光光度法的根本原理；電子躍遷類型，吸收帶的類型、特點(diǎn)及影響要電子躍遷類型，吸收帶的類型、特點(diǎn)及影響要素；素；Lambert-BeerLambert-Beer定律；定律；紫外紫外- -可見分光光光度計(jì)的根本構(gòu)造；可見分光光光度計(jì)的根本構(gòu)造；定性定量方法。定性定量方法。目 錄第一節(jié)第一節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法的根本原理

2、可見分光光度法的根本原理第二節(jié)第二節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì)第三節(jié)第三節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法分析條件的選擇可見分光光度法分析條件的選擇第四節(jié)第四節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法的運(yùn)用可見分光光度法的運(yùn)用紫 外紫 外 - 可 見 分 光 光 度 法可 見 分 光 光 度 法 ( u l t r a v i o l e t - v i s i b l e spectrophotometry，UV-Vis)是基于分子中價(jià)電子躍遷是基于分子中價(jià)電子躍遷所產(chǎn)生的吸收光譜而進(jìn)展分析的方法，又稱紫外所產(chǎn)生的吸收光譜而進(jìn)展分析的方法，又稱紫外-可見吸收光可見吸收光譜法。譜法。該法

3、波長范圍普通在該法波長范圍普通在190800nm。特點(diǎn)：特點(diǎn)：靈敏度較高，普通為靈敏度較高，普通為10-7 10-4g/ml；準(zhǔn)確度較好，相對誤差普通在準(zhǔn)確度較好，相對誤差普通在0.5%，精度高的可達(dá)，精度高的可達(dá)0.2%；儀器設(shè)備簡單，操作方便，分析速度較快。儀器設(shè)備簡單，操作方便，分析速度較快。概述概述一、紫外一、紫外- -可見吸收光譜可見吸收光譜一電子躍遷的類型一電子躍遷的類型1、 * 躍遷躍遷2、 * 躍遷躍遷3、 n * 躍遷躍遷4、 n * 躍遷躍遷5、電荷遷移躍遷、電荷遷移躍遷6、配位場躍遷、配位場躍遷第一節(jié)第一節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法的根本原理可見分光光度法的根本原理電

4、子躍遷所需能量及所處波段表示圖電子躍遷所需能量及所處波段表示圖*n* * n*5、電荷遷移躍遷、電荷遷移躍遷用電磁輻射照射化合物時(shí)，電子從給與體向接受體相聯(lián)絡(luò)的用電磁輻射照射化合物時(shí)，電子從給與體向接受體相聯(lián)絡(luò)的軌道上躍遷稱為電荷遷移躍遷。軌道上躍遷稱為電荷遷移躍遷。某些取代芳烴分子同時(shí)具有電子給與體和電子接受體兩部分，某些取代芳烴分子同時(shí)具有電子給與體和電子接受體兩部分，可以產(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移吸收光譜?？梢援a(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移吸收光譜。某些過渡金屬離子與含生色團(tuán)的試劑反響所產(chǎn)生的配合物，某些過渡金屬離子與含生色團(tuán)的試劑反響所產(chǎn)生的配合物，以及許多無機(jī)物離子均可產(chǎn)生電荷遷移躍遷。以及許多無機(jī)物離子均可產(chǎn)生電

5、荷遷移躍遷。此類吸收帶較寬，吸收強(qiáng)度大，普通此類吸收帶較寬，吸收強(qiáng)度大，普通max 104。一電子躍遷的類型6、配位場躍遷、配位場躍遷第第4、5周期過渡金屬水合離子或過渡金屬離子與顯色劑所構(gòu)周期過渡金屬水合離子或過渡金屬離子與顯色劑所構(gòu)成的配合物在電磁輻射作用下，吸收適當(dāng)波長的紫外光或可成的配合物在電磁輻射作用下，吸收適當(dāng)波長的紫外光或可見光，從而獲得相應(yīng)的吸收光譜。見光，從而獲得相應(yīng)的吸收光譜。配位場躍遷吸收強(qiáng)度較弱，普通配位場躍遷吸收強(qiáng)度較弱，普通max 102。如如Ti(H2O)63+水合離子的配位場躍遷吸收帶水合離子的配位場躍遷吸收帶max為為490nm。大多數(shù)鑭系和錒系元素離子的大多

6、數(shù)鑭系和錒系元素離子的4f或或5f電子可發(fā)生電子可發(fā)生ff*躍遷躍遷配位場躍遷，因此在紫外配位場躍遷，因此在紫外-可見光區(qū)都有吸收?？梢姽鈪^(qū)都有吸收。一電子躍遷的類型躍遷躍遷類型類型出現(xiàn)波段出現(xiàn)波段 吸收吸收強(qiáng)度強(qiáng)度化合物化合物構(gòu)造構(gòu)造特點(diǎn)特點(diǎn)* 200nm 弱弱 單鍵單鍵CCCH飽和烴類，對紫外無奉獻(xiàn)，但可作飽和烴類，對紫外無奉獻(xiàn)，但可作溶劑溶劑*200nm強(qiáng)強(qiáng)不飽和鍵不飽和鍵CCCC有共軛雙鍵存在時(shí)，有共軛雙鍵存在時(shí)，* 躍遷所躍遷所需能量降低，波長紅移需能量降低，波長紅移n*250 500nm弱弱COCN等等必需是雜原子直接連在雙鍵上必需是雜原子直接連在雙鍵上n*200nm弱弱COHCN

7、H2 CSCX含有未共用電子對的基團(tuán)銜接在含有未共用電子對的基團(tuán)銜接在鍵上鍵上雜原子極性雜原子極性，紅移紅移雜原子數(shù)目雜原子數(shù)目，紅移紅移電子躍遷類型及特點(diǎn)電子躍遷類型及特點(diǎn)1、吸收光譜吸收曲線、吸收光譜吸收曲線2、生色團(tuán)、生色團(tuán)3、助色團(tuán)、助色團(tuán)4、藍(lán)移、紅移、藍(lán)移、紅移5、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)二紫外二紫外- -可見吸收光譜中的常用術(shù)語可見吸收光譜中的常用術(shù)語1、吸收光譜吸收曲線、吸收光譜吸收曲線(1)最大吸收波長最大吸收波長max吸收曲線上的最大吸收峰所吸收曲線上的最大吸收峰所對應(yīng)的波長。對應(yīng)的波長。(2)最小吸收波長最小吸收波長min吸收曲線上的最低部位的谷吸收曲線上的

8、最低部位的谷所對應(yīng)的波長。所對應(yīng)的波長。(3)肩峰肩峰sh吸收峰上的曲折處稱為肩峰。吸收峰上的曲折處稱為肩峰。(4)末端吸收末端吸收在吸收曲線的最短波優(yōu)點(diǎn)呈在吸收曲線的最短波優(yōu)點(diǎn)呈現(xiàn)強(qiáng)吸收而不成峰形的部分現(xiàn)強(qiáng)吸收而不成峰形的部分稱為末端吸收。稱為末端吸收。有機(jī)化合物分子構(gòu)造中含有有機(jī)化合物分子構(gòu)造中含有n*、*躍遷的基團(tuán)，能在紫躍遷的基團(tuán)，能在紫外外-可見光范圍內(nèi)產(chǎn)生吸收的基團(tuán)?？梢姽夥秶鷥?nèi)產(chǎn)生吸收的基團(tuán)。如如C=C、C=O、N=N等簡單的雙鍵或叁鍵，以及等簡單的雙鍵或叁鍵，以及CO、CN、CS、NO、NO2等有雜原子滲入的雙鍵或共軛雙等有雜原子滲入的雙鍵或共軛雙鍵。鍵。2、生色團(tuán)、生色團(tuán)含有

