中大生化復(fù)習(xí)題1

1、基因表達(dá)：指細(xì)胞在生命過程中，把儲(chǔ)存在dna順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子。粘性末端：當(dāng)一種限制性內(nèi)切酶在一個(gè)特異性的堿基序列處切斷dna時(shí)，就可在切口處留下幾個(gè)未配對的核苷酸片段，即5突出。這些片斷可以通過重疊的5末端形成的氫鍵相連，或者通過分子內(nèi)反應(yīng)環(huán)化。因此稱這些片段具有粘性，叫做粘性末端。限制性核酸內(nèi)切酶：生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來的dna切斷的酶，即能夠限制異源dna的侵入并使之失去活力，但對自己的dna卻無損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在dna分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶(

2、簡稱限制酶)。endostatin：內(nèi)皮抑素(endostatin) 是目前作用最強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)效果最好的腫瘤血管生成抑制劑。 線粒體dna?。?線粒體基因組中發(fā)生基因突變所導(dǎo)致的一類疾病，其傳遞和表達(dá)完全不同于由核基因突變引起的疾病，是一組獨(dú)特的遺傳病，稱為線粒體基因病。hdl 高密度脂蛋白：它運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，動(dòng)脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈顯著的負(fù)相關(guān)。所以高密度脂蛋白是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子。俗稱“血管清道夫”。載脂蛋白：血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白。主要在肝(部分在小腸)合成,分a、b、

3、c、d、e五類,具有運(yùn)載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識(shí)別受體等功能。平頭末端：限制酶的切口不都是一長一短的, 一長一短的叫黏性末端,一樣長的叫平末端.pedf：pedf，色素上皮衍生因子，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑基因家族，即能與絲氨酸蛋白酶的活性中心結(jié)合，有效地降低其酶活性，又不使酶蛋白酶變性的物質(zhì)。具有神經(jīng)保護(hù)作用，還具有很強(qiáng)的抑制血管的作用。 mtdna氧化損傷的易感性：線粒體基因組也叫線粒體dna(mtdna），mtdna可以獨(dú)立編碼線粒體中的一些蛋白質(zhì)是核外遺傳物質(zhì)。m13嗜菌體：m13噬菌體是一類特異的雄性大腸埃希菌噬菌體，只感染雄性大腸埃希菌，但m1

4、3噬菌體dna可以轉(zhuǎn)傳導(dǎo)進(jìn)入雌性大腸埃希菌。m13子代噬菌體通過細(xì)胞壁擠出，并不殺死細(xì)菌。為重組dna技術(shù)中常用的噬菌體克隆載體，主要用于克隆單鏈dna。 ldl：血漿脂蛋白的一種，是血液中膽固醇的主要載體。能轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇到外圍組織，并調(diào)節(jié)這些部位的血漿脂蛋白-膽固醇從頭合成。 端粒酶：端粒酶（telomerase），在細(xì)胞中負(fù)責(zé)端粒的延長的一種酶，是基本的核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶，可將端粒dna加至真核細(xì)胞染色體末端。端粒在不同物種細(xì)胞中對于保持染色體穩(wěn)定性和細(xì)胞活性有重要作用，端粒酶能延長縮短的端粒，從而增強(qiáng)體外細(xì)胞的增殖能力。端粒酶的存在，就是把 dna 克隆機(jī)制的缺陷填補(bǔ)起來，即由把端粒修復(fù)延長，

5、可以讓端粒不會(huì)因細(xì)胞分裂而有所損耗，使得細(xì)胞分裂克隆的次數(shù)增加。線粒體的半自主性：線粒體具有獨(dú)立的遺傳體系，雖然線粒體也能合成蛋白質(zhì)，但是合成能力有限。線粒體的核糖體蛋白、氨酰trna 合成酶、許多結(jié)構(gòu)蛋白，都是核基因編碼，在細(xì)胞質(zhì)中合成后，定向轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體的，因此稱線粒體為半自主細(xì)胞器。血漿脂蛋白：指哺乳動(dòng)物血漿（尤其是人）中的脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物。血漿脂蛋白可以把脂類（三酰甘油、磷脂、膽固醇）從一個(gè)器官運(yùn)輸?shù)搅硪粋€(gè)器官。lp 脂蛋白英文：lipoproteins，與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起形成的脂質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物。脂蛋白中脂質(zhì)與蛋白質(zhì)之間沒有共價(jià)鍵結(jié)合，多數(shù)是通過脂質(zhì)的非極性部分與蛋白質(zhì)組分之間以疏水

