蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)(1)ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn) 王 偉 中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?. 加深了解所學(xué)有關(guān)的蛋白質(zhì)性質(zhì)的實(shí)際加深了解所學(xué)有關(guān)的蛋白質(zhì)性質(zhì)的實(shí)際知識(shí)知識(shí)2. 掌握氨基酸和蛋白質(zhì)常用的定性、定量掌握氨基酸和蛋白質(zhì)常用的定性、定量分析的方法及原理分析的方法及原理 實(shí)驗(yàn)原理v一、蛋白質(zhì)呈色反響一、蛋白質(zhì)呈色反響v二、蛋白質(zhì)沉淀反響二、蛋白質(zhì)沉淀反響一、蛋白質(zhì)呈色反響一、蛋白質(zhì)呈色反響v蛋白質(zhì)的呈色反響是指蛋白質(zhì)所含的某些氨基酸及蛋白質(zhì)的呈色反響是指蛋白質(zhì)所含的某些氨基酸及其特殊構(gòu)造，在一定條件下可與某些試劑發(fā)生了生其特殊構(gòu)造，在一定條件下可與某些試劑發(fā)生了生成有色物質(zhì)的反響。

2、不同蛋白質(zhì)分子所含的氨基酸成有色物質(zhì)的反響。不同蛋白質(zhì)分子所含的氨基酸殘基不完全一樣，因此所發(fā)生的成色反響也不完全殘基不完全一樣，因此所發(fā)生的成色反響也不完全一樣。一樣。v呈色反響并不是蛋白質(zhì)的專注反響。因此，不能僅呈色反響并不是蛋白質(zhì)的專注反響。因此，不能僅僅根據(jù)呈色反響的結(jié)果為陽(yáng)性就來(lái)判別被測(cè)物質(zhì)一僅根據(jù)呈色反響的結(jié)果為陽(yáng)性就來(lái)判別被測(cè)物質(zhì)一定是蛋白質(zhì)，至少要用定是蛋白質(zhì)，至少要用2種以上的方法來(lái)鑒別。種以上的方法來(lái)鑒別。蛋白質(zhì)呈色反響蛋白質(zhì)呈色反響一米倫氏反響一米倫氏反響二雙縮脲反響二雙縮脲反響三蛋白黃反響三蛋白黃反響四茚三酮反響四茚三酮反響一米倫氏反響一米倫氏反響v蛋白質(zhì)溶液中參與米倫

3、試劑(亞硝酸汞、硝酸汞及硝酸的混和液)，蛋白質(zhì)首先沉淀，加熱那么變?yōu)榧t色沉淀，此為酪氨酸的酚核所特有的反響，因此含有酪氨酸的蛋白質(zhì)均呈米倫反響。 二雙縮脲反響二雙縮脲反響當(dāng)尿素經(jīng)加熱至180左右時(shí)，兩分子尿素脫去一分子氨，進(jìn)而縮合成一分子雙縮脲。其在堿性條件下雙縮脲與銅離子結(jié)合成紅紫色絡(luò)合物，此反響稱為雙縮脲反響。蛋白質(zhì)在堿性溶液中與硫酸銅作用呈現(xiàn)紫紅色，此類似反響也稱蛋白質(zhì)的雙縮脲反響。凡分子中含有兩個(gè)以上肽鍵的化合物都呈此反響，故一切蛋白質(zhì)都能與雙縮脲試劑發(fā)生反響。 v反響過(guò)程如下：v COH2NH2N+COH2NH2N1800CH2NCNHCNH2OO+NH3三蛋白黃反響三蛋白黃反響 在

4、蛋白質(zhì)分子中，具有芳香環(huán)的氨基酸(如酪氨酸，色氨酸等)殘基上的苯環(huán)經(jīng)硝酸作用可生成黃色的硝基化合物，在堿性條件下生成物可轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色的硝醌衍生物; 此蛋白黃反響以苯酚為例為: OH+HNO3HONO2+H2OHONO2+NaOHONOHOH四茚三酮反響四茚三酮反響 在弱酸條件下pH5-7，蛋白質(zhì)或氨基酸與茚三酮共熱，可生成藍(lán)紫色縮合物。此反響為一切蛋白質(zhì)和氨基酸所共有(亞氨基酸如脯氨酸和羥脯氨酸產(chǎn)生黃色化合物),含有氨基的其他化合物亦能夠發(fā)生此反響。v反響第一步:COCOCOHOH+CCOOHHNH2RCOCOCHOH+RCHONH3CO2+復(fù)原茚三酮v反響第二步:COCOCHOH+COCOC