9、非成鍵電子的雜原子飽和基團(tuán)，本身不能吸收波長大于含有非成鍵電子的雜原子飽和基團(tuán)，本身不能吸收波長大于200nm的輻射，但與發(fā)色團(tuán)或飽和烴相連時(shí)，能使生色團(tuán)的吸的輻射，但與發(fā)色團(tuán)或飽和烴相連時(shí)，能使生色團(tuán)的吸收峰向長波方向位移并加強(qiáng)其吸收強(qiáng)度的基團(tuán)。收峰向長波方向位移并加強(qiáng)其吸收強(qiáng)度的基團(tuán)。如如NH2、OH、NR2、OR、SH、SR、Cl、Br等。等。這些基團(tuán)中的這些基團(tuán)中的 n電子能與生色團(tuán)中的電子能與生色團(tuán)中的電子相互作用能夠產(chǎn)生電子相互作用能夠產(chǎn)生p-共軛，使共軛，使*躍遷能量降低，躍遷幾率變大。躍遷能量降低，躍遷幾率變大。3、助色團(tuán)、助色團(tuán)(1)藍(lán)移紫移、短移藍(lán)移紫移、短移因化合物的構(gòu)造

10、改動(dòng)或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向短因化合物的構(gòu)造改動(dòng)或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向短波方向挪動(dòng)的景象波方向挪動(dòng)的景象 (2)紅移長移紅移長移因化合物的構(gòu)造改動(dòng)或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向長因化合物的構(gòu)造改動(dòng)或溶劑效應(yīng)等引起的吸收峰向長波方向挪動(dòng)的景象波方向挪動(dòng)的景象4、藍(lán)移、紅移、藍(lán)移、紅移(1)增色效應(yīng)增色效應(yīng)由于化合物的構(gòu)造發(fā)生某些變化或外界要素的影響由于化合物的構(gòu)造發(fā)生某些變化或外界要素的影響，使化合物的吸收強(qiáng)度增大的景象，使化合物的吸收強(qiáng)度增大的景象(2)減色效應(yīng)減色效應(yīng)由于化合物的構(gòu)造發(fā)生某些變化或外界要素的影響由于化合物的構(gòu)造發(fā)生某些變化或外界要素的影響，使化合物的吸收強(qiáng)度減小的景象，使化

11、合物的吸收強(qiáng)度減小的景象5、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)、增色效應(yīng)、減色效應(yīng)三吸收帶三吸收帶根據(jù)電子躍遷和分子軌道類型，吸收帶可分為：根據(jù)電子躍遷和分子軌道類型，吸收帶可分為：1 1、R R帶帶Radikal(Radikal(基團(tuán)基團(tuán)) )2 2、K K帶帶Konjugation(Konjugation(共軛作用共軛作用) ) 3 3、B B帶帶benzenoid(benzenoid(苯苯) ) 4 4、E E帶帶芳香族化合物特征吸收帶芳香族化合物特征吸收帶 1、R帶Radikal(基團(tuán))由含雜原子不飽和基團(tuán)由含雜原子不飽和基團(tuán) CO、NO、NO2、NN 的的n*躍遷引起。躍遷引起。吸收峰處于較長波長范

12、圍吸收峰處于較長波長范圍250500nm內(nèi)，吸收強(qiáng)度中等內(nèi)，吸收強(qiáng)度中等100 。2、K帶Konjugation(共軛作用) 由共軛雙鍵中由共軛雙鍵中 *躍遷引起。躍遷引起。吸收峰出如今吸收峰出如今200nm以上，吸收強(qiáng)度大以上，吸收強(qiáng)度大105。隨著共軛雙鍵的添加，吸收峰紅移，吸收強(qiáng)度有所添加。隨著共軛雙鍵的添加，吸收峰紅移，吸收強(qiáng)度有所添加。如丁二烯如丁二烯max =217nm為為K帶。帶。3、B帶benzenoid(苯) 芳香族包括雜芳香族芳香族包括雜芳香族特征吸收帶。特征吸收帶。由苯等芳香族化合物的由苯等芳香族化合物的 *躍遷所引起的吸收帶躍遷所引起的吸收帶之一。之一。吸收峰出如今吸收

13、峰出如今230270nm之間，中心波長之間，中心波長256nm。在極性溶劑中，在極性溶劑中，B帶精細(xì)帶精細(xì)構(gòu)造變得不明顯或消逝。構(gòu)造變得不明顯或消逝。 苯的紫外吸收光譜異辛烷溶劑中苯的紫外吸收光譜異辛烷溶劑中4、E帶芳香族化合物特征吸收帶 由苯環(huán)構(gòu)造中由苯環(huán)構(gòu)造中3個(gè)乙烯的環(huán)個(gè)乙烯的環(huán)狀共軛系統(tǒng)的狀共軛系統(tǒng)的 *躍遷所躍遷所引起。引起。分為分為E1和和E2兩個(gè)吸收帶。兩個(gè)吸收帶。E1吸收帶約在吸收帶約在184nm， max=60000 ，強(qiáng)吸收帶。，強(qiáng)吸收帶。E2吸收帶在吸收帶在204nm以上，以上， max=8000 ，強(qiáng)吸收帶。，強(qiáng)吸收帶。 苯的紫外吸收光譜異辛烷溶劑中苯的紫外吸收光譜異辛

14、烷溶劑中電子構(gòu)造電子構(gòu)造化合物化合物躍遷躍遷maxmaxnmnmmaxmax吸收帶吸收帶乙烷乙烷* *10 00010 000 乙烯乙烯* *16516510 00010 000 乙炔乙炔* *17317360006000 和和n n丙酮丙酮* *約約16016016 00016 000 nn* *19419490009000 nn* *2792791515R R-CH2=CH-CH=CH2CH2=CH-CH=CH2* *21721721 00021 000K K-和和n nCH2=CH-CHOCH2=CH-CHO* *21021011 50011 500K K nn* *3153151414

15、R R芳香族芳香族苯苯芳香族芳香族* *約約18018060 00060 000E1E1 同上同上約約20020080008000E2E2 同上同上255255215215B B一些化合物的電子構(gòu)造、躍遷和吸收帶1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素四紫外四紫外- -可見吸收光譜與分子構(gòu)造的關(guān)系可見吸收光譜與分子構(gòu)造的關(guān)系(1)飽和化合物飽和化合物飽和碳?xì)浠衔镏恍栾柡吞細(xì)浠衔镏恍桦娮?，因此只能產(chǎn)生電子，因此只能產(chǎn)生*躍遷，需求躍遷，需求能量較大，吸收的波長通常在能量較大，吸收的波長通常在150nm左右的真空紫外光區(qū)。

16、左右的真空紫外光區(qū)。含有含有O、N、S、X等雜原子的飽和化合物，除等雜原子的飽和化合物，除電子外，還有電子外，還有n電子，可發(fā)生電子，可發(fā)生n*躍遷，在躍遷，在200nm附近有弱吸收，通常為末附近有弱吸收，通常為末端吸收。端吸收。僅少數(shù)化合物如烷基碘的僅少數(shù)化合物如烷基碘的max為為259nm max =400。在在200400nm的近紫外區(qū)沒有強(qiáng)吸收常稱為透明。的近紫外區(qū)沒有強(qiáng)吸收常稱為透明。在紫外吸收光譜分析中常作溶劑。在紫外吸收光譜分析中常作溶劑。1 1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜(2)不飽和烴及共軛烯烴不飽和烴及共軛烯烴含孤立雙鍵或叁鍵的簡單不飽和脂肪化合物，可

