歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法的區(qū)別

1、-作者xxxx-日期xxxx歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法的區(qū)別【精品文檔】色 譜 定 量 方 法一、歸一化法由于組分的量與其峰面積成正比，如果樣品中所有組分都能產(chǎn)生信號，得到相應(yīng)的色譜峰，那么可以用如下歸一化公式計算各組分的含量。(7.34)若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，直接用峰面積歸一化進(jìn)行計算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度。(7.35) 歸一化法的優(yōu)點是：簡便、準(zhǔn)確、定量結(jié)果與進(jìn)樣量重復(fù)性無關(guān)(在色譜柱不超載的范圍內(nèi))、操作條件略有變化時對結(jié)果影響較小。缺點是：必須所有組分在一個分析周期內(nèi)都流出色譜柱，而且檢測器對它們都產(chǎn)生信號。不適于

2、微量雜質(zhì)的含量測定。二、外標(biāo)法用待測組分的純品作對照物質(zhì)，以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法稱為外標(biāo)法。此法可分為工作曲線法及外標(biāo)一點法等。工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算，工作曲線法也可以用外標(biāo)二點法代替。通常截距應(yīng)為零，若不等于零說明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時，可用外標(biāo)一點法(直接比較法)定量。 外標(biāo)一點法是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中i組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在相同條件下多

3、次進(jìn)樣，測得峰面積的平均值，用下式計算樣品中i組分的量：WA(W)(A)(7.36)式中W與A分別代表在樣品溶液進(jìn)樣體積中所含i組分的重量及相應(yīng)的峰面積。(W)及(A)分別代表在對照品溶液進(jìn)樣體積中含純品i組分的重量及相應(yīng)峰面積。外標(biāo)法方法簡便，不需用校正因子，不論樣品中其他組分是否出峰，均可對待測組分定量。但此法的準(zhǔn)確性受進(jìn)樣重復(fù)性和實驗條件穩(wěn)定性的影響。此外，為了降低外標(biāo)一點法的實驗誤差，應(yīng)盡量使配制的對照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。三、內(nèi)標(biāo)法選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法?！皟?nèi)標(biāo)”的由來

4、是因為標(biāo)準(zhǔn)(對照)物質(zhì)加入到樣品中，有別于外標(biāo)法。該對照物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。在一個分析周期內(nèi)不是所有組分都能流出色譜柱(如有難氣化組分)，或檢測器不能對每個組分都產(chǎn)生信號，或只需測定混合物中某幾個組分的含量時，可采用內(nèi)標(biāo)法。準(zhǔn)確稱量W克樣品，再準(zhǔn)確稱量W克內(nèi)標(biāo)物，加入至樣品中，混勻，進(jìn)樣。測量待測組分i的峰面積A及內(nèi)標(biāo)物的峰面積A，則i組分在W克樣品中所含的重量W，與內(nèi)標(biāo)物的重量W，有下述關(guān)系：(7.37)待測組分i在樣品中的百分含量C為：(7.38)對內(nèi)標(biāo)物的要求；內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物的峰面積；內(nèi)標(biāo)物的保留時間應(yīng)與待測組分相近，但彼此能完全分離(R1.5)；內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點是：在進(jìn)樣量不超限(色譜柱不超載)的范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)樣量的重復(fù)性無關(guān)。只要被測組分及內(nèi)標(biāo)物出峰，且分離度合乎要求，就可定量，與其他組分是否出峰無關(guān)。很適用于測定藥物中微量有效成分或雜質(zhì)的含量。由于雜質(zhì)(或微量組分)與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定含量，用內(nèi)標(biāo)法則很方便。加一個與