6、性相互作用而結(jié)合在一起。 vegf： 血管內(nèi)皮生長因子，屬血小板源性生長因子家族的生長因子，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂和血管的發(fā)生，提高單層內(nèi)皮的通透性，可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生?；蛭膸欤阂粋€(gè)生物體的基因組dna用限制性內(nèi)切酶部分酶切后，將酶切片段插入到載體dna分子中，所有這些插入了基因組dna片段的載體分子的集合體，將包含這個(gè)生物體的整個(gè)基因組，也就是構(gòu)成了這個(gè)生物體的基因文庫。 ox-ldl： 氧化的低密度脂蛋白（ox-ldl）是動(dòng)脈粥樣硬化的核心，當(dāng)血液中的低密度脂蛋白（ldl）被活性氧(ros)等自由基氧化后叫著“氧化的低密度脂蛋白”簡稱“ox-ldl”，他會(huì)進(jìn)入血管壁，1.ox-ld

7、l損壞血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞，并且讓內(nèi)皮細(xì)胞間隙變大；2.ox-ldl刺激單核細(xì)胞游走進(jìn)入血管壁；3.ox-ldl被巨噬細(xì)胞以及血管的平滑肌細(xì)胞的受體所吞噬，-形成泡沫細(xì)胞，4.ox-ldl使上述兩種泡沫細(xì)胞壞死崩解，形成糜粥樣壞死物，粥樣硬化斑塊形成。 基因表達(dá)：是指細(xì)胞在生命過程中，把儲(chǔ)存在dna順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子。生物體內(nèi)的各種功能蛋白質(zhì)和酶都是同相應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因編碼的。 血管新生：是從已有血管發(fā)芽生成新血管的過程。內(nèi)共生假說： 關(guān)于線粒體起源的一種學(xué)說。認(rèn)為線粒體來源于細(xì)菌，即細(xì)菌被真核生物吞噬后，在長期的共生過程中，通過演變，形成了線粒體。該學(xué)說認(rèn)為

8、：線粒體祖先原線粒體（一種可進(jìn)行三羧酸循環(huán)和電子傳遞的革蘭氏陰性菌）被原始真核生物吞噬后與宿主間形成共生關(guān)系。在共生關(guān)系中，對共生體和宿主都有好處：原線粒體可從宿主處獲得更多的營養(yǎng)，而宿主可借用原線粒體具有的氧化分解功能獲得更多的能量。端粒：端粒是線狀染色體末端的dna重復(fù)序列。 端粒是線狀染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，在正常人體細(xì)胞中，可隨著細(xì)胞分裂而逐漸縮短。分子克隆載體：在基因工程重組dna技術(shù)中將dna片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的dna分子。三種最常用的載體是細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒。膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用：高密度脂蛋白（hdl）是血液中密度最高、顆粒最小的一種脂蛋白，是

9、機(jī)體血脂代謝的重要物質(zhì)。目前研究最多的就是其參與體內(nèi)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過程。它可作為膽固醇的接受體，通過與受體相互作用介導(dǎo)膽固醇從動(dòng)脈壁內(nèi)膜流出并轉(zhuǎn)運(yùn)之到肝臟進(jìn)行代謝，從而降低血漿中的膽固醇水平，預(yù)防as的發(fā)生angiogenesis：血管新生 在原有血管網(wǎng)基礎(chǔ)上，通過內(nèi)皮細(xì)胞芽出而形成新生血管的復(fù)雜過程，涉及血管內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞向基質(zhì)降解處遷移、增殖、伸展及管狀結(jié)構(gòu)形成和內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)膜產(chǎn)生等多個(gè)步驟。 目的基因 ：把需要研究的基因稱為目的基因。（一般把需要分析的基因稱靶基因，在基因克隆過程中有時(shí)兩者均稱為插入基因，有時(shí)三者含義相近。）lcat ： 卵磷脂膽固醇脂?；D(zhuǎn)移酶：催化hd