17、以產(chǎn)生含孤立雙鍵或叁鍵的簡單不飽和脂肪化合物，可以產(chǎn)生*和和*兩種躍遷。兩種躍遷。最大吸收波長最大吸收波長max小于小于200nm。具有共軛體系的不飽和化合物，共軛體系越長，躍遷時(shí)所需具有共軛體系的不飽和化合物，共軛體系越長，躍遷時(shí)所需能量越小，吸收峰紅移越顯著。能量越小，吸收峰紅移越顯著。如如1,3,5,7,9,11-十二烷基六烯十二烷基六烯max為為364nm，max為為000。1 1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜(3)羰基化合物羰基化合物羰基化合物含有羰基化合物含有C=O基團(tuán)，可發(fā)生基團(tuán)，可發(fā)生n*、n*和和*躍遷躍遷。其中其中n*躍遷所需求能量較低，吸收波長在近紫

18、外光區(qū)或紫躍遷所需求能量較低，吸收波長在近紫外光區(qū)或紫外光區(qū)，外光區(qū)，為為10100。醛、酮、羧酸及其衍生物醛、酮、羧酸及其衍生物(酯、酰胺、酰鹵等酯、酰胺、酰鹵等)，均屬于這類化，均屬于這類化合物的吸收類型。合物的吸收類型。、-不飽和醛、酮，由于不飽和醛、酮，由于C=O和和C=C雙鍵共軛，使雙鍵共軛，使*躍遷躍遷紅移至紅移至200nm以上，以上，約為約為104；而；而n*躍遷紅移至躍遷紅移至310350nm 100 。如如CH2=CH-CHO，共軛，共軛*躍遷躍遷max為為210nm，n*躍遷躍遷max為為315nm。1 1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜(4)芳香族化合

19、物芳香族化合物苯具有環(huán)狀共軛體系，在紫外光區(qū)，由苯具有環(huán)狀共軛體系，在紫外光區(qū)，由*躍遷產(chǎn)生躍遷產(chǎn)生E1帶、帶、E2帶和帶和B帶帶3個(gè)吸收帶。個(gè)吸收帶。B帶是芳香族化合物的特征。帶是芳香族化合物的特征。當(dāng)苯環(huán)上引入當(dāng)苯環(huán)上引入NH2、OH、CHO、NO2基團(tuán)時(shí)，苯的基團(tuán)時(shí)，苯的B帶顯著紅移，吸收強(qiáng)度增大。帶顯著紅移，吸收強(qiáng)度增大。假設(shè)引入的基團(tuán)帶有不飽和雜原子時(shí)，那么產(chǎn)生了假設(shè)引入的基團(tuán)帶有不飽和雜原子時(shí)，那么產(chǎn)生了n*躍遷躍遷的新吸收帶。的新吸收帶。如硝基苯、苯甲醛的如硝基苯、苯甲醛的n*躍遷的吸收波長分別為躍遷的吸收波長分別為330nm和和328nm。1 1、有機(jī)化合物的紫外吸收光譜、有機(jī)

20、化合物的紫外吸收光譜2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素分子的內(nèi)部構(gòu)造和外部環(huán)境等各種要素對吸收譜帶分子的內(nèi)部構(gòu)造和外部環(huán)境等各種要素對吸收譜帶也有一些，主要表現(xiàn)為譜帶位移、譜帶強(qiáng)度的變化、也有一些，主要表現(xiàn)為譜帶位移、譜帶強(qiáng)度的變化、譜帶精細(xì)構(gòu)造的改動(dòng)等。譜帶精細(xì)構(gòu)造的改動(dòng)等。(1)位阻影響位阻影響(2)跨環(huán)效應(yīng)跨環(huán)效應(yīng)(3)溶劑效應(yīng)溶劑效應(yīng)(4)體系體系pH值的影響值的影響(1)位阻影響位阻影響化合物中假設(shè)有兩個(gè)生色團(tuán)產(chǎn)生共軛效應(yīng)，可使吸收化合物中假設(shè)有兩個(gè)生色團(tuán)產(chǎn)生共軛效應(yīng)，可使吸收帶長移。帶長移。但假設(shè)兩個(gè)生色團(tuán)由于立體妨礙妨礙它們處于同一平但假設(shè)兩個(gè)生色團(tuán)由

21、于立體妨礙妨礙它們處于同一平面上，就會(huì)影響共軛效應(yīng)。面上，就會(huì)影響共軛效應(yīng)。二苯乙烯由于順式構(gòu)造有立體妨礙，苯環(huán)不能與乙烯二苯乙烯由于順式構(gòu)造有立體妨礙，苯環(huán)不能與乙烯雙鍵在同一平面上，不易產(chǎn)生共軛，因此反式構(gòu)造的雙鍵在同一平面上，不易產(chǎn)生共軛，因此反式構(gòu)造的K帶帶max比順式明顯紅移，且吸收系數(shù)也添加。比順式明顯紅移，且吸收系數(shù)也添加。2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素 二苯乙烯順式反式異構(gòu)體的紫外吸收光譜二苯乙烯順式反式異構(gòu)體的紫外吸收光譜2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素(2) 跨環(huán)效應(yīng)跨環(huán)效應(yīng)跨環(huán)效應(yīng)指非共軛基團(tuán)之間的相互作用?？?/p>

22、環(huán)效應(yīng)指非共軛基團(tuán)之間的相互作用。如對亞甲基環(huán)丁酮在如對亞甲基環(huán)丁酮在214nm處出現(xiàn)一中等強(qiáng)度的吸收處出現(xiàn)一中等強(qiáng)度的吸收帶，同時(shí)帶，同時(shí)284nm處出現(xiàn)處出現(xiàn)R帶。帶。這是由于構(gòu)造中雖然雙鍵與酮基不產(chǎn)生共軛體系，但這是由于構(gòu)造中雖然雙鍵與酮基不產(chǎn)生共軛體系，但適當(dāng)?shù)牧Ⅲw陳列，使羰基氧的孤電子對與雙鍵的適當(dāng)?shù)牧Ⅲw陳列，使羰基氧的孤電子對與雙鍵的電子電子發(fā)生作用，相當(dāng)于發(fā)生作用，相當(dāng)于n*躍遷的躍遷的R帶向長波挪動(dòng)。帶向長波挪動(dòng)。對亞甲基環(huán)丁酮對亞甲基環(huán)丁酮2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素(3)溶劑效應(yīng)溶劑效應(yīng)n* 隨溶劑極性的增大，吸收峰向短波挪動(dòng)。隨溶劑極性的

23、增大，吸收峰向短波挪動(dòng)。* 隨溶劑極性的增大，吸收峰向長波挪動(dòng)。隨溶劑極性的增大，吸收峰向長波挪動(dòng)。 極性溶劑對兩種躍遷能級差的影響表示圖極性溶劑對兩種躍遷能級差的影響表示圖2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素溶劑極性對異丙叉丙酮的兩種躍遷吸收峰的影響溶劑極性對異丙叉丙酮的兩種躍遷吸收峰的影響躍遷類型躍遷類型正己烷正己烷三氯甲烷三氯甲烷甲醇甲醇水水* * 230nm230nm238nm238nm237nm 237nm 243nm243nmnn* *329nm329nm315nm315nm309nm309nm305nm305nm 對稱四嗪的吸收光譜a. 蒸氣態(tài)中 b.

