工業(yè)微生物學實驗試卷A0809答案

1、2008-2009學年第 一學期本科試卷 學 院: 專 業(yè): 學號: 姓名: 裝訂線 學院課程名稱:工業(yè)微生物學實驗(a) 答案題號一二三四五六七八總成績得分得分一、名詞解釋（共20分，每小題4分）1. 無菌操作：培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，用經(jīng)過滅菌的接種工具在無菌條件下接種含菌材料于培養(yǎng)基上，這一操作稱為無菌操作。2. 培養(yǎng)基：是人工配制的能滿足微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質。3. 假菌絲: 酵母生長旺盛時，出芽形成的芽細胞尚未脫離母細胞又長出了新芽，容易形成成串的細胞。如果各細胞之間連接處面積小于細胞直徑，形成的這種藕節(jié)狀的細胞串稱為假菌絲。4. 大腸菌群: 大腸菌群系指一群在37、24h能

2、發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。5. 細菌菌落總數(shù): 指被檢樣品通過一定的處理方法，培養(yǎng)一段時間后，每毫升或每毫克樣品中所含細菌的菌落數(shù)。由于經(jīng)過適當稀釋的樣品中每個細胞可形成一個單菌落，所以菌落數(shù)即是細菌活菌總數(shù)。得分二、判斷題（共10分，每題1分）1無菌吸管上端塞入棉花的主要目的是為了防止菌液吸入口中（ a ）。 a.錯 b.對2稀釋平板計數(shù)時，細菌，放線菌，真菌的計數(shù)標準是選擇每皿中菌落數(shù)在30-300個的稀釋度進行計數(shù)（ a ）。 a.錯 b.對3為了滿足微生物對微量元素的需要，配制培養(yǎng)基所用的水最好使用自來水（ b）。 a.錯 b.對4實驗室通常使用血球計

3、數(shù)板測酵母菌的總菌數(shù)或霉菌的孢子數(shù)（ b ）。a.錯 b.對5浸油的油鏡鏡頭可用軟的衛(wèi)生紙擦凈（ a ）。a.錯 b.對6稀釋平板計數(shù)通常采用的是二倍稀釋法（ a ）。a.錯 b.對7使用手提滅菌鍋滅菌后，為了盡快排除鍋內蒸汽，可直接打開排氣閥排氣（ a ）。a.錯 b.對8鏡臺測微尺每小格的實際長度是10微米（ b ）。a.錯 b.對9用血球計數(shù)板計數(shù)時，任數(shù)5個大方格(80個小格)的菌數(shù)即可（ a ）。a.錯 b.對10測微生物的細胞大小時，需要校正的是鏡臺測微尺每格的實際長度（ a ）。a.錯 b.對得分三、填空題（共15分，每空0.5分）1. 檢查乳品和飲料是否含有大腸桿菌(e.col

4、i)等腸道細菌，可采用_伊紅美蘭_培養(yǎng)基，在這種培養(yǎng)基平板上_能分解乳糖產(chǎn)酸的菌_（大腸菌群）_會形成具有_金屬_光澤的紫黑色小菌落。2測定酵母細胞出芽率時，芽體的標準是 小于細胞的1/2 ，如果視野中的芽體數(shù)為15個，細胞數(shù)為60個，則出芽率為 25% 。3請寫出以下菌種的拉丁學名: 大腸桿菌 e.coli(escherichia coli) ，枯草芽孢桿菌 bacillus subtilis ，釀酒酵母 s. cerevisiae（saccharomyces cerevisiae） 。4顯微鏡的光學系統(tǒng)由_目鏡_、_物鏡_、集光器、彩虹光闌、反光鏡和光源組成。5. 培養(yǎng)基按其來源主要分為

5、天然 培養(yǎng)基，半合成 培養(yǎng)基和 合成 培養(yǎng)基。6. 革蘭氏染色反應與細菌細胞壁的_成分_和_結構_有關。革蘭氏染色的一般過程主要包括 制片 ，固定, 結晶紫初染1分鐘 ， 碘液媒染 ， 95%乙醇脫色30s ， 番紅復染30s ，水洗和鏡檢等步驟。在操作過程中， 最關鍵的步驟是 脫色 。 經(jīng)革蘭氏染色后, 大腸桿菌被染成 紅 色， 八疊球菌被染成 紫 色。7. 顯微測微尺主要由 目鏡 測微尺和 鏡臺 測微尺組成， 在進行細胞大小測定之前, 目鏡 測微尺要先進行標定。8. 在細菌生理生化實驗中, 三糖鐵高層瓊脂中含有的糖主要有葡萄糖, 蔗糖, 乳糖三種糖。 其中， 葡萄糖 是另外兩種糖含量的1/