10、l中卵磷脂2位上的脂?；D(zhuǎn)移到游離膽固醇的3位羥基上，使位于hdl表面的膽固醇酯化后向hdl內(nèi)核轉(zhuǎn)移，促進(jìn)hdl成熟及膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)?；匚慕Y(jié)構(gòu)： 雙鏈dna中含有的二個(gè)結(jié)構(gòu)相同、方向相反的序列稱為反向重復(fù)序列，也稱為回文結(jié)構(gòu)，每條單鏈以任一方向閱讀時(shí)都與另一條鏈以相同方向閱讀時(shí)的序列是一致的，例如5ggtacc3 3ccatgg5.短的回文結(jié)構(gòu)可能是一種特別的信號(hào)，如限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。較長的回文結(jié)構(gòu)容易轉(zhuǎn)化成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。發(fā)夾結(jié)構(gòu)的作用：控制轉(zhuǎn)錄的中止、翻譯的效率以及mrna的穩(wěn)定性?；蚬こ?： 又稱基因拼接技術(shù)和dna重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法

11、為手段，將不同來源的基因按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種dna分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。表達(dá)載體 ： 就是在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動(dòng)子、rbs、終止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。表達(dá)載體四部分：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因。血管增生抑制因子 ： 血管生成過程受到血管增生刺激因子和血管增生抑制因子的調(diào)節(jié)。常見的抑制因子有血管抑素 (angi0statin)、內(nèi)皮抑素 (endostatin)、色素上皮衍生因子(pedf)、kallistatin，腫瘤抑素 (tumstatin)等 。mtdna?。?線粒體基因組中發(fā)生基因

12、突變所導(dǎo)致的一類疾病，其傳遞和表達(dá)完全不同于由核基因突變引起的疾病，是一組獨(dú)特的遺傳病，稱為線粒體基因病。母系遺傳；（1）一般說，突變的mtdna的數(shù)量超過一定限度時(shí)，會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀。（閾值）（2）突變mtdna所占比例似與臨床癥狀的表現(xiàn)程度相關(guān)。傳遞突變的母親可為患者，也可是表現(xiàn)正常的雜質(zhì)攜帶者。leber 遺傳性視神經(jīng)病(leber hereditary optic neuropathy，lhon)是這類疾病的典型例子之一。質(zhì)粒： 是附加到細(xì)胞中的非細(xì)胞的染色體或核區(qū)dna原有的能夠自主復(fù)制的較小的dna分子（即細(xì)胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構(gòu)形，然而目前也發(fā)現(xiàn)有少數(shù)的

13、質(zhì)粒屬于線性構(gòu)形，它存在于許多細(xì)菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的線粒體等胞器中。 1什么是基因文庫？簡述常用的從基因文庫中篩選目標(biāo)基因的方法。答：將這些載體導(dǎo)入到受體細(xì)菌或細(xì)胞中，這樣每個(gè)細(xì)胞就包含了一個(gè)基因組dna片段與載體重組dna分子，經(jīng)過繁殖擴(kuò)增，許多細(xì)胞一起包含了該生物全部基因組序列，我們將這一個(gè)集合體叫做基因文庫。從基因文庫中篩選某一克隆的常用辦法是分子雜交。首先把屬于一個(gè)文庫的細(xì)菌或噬菌體以較低密度接種在培養(yǎng)皿上以取得相當(dāng)分散的菌落或噬菌斑，然后用硝酸纖維濾膜吸印，使培養(yǎng)皿和濾膜的相對應(yīng)的位置上具有相同的克隆。同時(shí)另行制備供分子雜交用的探針。為了篩選真核生物的某種基因，常從它的

14、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mrna經(jīng)反向轉(zhuǎn)錄合成相應(yīng)的互補(bǔ)dna(cdna)，再加入用32p標(biāo)記的核苷三磷酸，用dna多聚酶切口移位方法制成有同位素標(biāo)記的探針。把探針dna和硝酸纖維濾膜上的菌落或噬菌體分別進(jìn)行變性處理，然后進(jìn)行分子雜交。再將x光底片覆蓋在經(jīng)過處理的濾膜上以進(jìn)行放射自顯影。在培養(yǎng)皿上找出和x光底片上的黑點(diǎn)相對應(yīng)的菌落或噬菌斑。這些菌落或噬菌體中便包含著所需要的基因，經(jīng)過擴(kuò)增便能得到大量的細(xì)菌或噬菌體，從中可以分離出所需基因的dna片段。2淺談目的基因及其制備方法。把需要研究的基因稱為目的基因。（一）從細(xì)胞核中直接分離。直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將