24、環(huán)己烷中 c. 水中極性溶劑往往使吸收峰的精細(xì)構(gòu)造消逝極性溶劑往往使吸收峰的精細(xì)構(gòu)造消逝2 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響紫外吸收光譜的主要要素(4)體系體系pH值的影響值的影響體系酸堿度對酸堿性有機(jī)化合物吸收光譜的影響普遍體系酸堿度對酸堿性有機(jī)化合物吸收光譜的影響普遍存在。存在。如酚類化合物由于體系如酚類化合物由于體系pH值不同，其解離情況不同，值不同，其解離情況不同，而產(chǎn)生不同的吸收光譜。而產(chǎn)生不同的吸收光譜。OHOHHOmax 210.5nmmax 6200 236nmmax 9400 270nm max 1450 287nmmax 26002 2、影響紫外吸收光譜的主要要素、影響

25、紫外吸收光譜的主要要素二、朗伯二、朗伯- -比爾定律比爾定律朗伯朗伯-比爾定律比爾定律(Lambert-Beer)是光吸收的根本定律，是分光光度法定量是光吸收的根本定律，是分光光度法定量分析的根據(jù)和根底。分析的根據(jù)和根底。假設(shè)濃度假設(shè)濃度c以物質(zhì)的量濃度以物質(zhì)的量濃度mol/L表示，那么公式可以寫成表示，那么公式可以寫成 其中其中稱為摩爾吸收系數(shù)，單位為稱為摩爾吸收系數(shù)，單位為L/molcm。假設(shè)濃度假設(shè)濃度c以質(zhì)量百分濃度以質(zhì)量百分濃度g/100ml表示，那么公式可以寫成表示，那么公式可以寫成 其中稱為百分吸收系數(shù)，單位為其中稱為百分吸收系數(shù)，單位為100ml/gcm。吸收系數(shù)兩種表示方式之

26、間的關(guān)系是：吸收系數(shù)兩種表示方式之間的關(guān)系是：lgATElc cAl1%1cmAElc%1110cmEM一數(shù)學(xué)表達(dá)式及物理意義一數(shù)學(xué)表達(dá)式及物理意義例例 某種從中藥提取物分別純化制得的有效成分，濃度為某種從中藥提取物分別純化制得的有效成分，濃度為12.6g/ml，用，用1cm吸收池，在最大吸收波長吸收池，在最大吸收波長238nm處測得其吸處測得其吸光度為光度為0.437，試計(jì)算其，試計(jì)算其 max ；假設(shè)該組分的分子量是；假設(shè)該組分的分子量是264，計(jì)算其，計(jì)算其max 。解：知解：知c=12.6g/ml=12.610-6100=1.2610-3 (g/100ml)朗伯朗伯- -比爾定律公式運(yùn)

27、用比爾定律公式運(yùn)用%11cmE1%21max30.437()3.47 101.26 101cmAEcl32%11max1016. 91047. 31026410)(cmEM1 1、化學(xué)要素、化學(xué)要素2 2、光學(xué)要素非單色光，雜散光，散射光和反射光，、光學(xué)要素非單色光，雜散光，散射光和反射光，非平行光非平行光二偏離朗伯二偏離朗伯-比爾定律的要素比爾定律的要素吸光物質(zhì)可因濃度的改動(dòng)而發(fā)生離解、締合、溶劑化以及配合吸光物質(zhì)可因濃度的改動(dòng)而發(fā)生離解、締合、溶劑化以及配合物生成等變化，使吸光物質(zhì)的存在方式發(fā)生變化，從而偏離朗物生成等變化，使吸光物質(zhì)的存在方式發(fā)生變化，從而偏離朗伯伯-比爾定律。比爾定律。

28、 C6H5COOHH2O = C6H5COOH3O maxnm) 273 268max L/(molcm) 970 560稀釋溶液或改動(dòng)溶液稀釋溶液或改動(dòng)溶液pH值時(shí)，吸收波長及吸收系數(shù)都會(huì)改動(dòng)。值時(shí)，吸收波長及吸收系數(shù)都會(huì)改動(dòng)。1 1、化學(xué)要素、化學(xué)要素2 2、光學(xué)要素、光學(xué)要素(1)非單色光非單色光(2)雜散光雜散光 (3)散射光和反射光散射光和反射光(4)非平行光非平行光(1)非單色光非單色光比爾定律只適用于單色光，實(shí)踐用于丈量的都是具有比爾定律只適用于單色光，實(shí)踐用于丈量的都是具有一定譜帶寬度的復(fù)合光，譜帶寬度越小，單色性越好。一定譜帶寬度的復(fù)合光，譜帶寬度越小，單色性越好。譜帶寬度譜

29、帶寬度應(yīng)選擇曲線較為平坦應(yīng)選擇曲線較為平坦的最大吸收波長的最大吸收波長a a處測定處測定2 2、光學(xué)要素、光學(xué)要素2 2、光學(xué)要素、光學(xué)要素(2)雜散光雜散光 從單色器得到的單色光中，還有一些不在譜帶范圍內(nèi)的、從單色器得到的單色光中，還有一些不在譜帶范圍內(nèi)的、與所需波長相隔甚遠(yuǎn)的光，稱為雜散光。與所需波長相隔甚遠(yuǎn)的光，稱為雜散光。它是由于儀器光學(xué)系統(tǒng)的缺陷或光學(xué)元件受灰塵、霉蝕它是由于儀器光學(xué)系統(tǒng)的缺陷或光學(xué)元件受灰塵、霉蝕的影響而引起的。的影響而引起的。在透光率很弱時(shí)，雜散光會(huì)產(chǎn)生明顯的作用。在透光率很弱時(shí)，雜散光會(huì)產(chǎn)生明顯的作用。在接近紫外末端吸收處，雜散光的比例相對增大，從而在接近紫外末

30、端吸收處，雜散光的比例相對增大，從而干擾測定，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)假峰。干擾測定，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)假峰。2 2、光學(xué)要素、光學(xué)要素(3)散射光和反射光散射光和反射光吸光質(zhì)點(diǎn)對入射光有散射作用，吸收池內(nèi)外界面之吸光質(zhì)點(diǎn)對入射光有散射作用，吸收池內(nèi)外界面之間入射光經(jīng)過時(shí)會(huì)有反射作用。間入射光經(jīng)過時(shí)會(huì)有反射作用。散射和反射作用致使透射光強(qiáng)度減弱。散射和反射作用致使透射光強(qiáng)度減弱。真溶液散射作用較弱，可用空白進(jìn)展補(bǔ)償。真溶液散射作用較弱，可用空白進(jìn)展補(bǔ)償?；鞚崛芤荷⑸渥饔幂^強(qiáng)，影響結(jié)果測定，故要求被混濁溶液散射作用較強(qiáng)，影響結(jié)果測定，故要求被測溶液為廓清溶液。測溶液為廓清溶液。2 2、光學(xué)要素、光學(xué)要素(4)非平

31、行光非平行光傾斜光經(jīng)過吸收池的實(shí)踐光程將比垂直照射的平行傾斜光經(jīng)過吸收池的實(shí)踐光程將比垂直照射的平行光的光程長，使吸光度添加，影響丈量值。光的光程長，使吸光度添加，影響丈量值。透光率丈量誤差透光率丈量誤差T來自儀器的來自儀器的噪聲。噪聲。濃度丈量結(jié)果的相對誤差濃度丈量結(jié)果的相對誤差c/c與透光率丈量誤差關(guān)系可由朗伯與透光率丈量誤差關(guān)系可由朗伯-比比爾定律導(dǎo)出：爾定律導(dǎo)出：濃度丈量的相對誤差取決于透光率濃度丈量的相對誤差取決于透光率T和透光率丈量誤差和透光率丈量誤差T的大小。的大小。0 .4 3 4lgcTcTT相對誤差與透光率的關(guān)系相對誤差與透光率的關(guān)系三透光率丈量誤差三透光率丈量誤差一、主要