5、COCOCO+2NH3NH2COCOCN+2H2O藍(lán)紫色縮合物二、蛋白質(zhì)沉淀反響二、蛋白質(zhì)沉淀反響v蛋白質(zhì)是親水膠體，正常形狀下，蛋白質(zhì)分子外表具有水化膜和雙電層，能堅(jiān)持其膠體溶液的穩(wěn)定性，在一定要素的影響下，蛋白質(zhì)會(huì)失去電荷和脫水沉淀。v v蛋白質(zhì)的變性與沉淀之間沒(méi)有必然聯(lián)絡(luò)蛋白質(zhì)沉淀反響蛋白質(zhì)沉淀反響一蛋白質(zhì)的鹽析作用一蛋白質(zhì)的鹽析作用二乙醇沉淀蛋白質(zhì)二乙醇沉淀蛋白質(zhì)三重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)三重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)四生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)四生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)的鹽析作用一蛋白質(zhì)的鹽析作用v加鹽類如硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等可以破壞蛋白質(zhì)膠體周圍的水膜，同時(shí)又中和了蛋白質(zhì)分子的電荷，因此使蛋

6、白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這種加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的景象稱鹽析v鹽溶景象為低鹽濃度可使蛋白質(zhì)的溶解度添加，實(shí)驗(yàn)時(shí)要加足夠量的鹽v蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程，用鹽析方法沉淀蛋白質(zhì)時(shí)，較少引起蛋白量變性，經(jīng)透析或用水稀釋時(shí)又可溶解二乙醇沉淀蛋白質(zhì)二乙醇沉淀蛋白質(zhì)v有機(jī)溶劑如酒精、丙酮等可使蛋白質(zhì)產(chǎn)生沉淀，這是由于這些有機(jī)溶劑和水有較強(qiáng)的作用，破壞了蛋白質(zhì)分子周圍的水膜，因此發(fā)生沉淀作用。假設(shè)及時(shí)將蛋白質(zhì)沉淀與丙酮或乙醇分別，蛋白質(zhì)沉淀那么可重新溶解于水中。三重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)三重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)v溶液pH在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以上時(shí)，重金屬鹽類(如Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性鹽而

7、沉淀。v重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)通常比較完全，故常用重金屬鹽除去液體中的蛋白質(zhì)。但應(yīng)留意，在運(yùn)用某些重金屬鹽(如硫酸銅或醋酸鉛)沉淀蛋白質(zhì)時(shí)，不可過(guò)量，否那么將引起沉淀再溶解。此時(shí)的溶解為生成憎水膠體的緣故。四生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)四生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)v生物堿是植物中具有顯著生理作用的類含氮的堿性物質(zhì)。凡能使生物堿沉淀，或能與生物堿作用產(chǎn)生顏色反響的物質(zhì)，稱為生物堿試劑。如鞣酸、苦味酸和磷鎢酸等。v當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液pH值低于其等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)為陽(yáng)離子，能與生物堿試劑的陰離子結(jié)合成性鹽而沉淀。v溶液中的蛋白亦能被有機(jī)酸沉淀，其中以三氯醋酸的作用最為靈敏而且特異。因此被用于蛋白質(zhì)的首選沉淀劑，只能沉淀蛋白

8、質(zhì)，不能沉淀其水解產(chǎn)物，加熱可除去。實(shí)驗(yàn)資料一、實(shí)驗(yàn)資料： 雞卵清蛋白液，吸管1mlx4，2mlx4，0.5mlx1，5mlx2，試管1.5x15cmx14，水浴鍋，滴管，電爐二、實(shí)驗(yàn)試劑： 苯酚0.5%，米倫試劑，茚三酮0.1%，尿素，NaOH10%，硫酸銅1%，硫酸銨固體，95%乙醇，NaCl，醋酸鉛，鞣酸，苦味酸，冰醋酸實(shí)驗(yàn)操作v顏色反響v沉淀反響顏色反響按以下圖操作1、米倫氏反響： Pr + 米倫試劑 白色沉淀 紅色2、雙縮脲反響： 3、蛋白黃反響：Pr + 34d濃HNO3察看，再加NaOH，再察看4、茚三酮反響：Pr + 茚三酮0.5ml沸水浴 察看顏色變化 加熱沉淀反響按以下圖操作 1、鹽析：、鹽析： Pr+ (NH4)2SO4 粉末粉末 沉淀沉淀 察看察看 2、乙醇：、乙醇： Pr+ 95% 乙醇乙醇 沉淀沉淀 3、重金屬離子：、重金屬離子： Pr+ 醋酸鉛或硫酸銅醋酸鉛或硫酸銅 沉淀沉淀 4、生物堿試劑：、生物堿試劑： Pr+ 鞣酸或苦味酸鞣酸或苦味酸 沉淀沉淀 加水實(shí)驗(yàn)本卷須知(1)