6、10倍， 其斜面含有指示劑酚紅, 它在ph小于6.8時為黃色，大于8.4時為紅色，傷寒沙門氏菌在該培養(yǎng)基中生長一定時間后, 其斜面的顏色為 紅 色，大腸桿菌為 黃 色。9. 利用麥氏計數(shù)板計數(shù)時， 在麥氏計數(shù)板一個滴加稀釋10倍的樣品, 按對角線方位, 左上, 右上, 左下, 右下四個大格的細胞數(shù)分別為64個, 100個, 80個, 96個. 則每毫升菌液中所含的酵母細胞數(shù)為 1.36108 。得分四、選擇題（共20分 每題1分）1. 微生物實驗室對培養(yǎng)皿的滅菌常采用（ c ）。a間歇滅菌，兩次， 100 ，每次 1 小時 b. 常壓滅菌， 100 ， 1小時c. 干熱滅菌， 140 ， 3-

7、4小時 d. 巴斯德滅菌， 60 ， 1小時2. 霉菌菌絲觀察主要利用（ c ）作介質。a.無菌水 b.生理鹽水c.乳酸苯酚油 d.二甲苯3. 肉湯培養(yǎng)基用來培養(yǎng)（ c ）。a.酵母菌 b.霉菌c.細菌 d.放線菌4. 在使用顯微鏡油鏡時，為了提高分辨力，通常在鏡頭和蓋玻片之間滴加（ c ）。a.二甲苯 b.水 c.香柏油 d.無菌水5高壓蒸汽滅菌的工藝條件是（ a ）。a.121/20min b.115/20minc.130/20min d. 170-180 /20min6. 明膠液化實驗，明膠的水解是由于細菌所產(chǎn)生的（ c ）的作用。a. 脂肪酶 b. 纖維素酶 c. 蛋白酶 d. 淀粉酶

8、7. 新玻璃器皿在清洗之前，應先將其浸泡在（ c ）中數(shù)小時，然后再用自來水清洗干凈。a. 10%氫氧化鈉溶液 b. 濃鹽酸溶液 c. 2%鹽酸溶液 d. 濃硫酸溶液8. 下列霉菌中有足細胞的霉菌為（ d ）。a. 毛霉 b. 青霉 c. 根霉 d. 曲霉9半固體培養(yǎng)基的主要用途是（ c ）。a.檢查細菌的運動性 b.檢查細菌的好氧性c.a.b.兩項 d.都不對10. 使用手提式滅菌鍋滅菌的關鍵操作是（ a ）。a.排冷氣徹底 b.保溫時間適當c.滅菌完后排氣不能太快 d.a-c 11酵母菌水浸制片的關鍵操作是（ c ）。a.菌絲要分散 b.菌絲首先要用50%的乙醇浸潤c.蓋蓋玻片不能有氣泡

9、d.a-c12干熱滅菌過程中如發(fā)現(xiàn)干燥箱出現(xiàn)故障，里面冒出黑煙，應采取（ b ）。a.立即打開箱門 b.立即關掉電源c.潑水降溫 d.a-c13下列哪些微生物，產(chǎn)生的抗生素種類最多（ b ）。a細菌 b放線菌 c霉菌 d病素14 在細菌總數(shù)的測定中，樣品10-1稀釋度制作的平板上的菌落數(shù)為多不可計，10-2稀釋度制作的平板上的菌落數(shù)為200個，10-3稀釋度平板上的菌落數(shù)為50個，則該樣品的菌落總數(shù)應報告為（ a ）a2.0104 b5.0104 c3.5104 d4.010415下列培養(yǎng)基中， 哪種培養(yǎng)基不是培養(yǎng)酵母常用的培養(yǎng)基（ d ）。a. 麥芽汁培養(yǎng)基 b. 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基c.

10、 yepd培養(yǎng)基 d. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 16常用的消毒酒精濃度為（ a ）。a.75% b.50% c.90% d.95%17在下列微生物中（b ）屬于革蘭氏陽性細菌。a. 大腸桿菌 b金黃色葡萄球菌 c痢疾桿菌 d黑根霉18半固體培養(yǎng)基的瓊脂加入量通常是（ a ）。a. 0.8%-1.0%b.0.2-0.5%c.0.1-0.3%d.2%19.“pda”表示( a )。a.馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基 b.高氏培養(yǎng)基 c.肉湯培養(yǎng)基 d.察氏培養(yǎng)基20進行簡單染色使用的染色液通常是（ d ）。a.復紅 b.蕃紅 c.結晶紫 d.a-c均可得分五、問答題（共35分）1. 簡要描述微生物菌種保藏的原理及

11、常用方法?(4分)答：保藏菌種的基本原理，是使微生物的代謝活動，降到極低程度，處于休眠狀態(tài)。（1分）一般采用低溫、干燥和隔絕空氣來達到此目的。（1分）菌種保藏的方法包括：（2分）（1）斜面低溫保藏法（2）礦物油（液體石蠟）斜面保藏法（3）沙土管保藏法（4）液氮保藏法。（5）真空冷凍干燥保藏法2以大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌為例，說明其在vp實驗與mr實驗中的結果為什么剛好相反？（6分）答：多數(shù)細菌能分解葡萄糖，但分解葡萄糖的途徑和產(chǎn)物不完全相同（1分）。例如大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，若繼續(xù)代謝還能生成其它有機酸和醛，醇等化合物（1分）。其中，大腸桿菌所產(chǎn)生的酸能使培養(yǎng)液的ph值降到4