32、部件一、主要部件光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測器檢測器信號顯示系統(tǒng)信號顯示系統(tǒng)第二節(jié)第二節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì)一光源光源的作用是提供激發(fā)能，使待測分子產(chǎn)生吸收。光源的作用是提供激發(fā)能，使待測分子產(chǎn)生吸收。1 1、光源的要求、光源的要求 發(fā)射延續(xù)輻射光；發(fā)射延續(xù)輻射光；有足夠的輻射強(qiáng)度及良好的穩(wěn)定性；有足夠的輻射強(qiáng)度及良好的穩(wěn)定性；輻射強(qiáng)度隨波長的變化應(yīng)盡能夠?。惠椛鋸?qiáng)度隨波長的變化應(yīng)盡能夠?。还庠吹倪\(yùn)用壽命長，操作方便。光源的運(yùn)用壽命長，操作方便。一光源2、光源的種類、光源的種類 常用的光源有熱輻射光源如鎢燈、鹵鎢燈和氣體放電光源常用的光源有熱輻射光源如鎢燈、鹵鎢

33、燈和氣體放電光源如氫燈和氘燈兩類。如氫燈和氘燈兩類。(1)鎢燈和碘鎢燈：鎢燈和碘鎢燈：3402500nm，可見光區(qū)內(nèi)輻射強(qiáng)度與任務(wù)，可見光區(qū)內(nèi)輻射強(qiáng)度與任務(wù)電壓的電壓的4次方成正比。次方成正比。(2)氫燈和氘燈：氫燈和氘燈：160375nm，氘燈比同功率的氫燈光強(qiáng)度大，氘燈比同功率的氫燈光強(qiáng)度大35倍。倍。(3)激光紫外光源：高強(qiáng)度、高單色性，氬離子激光器、可調(diào)激光紫外光源：高強(qiáng)度、高單色性，氬離子激光器、可調(diào)諧染料激光器。諧染料激光器。單色器是從光源的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)安裝，其主要特單色器是從光源的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)安裝，其主要特點(diǎn)是產(chǎn)生光譜純度高、色散率高且波長可調(diào)理。點(diǎn)是產(chǎn)生

34、光譜純度高、色散率高且波長可調(diào)理。由進(jìn)光狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、聚焦元件和出光狹縫等幾個(gè)由進(jìn)光狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件、聚焦元件和出光狹縫等幾個(gè)部分組成，中心部件是色散元件。部分組成，中心部件是色散元件。二單色器二單色器 單色器光路表示圖棱鏡色散與光柵色散棱鏡色散與光柵色散二單色器二單色器1、色散元件、色散元件(1)棱鏡：利用折射率差別制成。棱鏡：利用折射率差別制成。(2)光柵：利用光的衍射與干涉作用制成。光柵：利用光的衍射與干涉作用制成。每每1mm玻璃上刻玻璃上刻6001200條槽。條槽。每條刻線相當(dāng)于每條刻線相當(dāng)于1條狹縫，光在未刻部分發(fā)條狹縫，光在未刻部分發(fā)生反射，各反射光束間的干涉引起色

35、散。生反射，各反射光束間的干涉引起色散。二單色器二單色器2、準(zhǔn)直鏡、準(zhǔn)直鏡以狹縫為焦點(diǎn)的聚光鏡。以狹縫為焦點(diǎn)的聚光鏡。將進(jìn)入單色器的發(fā)射光變成平行光；將進(jìn)入單色器的發(fā)射光變成平行光；將色散后的平行單色光聚集于出光狹縫。將色散后的平行單色光聚集于出光狹縫。二單色器二單色器3、狹縫、狹縫狹縫寬度直接影響單色光的純度。狹縫寬度直接影響單色光的純度。狹縫過寬，單色光不純；狹縫過窄，光通量過小，靈敏度降低。狹縫過寬，單色光不純；狹縫過窄，光通量過小，靈敏度降低。定性分析宜采用較小的狹縫寬度。定性分析宜采用較小的狹縫寬度。定量分析宜采用較大的狹縫寬度。定量分析宜采用較大的狹縫寬度。二單色器二單色器4、雜散

36、光及其消除、雜散光及其消除雜散光：指出射光束中混有的與儀器所指示的波長相差較大的光雜散光：指出射光束中混有的與儀器所指示的波長相差較大的光波。波。雜散光會(huì)嚴(yán)重影響吸光度測定。雜散光會(huì)嚴(yán)重影響吸光度測定。雜散光產(chǎn)生的緣由：各光學(xué)部件和單色器的外殼內(nèi)壁的反射；大雜散光產(chǎn)生的緣由：各光學(xué)部件和單色器的外殼內(nèi)壁的反射；大氣或化學(xué)部件外表塵埃的散射；光學(xué)元件霉變、腐蝕。氣或化學(xué)部件外表塵埃的散射；光學(xué)元件霉變、腐蝕?？蓪紊饔谜謿し怄i起來，罩殼內(nèi)涂有黑體以吸收雜散光。可將單色器用罩殼封鎖起來，罩殼內(nèi)涂有黑體以吸收雜散光。即比色皿，用于盛放待測溶液的容器。即比色皿，用于盛放待測溶液的容器。1 1、光學(xué)玻

37、璃吸收池、光學(xué)玻璃吸收池 可見光區(qū)可見光區(qū)2 2、熔融石英吸收池、熔融石英吸收池 可見光區(qū)、紫外光區(qū)可見光區(qū)、紫外光區(qū)用于盛放供試液和參比液的比色皿，應(yīng)厚度一樣，兩只比色用于盛放供試液和參比液的比色皿，應(yīng)厚度一樣，兩只比色皿的透光率之差小于皿的透光率之差小于0.5%0.5%。三吸收池將光信號轉(zhuǎn)變成電信號的光電轉(zhuǎn)換元件，其產(chǎn)生的電將光信號轉(zhuǎn)變成電信號的光電轉(zhuǎn)換元件，其產(chǎn)生的電信號與照射光強(qiáng)度成正比。信號與照射光強(qiáng)度成正比。要求：要求：在丈量范圍內(nèi)具有高靈敏度；在丈量范圍內(nèi)具有高靈敏度；對輻射能量的呼應(yīng)快、線性關(guān)系好、線性范圍寬；對輻射能量的呼應(yīng)快、線性關(guān)系好、線性范圍寬；對不同波長的輻射影響性能

38、一樣且可靠；對不同波長的輻射影響性能一樣且可靠；穩(wěn)定性好，噪聲程度低。穩(wěn)定性好，噪聲程度低。四檢測器1 1、光電池、光電池2 2、光電管、光電管3 3、光電倍增管、光電倍增管4 4、光二極管陣列檢測器、光二極管陣列檢測器四檢測器1 1、光電池、光電池硒光電池：敏感光區(qū)硒光電池：敏感光區(qū)300800nm300800nm，易疲勞，壽命短。，易疲勞，壽命短。硅光電池：紫外光區(qū)及可見光區(qū)。硅光電池：紫外光區(qū)及可見光區(qū)。四檢測器2 2、光電管、光電管以一彎成半圓柱形的金屬片為陰極，陰極內(nèi)外表鍍有堿金屬或以一彎成半圓柱形的金屬片為陰極，陰極內(nèi)外表鍍有堿金屬或堿金屬氧化物等光敏層；堿金屬氧化物等光敏層；在圓

39、柱形的中心置一金屬絲為陽極，可接受陰極釋放的電子。在圓柱形的中心置一金屬絲為陽極，可接受陰極釋放的電子。兩電極密封于玻璃管或石英管內(nèi)并抽真空。兩電極密封于玻璃管或石英管內(nèi)并抽真空。紅敏光電管紅敏光電管( (鍍有銀和氧化銫鍍有銀和氧化銫) )可用于可用于6251000nm6251000nm波長。波長。藍(lán)敏光電管藍(lán)敏光電管( (鍍有銻和銫鍍有銻和銫) )可用于可用于200625nm200625nm波長。波長。光電管靈敏度高，光敏范圍寬，不易疲勞。光電管靈敏度高，光敏范圍寬，不易疲勞。四檢測器 光電管檢測器表示圖3 3、光電倍增管、光電倍增管一種加上多級倍增電極的光電管。一種加上多級倍增電極的光電管

40、。外殼由玻璃或石英制成，陰極外表涂外殼由玻璃或石英制成，陰極外表涂有光敏物質(zhì)，在陰極與陽極之間裝有有光敏物質(zhì)，在陰極與陽極之間裝有一系列次級電子發(fā)射極，即電子倍增一系列次級電子發(fā)射極，即電子倍增極。極。輻射光子撞擊陰極時(shí)發(fā)射光電子，該輻射光子撞擊陰極時(shí)發(fā)射光電子，該電子被電場加速并撞擊第一倍增極，電子被電場加速并撞擊第一倍增極，撞出更多電子，依次進(jìn)展，最后陽極撞出更多電子，依次進(jìn)展，最后陽極搜集到的電子數(shù)是陰極發(fā)射電子的搜集到的電子數(shù)是陰極發(fā)射電子的105106105106倍。倍。四檢測器 光電倍增管表示圖光電管輸出的電信號很弱，需經(jīng)過放大才干以某種方式將丈量光電管輸出的電信號很弱，需經(jīng)過放大

41、才干以某種方式將丈量結(jié)果顯示出來，普通的分光光度計(jì)多具有熒屏顯示、結(jié)果打印結(jié)果顯示出來，普通的分光光度計(jì)多具有熒屏顯示、結(jié)果打印及吸收曲線掃描等功能。及吸收曲線掃描等功能?，F(xiàn)代的分光光度計(jì)配備有計(jì)算機(jī)光譜任務(wù)站，可對數(shù)字信號進(jìn)現(xiàn)代的分光光度計(jì)配備有計(jì)算機(jī)光譜任務(wù)站，可對數(shù)字信號進(jìn)展采集、處置與顯示，并對各系統(tǒng)進(jìn)展自動(dòng)控制。展采集、處置與顯示，并對各系統(tǒng)進(jìn)展自動(dòng)控制。五信號處置和顯示系統(tǒng)1 1、單光束分光光度計(jì)、單光束分光光度計(jì)2 2、雙光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)3 3、雙波長分光光度計(jì)、雙波長分光光度計(jì)4 4、全波長分光光度計(jì)、全波長分光光度計(jì)二、分光光度計(jì)的類型在單光束光學(xué)系統(tǒng)中，單色

42、器色散后的單色光進(jìn)入吸收池。在單光束光學(xué)系統(tǒng)中，單色器色散后的單色光進(jìn)入吸收池。經(jīng)單色器分光后構(gòu)成一束平行光，輪番經(jīng)過參比溶液和樣品經(jīng)單色器分光后構(gòu)成一束平行光，輪番經(jīng)過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)展吸光度的測定。溶液，以進(jìn)展吸光度的測定。這種簡易型分光光度計(jì)構(gòu)造簡單，操作方便，維修容易，適這種簡易型分光光度計(jì)構(gòu)造簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。用于常規(guī)分析。一單光束分光光度計(jì)光源發(fā)出光經(jīng)單色器分光后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)扇面鏡切光器分為強(qiáng)度光源發(fā)出光經(jīng)單色器分光后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)扇面鏡切光器分為強(qiáng)度相等的兩束光，一束經(jīng)過參比池，另一束經(jīng)過樣品池，光度計(jì)能相等的兩束光，一束經(jīng)過參比池，另一束經(jīng)過樣品池，光度計(jì)

43、能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度，并作為波長函數(shù)記錄下來。將它轉(zhuǎn)換成吸光度，并作為波長函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計(jì)普通都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。雙光束分光光度計(jì)普通都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別經(jīng)過參比池和樣品池，因此能自動(dòng)消除光源由于兩束光同時(shí)分別經(jīng)過參比池和樣品池，因此能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。強(qiáng)度變化所引起的誤差。二雙光束分光光度計(jì)由同一光源發(fā)出的光被分為兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得由同一光源發(fā)出的光被分為兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長的單色光。到兩束不

44、同波長的單色光。利用切光器使兩束光以一定頻率交替照射同一吸收池，然后利用切光器使兩束光以一定頻率交替照射同一吸收池，然后測定兩個(gè)波優(yōu)點(diǎn)的吸光度差值測定兩個(gè)波優(yōu)點(diǎn)的吸光度差值A(chǔ)A。A= A1A= A1 A2=(1 A2=(1 2)lc 2)lc三雙波長分光光度計(jì)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：雙波長分光光度計(jì)只利用雙波長分光光度計(jì)只利用1 1個(gè)吸收池，消除了吸收池及參比池個(gè)吸收池，消除了吸收池及參比池所引起的丈量誤差；所引起的丈量誤差；用同一光源得到兩束光，可減小因光源電壓變化產(chǎn)生的影響。用同一光源得到兩束光，可減小因光源電壓變化產(chǎn)生的影響。三雙波長分光光度計(jì)光電二極管陣列光電二極管陣列PDAPDA是在晶是在晶體硅

45、上嚴(yán)密陳列一系列光電二極體硅上嚴(yán)密陳列一系列光電二極管檢測管，光經(jīng)全息光柵外表色管檢測管，光經(jīng)全息光柵外表色散并透射到二極管陣列檢測器上散并透射到二極管陣列檢測器上，被其中的光二極管接受。，被其中的光二極管接受。二極管輸出的電信號強(qiáng)度與光強(qiáng)二極管輸出的電信號強(qiáng)度與光強(qiáng)度成正比。度成正比。兩個(gè)二極管中心間隔的波長單位兩個(gè)二極管中心間隔的波長單位稱為采樣間隔。稱為采樣間隔。二極管數(shù)目越多，分辨率越高。二極管數(shù)目越多，分辨率越高。四全波長分光光度計(jì)全波長分光光度計(jì)同時(shí)檢測透過全波長分光光度計(jì)同時(shí)檢測透過樣品復(fù)色光。樣品復(fù)色光。它具有靈敏度高、噪音低、線性它具有靈敏度高、噪音低、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可用

46、作高效液相范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可用作高效液相色譜檢測器。色譜檢測器。四全波長分光光度計(jì)一光學(xué)性能一光學(xué)性能1、輻射波長、輻射波長2、儀器的丈量范圍、儀器的丈量范圍3、儀器的反復(fù)性及準(zhǔn)確度、儀器的反復(fù)性及準(zhǔn)確度4、雜散光、雜散光三、光學(xué)性能與儀器校正1、輻射波長、輻射波長(1)波長范圍：指儀器所能丈量的波長范圍，通常為波長范圍：指儀器所能丈量的波長范圍，通常為200800nm。(2)光譜帶寬：指在最大透光強(qiáng)度一半處曲線的寬度，通常為光譜帶寬：指在最大透光強(qiáng)度一半處曲線的寬度，通常為6nm以下。以下。(3)波長準(zhǔn)確度：儀器所顯示的波長數(shù)值與單色光的實(shí)踐波長值之波長準(zhǔn)確度：儀器所顯示的波長數(shù)值與單色光的實(shí)