12、.2或更低，可使甲基紅指示劑變成紅色，并至少持續(xù)4天之久（1分）。和mr試驗一樣，v-p試驗也是檢驗微生物利用葡萄糖產(chǎn)酸的能力。產(chǎn)氣腸桿菌利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后，可進一步使一部分丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在強堿環(huán)境中，能被空氣中的氧氣氧化，生成雙乙酰，雙乙酰與蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成紅色化合物。此即為v-p試驗陽性。當在試管中加入萘酚時，可以促進反應的進行（2分）。對于一種微生物，mr試驗陽性，v-p反應一定陰性，反之亦然。（1分）3以青霉和曲霉為例, 說明小室培養(yǎng)的操作過程。（5分）答： 曲霉和青霉的小室培養(yǎng)接種：取一培養(yǎng)皿，內放一層吸潤20%甘油（可以用水代替）的

13、濾紙，放u形玻棒。（1分）取一干燥無菌的載玻片和蓋玻片，于載玻片的一邊滴加融化的pda（或察氏培養(yǎng)基），點種孢子，并將蓋玻片蓋與其上（2分）；要求中央的培養(yǎng)基直徑不大于0.5cm，蓋、載玻片間距離不高于0.1mm。（1分）然后將制好的載片放入培養(yǎng)皿中的玻棒上，蓋好皿蓋，30正置培養(yǎng)。可以在培養(yǎng)不同時間直接置干燥系物鏡下觀察（1分）。4酵母測定死亡率的原理，方法及計算公式。（6分）答：死亡率測定的原理：活的微生物，由于不停的新陳代謝，使細胞內氧化還原值低，且還原能力強（1分）。當某種無毒的染料進入活細胞后，可以被還原脫色；當染料進入死細胞后，這些細胞因無還原能力或還原能力差而被著色（1分）。在中

14、性和弱酸性條件下，活的細胞原生質不能被染色劑著色，若著色則表示細胞已經(jīng)死亡，故可以此來區(qū)分活菌和死菌（1分）。方法：取0.05%美藍液一滴，置載玻片中央，然后取酵母液少許加入美藍液中混勻，染色23分鐘，加蓋片，于高倍鏡下進行觀察，并計數(shù)已變藍的細胞（可計56個視野的細胞總數(shù)）。（2分）計算公式：（1分）5硝酸鹽利用試驗結果觀察時，若使用淀粉液、hcl、ki和鋅粉檢測結果，簡述檢測過程。（6分）答：從空白對照管中取出一半培養(yǎng)基裝入干凈的試管中，向其中一支管內加入加3滴試劑2%淀粉之后再加5滴6mol/l的鹽酸溶液，搖勻，再加2滴5%碘化鉀溶液，搖勻，若顏色變紅色，說明培養(yǎng)基中本身含有亞硝酸鹽，應

15、重新配置，若顏色不變藍色為合格（2分）；在另一空白試管中，加入鋅粉少許，搖動，然后照上法加試劑，若培養(yǎng)基變藍色，說明培養(yǎng)基良好，否則，應重新制備培養(yǎng)基（1分）。在空白培養(yǎng)基合格的前提下，取已培養(yǎng)好的菌液試管一支，倒出一半到一干凈的空試管中，其中一支按照上法直接加試劑2%淀粉、6mol/l的鹽酸溶液、5%碘化鉀溶液，變藍色者說明試驗菌能還原硝酸鹽成亞硝酸鹽（1分）；若不變藍，則取另一半培養(yǎng)液，先加入鋅粉，搖勻，再如上法加入試劑，若變藍，說明試驗菌不能還原硝酸鹽；若不變色，說明試驗菌將硝酸鹽還原成氮和氨，試驗陽性（2分）。6.以牛奶為例，細菌菌落總數(shù)的檢驗程序及測定過程。（8分）答：菌落總數(shù)的檢驗程序如下：（3分）被檢樣品用生理鹽水進行無菌稀釋，作成幾個適當稀釋倍數(shù)的懸液選擇23個適宜稀釋度懸液各1ml，加入無菌空培養(yǎng)皿內，每個稀釋度做23個培養(yǎng)皿每個培養(yǎng)皿中傾注約15ml融化并冷卻到45左右的營養(yǎng)瓊脂或肉湯瓊脂培養(yǎng)基，冷凝后，于37培養(yǎng)24h菌落計數(shù)報告測定過程：(1) 檢樣稀釋：以無菌操作，將被檢樣25克（或25毫升）剪碎、混勻，放入含225毫升無菌生理鹽水的三角瓶（瓶內先放置適當數(shù)量的玻璃珠）或無菌研缽內，經(jīng)充分振蕩或研磨，按十倍稀釋法進行梯度稀釋。根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或對被檢樣