47、踐波長值之間的誤差，規(guī)定紫外光區(qū)間的誤差，規(guī)定紫外光區(qū)1nm，500nm附近附近2nm。(4)波長反復(fù)性：反復(fù)運(yùn)用同一波長，單色光實(shí)踐波長的變動(dòng)值，波長反復(fù)性：反復(fù)運(yùn)用同一波長，單色光實(shí)踐波長的變動(dòng)值，通常通常1nm。三、光學(xué)性能與儀器校正2、儀器的丈量范圍、儀器的丈量范圍透光率表示：透光率表示：-1.0%200.0%吸光度表示：吸光度表示：-0.5A3.000A3、儀器的反復(fù)性及準(zhǔn)確度、儀器的反復(fù)性及準(zhǔn)確度光度反復(fù)性：指同樣情況下反復(fù)丈量透光率的變動(dòng)，通常光度反復(fù)性：指同樣情況下反復(fù)丈量透光率的變動(dòng)，通常0.5%。光度準(zhǔn)確度：指以透光率丈量值的誤差表示。透光率滿量程誤差光度準(zhǔn)確度：指以透光率

48、丈量值的誤差表示。透光率滿量程誤差為為0.5%鉻酸鉀溶液鉻酸鉀溶液三、光學(xué)性能與儀器校正4、雜散光、雜散光通常以測光信號較弱的波優(yōu)點(diǎn)所含雜散光的強(qiáng)度百分比為目的。通常以測光信號較弱的波優(yōu)點(diǎn)所含雜散光的強(qiáng)度百分比為目的。藥典規(guī)定：藥典規(guī)定：220nm處處NaI1g/100ml透光率透光率0.8%，340nm處處Na2NO25g/100ml透光率透光率0.8%。三、光學(xué)性能與儀器校正1、波長的校正、波長的校正 常用汞燈常用汞燈237.83nm、253.65 nm等或氘燈等或氘燈486.02 nm、656.10nm中的較強(qiáng)譜線進(jìn)展校正。中的較強(qiáng)譜線進(jìn)展校正。高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器。高氯酸鈥溶液校

49、正雙光束儀器。2、吸光度的校正、吸光度的校正 運(yùn)用重鉻酸鉀的硫酸溶液，在規(guī)定的波優(yōu)點(diǎn)測定并計(jì)算其吸運(yùn)用重鉻酸鉀的硫酸溶液，在規(guī)定的波優(yōu)點(diǎn)測定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，來檢定分光光度計(jì)吸光收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，來檢定分光光度計(jì)吸光度的準(zhǔn)確度。度的準(zhǔn)確度。3、雜散光的檢查、雜散光的檢查 測定規(guī)定濃度的碘化鈉或亞硝酸鈉溶液在規(guī)定波優(yōu)點(diǎn)的透光測定規(guī)定濃度的碘化鈉或亞硝酸鈉溶液在規(guī)定波優(yōu)點(diǎn)的透光率來進(jìn)展檢查。率來進(jìn)展檢查。二儀器校正一、檢測波長的選擇一、檢測波長的選擇1 1、定量分析中，測定波長普通選擇在被測組分最大、定量分析中，測定波長普通選擇在被測組分最大吸收波優(yōu)點(diǎn)。吸收波

50、優(yōu)點(diǎn)。2 2、假設(shè)被測組分有幾個(gè)最大吸收波長時(shí)，可選擇不、假設(shè)被測組分有幾個(gè)最大吸收波長時(shí)，可選擇不易出現(xiàn)干擾吸收、吸光度較大而且峰頂比較平坦的最易出現(xiàn)干擾吸收、吸光度較大而且峰頂比較平坦的最大吸收波長。大吸收波長。3 3、假設(shè)干擾物質(zhì)在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)有較強(qiáng)的吸收，、假設(shè)干擾物質(zhì)在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)有較強(qiáng)的吸收，可選用非最大吸收處的波長。可選用非最大吸收處的波長。第三節(jié)第三節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法分析條件的選擇可見分光光度法分析條件的選擇所選擇的溶劑應(yīng)易于溶解樣品而不與樣品發(fā)生作用，且在測所選擇的溶劑應(yīng)易于溶解樣品而不與樣品發(fā)生作用，且在測定波長區(qū)間內(nèi)吸收小，不易揮發(fā)。定波長區(qū)間內(nèi)吸收小，

51、不易揮發(fā)。常用溶劑的截止波長常用溶劑的截止波長二、溶劑的選擇溶溶 劑劑截止波長截止波長nm溶溶 劑劑截止波長截止波長nm水水200 環(huán)己烷環(huán)己烷200 乙乙 腈腈210 正己烷正己烷220 95%乙醇乙醇210 二氯甲烷二氯甲烷235 乙乙 醚醚210 三氯甲烷三氯甲烷245 異丙醇異丙醇210 四氯化碳四氯化碳265 正丁醇正丁醇210 苯苯280 甲甲 醇醇215 丙丙 酮酮330 1 1、溶劑參比、溶劑參比 當(dāng)試樣組成較為簡單，共存組分很少且在測定波長吸收極小，當(dāng)試樣組成較為簡單，共存組分很少且在測定波長吸收極小，以及顯色劑沒有吸收，可采用純?nèi)軇┳鳛閰⒈热芤骸Ｒ约帮@色劑沒有吸收，可采用純

52、溶劑作為參比溶液。可消除溶劑、吸收池等要素的影響?？上軇⑽粘氐纫氐挠绊?。三、參比溶液的選擇2 2、試劑參比、試劑參比假設(shè)顯色劑或其他試劑在測定波長有吸收，按顯色反響一樣假設(shè)顯色劑或其他試劑在測定波長有吸收，按顯色反響一樣的條件，不參與試樣溶液，同樣參與試劑和溶劑作為參比溶的條件，不參與試樣溶液，同樣參與試劑和溶劑作為參比溶液。液?？上噭┲薪M分所產(chǎn)生吸收的影響。可消除試劑中組分所產(chǎn)生吸收的影響。三、參比溶液的選擇3 3、試樣參比、試樣參比假設(shè)試樣基體除被測組分外的其他共存組分在測定波優(yōu)假設(shè)試樣基體除被測組分外的其他共存組分在測定波優(yōu)點(diǎn)有吸收，而與顯色劑不起顯色反響時(shí)，可不加顯色劑但

53、按點(diǎn)有吸收，而與顯色劑不起顯色反響時(shí)，可不加顯色劑但按與顯色反響一樣的條件處置試樣，作為參比溶液。與顯色反響一樣的條件處置試樣，作為參比溶液。適用于試樣中有較多的共存組分，參與的顯色劑量較少，且適用于試樣中有較多的共存組分，參與的顯色劑量較少，且顯色劑在測定波長無吸收。顯色劑在測定波長無吸收。三、參比溶液的選擇經(jīng)過調(diào)理待測溶液的濃度和吸收池的厚度來調(diào)理經(jīng)過調(diào)理待測溶液的濃度和吸收池的厚度來調(diào)理A值，使其在值，使其在0.20.7之間。之間。0 .4 3 4lgcTcTT四、溶液吸光度的范圍及測定對于不能產(chǎn)生吸收的物質(zhì)或者吸收系數(shù)很小的物質(zhì)，可選用適對于不能產(chǎn)生吸收的物質(zhì)或者吸收系數(shù)很小的物質(zhì)，可

54、選用適當(dāng)?shù)脑噭┡c被測物質(zhì)定量反響，生成對紫外或可見光有較大吸當(dāng)?shù)脑噭┡c被測物質(zhì)定量反響，生成對紫外或可見光有較大吸收的物質(zhì)再進(jìn)展測定。收的物質(zhì)再進(jìn)展測定。一顯色反響要求一顯色反響要求二顯色條件的選擇二顯色條件的選擇五、顯色反響及顯色條件的選擇一顯色反響要求1、被測物質(zhì)和所生成的有色物質(zhì)之間必需有確定的計(jì)量關(guān)系；、被測物質(zhì)和所生成的有色物質(zhì)之間必需有確定的計(jì)量關(guān)系；2、反響產(chǎn)物必需有較高的吸光才干、反響產(chǎn)物必需有較高的吸光才干103105和足夠的和足夠的穩(wěn)定性；穩(wěn)定性；3、反響產(chǎn)物的顏色與顯色劑的顏色必需有明顯的差別；、反響產(chǎn)物的顏色與顯色劑的顏色必需有明顯的差別；4、顯色反響必需有較好的選擇性

55、，以減免干擾。、顯色反響必需有較好的選擇性，以減免干擾。1 1、顯色劑用量、顯色劑用量2 2、溶液酸堿度、溶液酸堿度3 3、顯色時(shí)間、顯色時(shí)間4 4、溫度、溫度5 5、溶劑、溶劑二顯色條件的選擇顯色劑用量可經(jīng)過實(shí)驗(yàn)選擇，在固定金屬離子濃度的情況下，顯色劑用量可經(jīng)過實(shí)驗(yàn)選擇，在固定金屬離子濃度的情況下，作吸光度作吸光度A隨顯色濃度隨顯色濃度c的變化曲線，選取吸光度恒定時(shí)的顯色的變化曲線，選取吸光度恒定時(shí)的顯色劑用量。劑用量。1、顯色劑用量酸堿度對顯色反響影響極大。酸堿度對顯色反響影響極大。如如Fe3+Fe3+與水楊酸的配合物，組成隨介質(zhì)與水楊酸的配合物，組成隨介質(zhì)pHpH值的不同而變化。值的不同

56、而變化。pHpH值范圍值范圍 絡(luò)合物組成絡(luò)合物組成 顏顏 色色 1.84 1.84 Fe(C7H4O3)+ Fe(C7H4O3)+ 紫紅色紫紅色 47 47 Fe(C7H4O3)2- Fe(C7H4O3)2- 棕褐色棕褐色 810 Fe(C7H4O3)33-810 Fe(C7H4O3)33- 黃色黃色適宜的適宜的pHpH值可以經(jīng)過繪制值可以經(jīng)過繪制A-pHA-pH曲線來確定。曲線來確定。 選擇平坦處對選擇平坦處對應(yīng)應(yīng)pH值值2、溶液酸堿度、溶液酸堿度由于各種顯色反響的速度不同，且介質(zhì)酸度、顯色劑的濃由于各種顯色反響的速度不同，且介質(zhì)酸度、顯色劑的濃度都將會(huì)影響顯色時(shí)間。度都將會(huì)影響顯色時(shí)間。必

57、需固定其他顯色條件，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)作出必需固定其他顯色條件，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)作出A-tA-t曲線，才干確定曲線，才干確定適宜的顯色時(shí)間和測定時(shí)間。適宜的顯色時(shí)間和測定時(shí)間。3、顯色時(shí)間顯色反響須在適當(dāng)溫度下進(jìn)展。顯色反響須在適當(dāng)溫度下進(jìn)展。普通的顯色反響也可以在室溫下進(jìn)展。普通的顯色反響也可以在室溫下進(jìn)展。4、溫度溶液的性質(zhì)可直接影響被測物質(zhì)對光的吸收，且顯色反響產(chǎn)物溶液的性質(zhì)可直接影響被測物質(zhì)對光的吸收，且顯色反響產(chǎn)物的穩(wěn)定性也與溶劑有關(guān)。的穩(wěn)定性也與溶劑有關(guān)?？辔端嵩谒芤褐谐庶S色，在三氯甲烷在呈無色。苦味酸在水溶液中呈黃色，在三氯甲烷在呈無色。硫氰酸鐵紅色配合物在丁醇中比在水溶液中穩(wěn)定。硫氰酸鐵紅色配

58、合物在丁醇中比在水溶液中穩(wěn)定。5、溶劑溶溶 劑劑截止波長截止波長nm溶溶 劑劑截止波長截止波長nm水水200 環(huán)己烷環(huán)己烷200 乙乙 腈腈210 正己烷正己烷220 95%乙醇乙醇210 二氯甲烷二氯甲烷235 乙乙 醚醚210 三氯甲烷三氯甲烷245 異丙醇異丙醇210 四氯化碳四氯化碳265 正丁醇正丁醇210 苯苯280 甲甲 醇醇215 丙丙 酮酮330 第四節(jié)第四節(jié) 紫外紫外- -可見分光光度法的運(yùn)用可見分光光度法的運(yùn)用一、定性分析一、定性分析二、純度檢查二、純度檢查三、定量分析三、定量分析四、構(gòu)造分析四、構(gòu)造分析五、運(yùn)用與例如五、運(yùn)用與例如利用紫外吸收光譜的外形、吸收峰的數(shù)目、各

59、吸收峰的波長利用紫外吸收光譜的外形、吸收峰的數(shù)目、各吸收峰的波長和相應(yīng)的吸收系數(shù)等可對部分有機(jī)化合物進(jìn)展定性鑒別。和相應(yīng)的吸收系數(shù)等可對部分有機(jī)化合物進(jìn)展定性鑒別。3.3.吸收峰的數(shù)目吸收峰的數(shù)目1. 1.吸收光譜外形吸收光譜外形2.2.各吸收峰的波長各吸收峰的波長4.4.相應(yīng)波優(yōu)點(diǎn)的吸收系數(shù)相應(yīng)波優(yōu)點(diǎn)的吸收系數(shù)一、定性分析一、定性分析定性分析方法：對比法定性分析方法：對比法1、比較吸收光譜的一致性、比較吸收光譜的一致性兩個(gè)一樣化合物，在同一條件下測定其吸收光譜應(yīng)完全一致。兩個(gè)一樣化合物，在同一條件下測定其吸收光譜應(yīng)完全一致。一、定性分析一、定性分析例例 安宮黃體酮和炔諾酮分子中都存在安宮黃體

60、酮和炔諾酮分子中都存在、-不飽和羰基的不飽和羰基的特征吸收構(gòu)造，最大吸收波長一樣但相對分子量不同，有明特征吸收構(gòu)造，最大吸收波長一樣但相對分子量不同，有明顯差別，可用于鑒別。顯差別，可用于鑒別。OCH3CH3HHHCH3CH3OCOCH3COOHHHCH3OHCCH安宮黃體酮安宮黃體酮M386.53 炔諾酮炔諾酮M= 298.43 max2401nm max2401nm 4084081%1cmE 5715711%1cmE2 2、比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)、比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)一、定性分析一、定性分析3、比較吸光度或吸收系數(shù)比值、比較吸光度或吸收系數(shù)比值有多個(gè)吸收峰的化合物，可利用在不同吸收峰或峰