15、供體細(xì)胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運(yùn)載體，然后通過運(yùn)載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細(xì)胞，擴(kuò)增，從中找出含有目的基因的細(xì)胞，再用一定的方法把帶有目的基因的dna片段分離出來。（二）染色體dna的限制性內(nèi)切酶酶解。ii型限制性內(nèi)切酶可專一性地識(shí)別并切割特定的dna順序，產(chǎn)生不同類型的dna末端。若載體dna與插入的dna片段用同一種內(nèi)切酶消化，或靶dna與載體dna末端具有互補(bǔ)的粘性末端，可以直接進(jìn)行連接。（三）人工體外合成。簡短的目的基因可在了解dna一級(jí)結(jié)構(gòu)或多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸編碼的核苷酸序列的基礎(chǔ)上人工合成。（四）用逆轉(zhuǎn)錄酶制備cdna。大多數(shù)的目的基因是由mrna合成cdna（反

16、轉(zhuǎn)錄dna）得到。（五）從基因文庫中獲取。依據(jù)：基因的核苷酸序列，功能，在染色體中的位置，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mrna，翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)性質(zhì)。（六）pcr技術(shù)擴(kuò)增3為什么線粒體dna容易受到損傷？mtdna表現(xiàn)為母系遺傳。由于其裸露于線粒體基質(zhì)中，既沒有組蛋白的結(jié)合保護(hù)，又缺少dna損傷的修復(fù)系統(tǒng)，所以極易發(fā)生突變，且突變結(jié)果容易保存下來，因此mtdna的突變率為核dna的10倍以上。1有些遺傳病，如leber遺傳性視神經(jīng)病，肌陣攣性癲癇等均與線粒體基因突變有關(guān)。4何謂ox-ldl？簡述其致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。答：氧化的低密度脂蛋白（ox-ldl）是動(dòng)脈粥樣硬化的核心，當(dāng)血液中的低密度脂蛋白（ldl）被活性

17、氧(ros)等自由基氧化后叫“氧化的低密度脂蛋白”簡稱“ox-ldl”，他會(huì)進(jìn)入血管壁，ox-ldl損壞血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞，并且讓內(nèi)皮細(xì)胞間隙變大；ox-ldl刺激單核細(xì)胞游走進(jìn)入血管壁；ox-ldl被巨噬細(xì)胞以及血管的平滑肌細(xì)胞的受體所吞噬，形成泡沫細(xì)胞，ox-ldl使上述兩種泡沫細(xì)胞壞死崩解，形成糜粥樣壞死物，粥樣硬化斑塊形成。5血管新生的“平衡失調(diào)假說及證據(jù)”。佛克曼首先建立的是兔眼角膜模型，另一個(gè)模型是雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)（cam）。人體在健康時(shí)，血管新生刺激因子和抑制因子同時(shí)存在，二者是矛盾的兩個(gè)方面，互相拮抗，使機(jī)體處于平衡狀態(tài)。對血管新生刺激因子來說，當(dāng)身體受傷時(shí)，會(huì)立刻征召新生血管

18、有利于修復(fù)組織缺損，另一方面，又會(huì)替腫瘤細(xì)胞招募新生血管，促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，損害機(jī)體，此時(shí)血管新生刺激因子是矛盾的主體。同理，血管新生抑制因子對機(jī)體也是又有利又有害。6簡述大腸桿菌表達(dá)體系的優(yōu)缺點(diǎn)。用途是基因工程主要原核受體菌。外源dna克隆和擴(kuò)增；原核基因高效表達(dá)；基因文庫構(gòu)建。優(yōu)點(diǎn)：遺傳背景清楚、載體受體系統(tǒng)完備、生長迅速、培養(yǎng)簡單、重組子穩(wěn)定1缺點(diǎn)：產(chǎn)結(jié)構(gòu)復(fù)雜、種類繁多的內(nèi)毒素7如何檢測端粒酶活性?一，trap-pcr銀染法：原理端粒dna與細(xì)胞的壽命密切相關(guān)，而合成又依賴于端粒酶。正常人體細(xì)胞中不能檢測出端粒酶活性的表達(dá)而腫瘤細(xì)胞株及大多數(shù)腫瘤組織中的端粒酶活性卻異常的高表達(dá)。tr

19、ap銀染法端粒酶活性檢測試劑盒是采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增的方法，利用銀染技術(shù)檢測端粒酶的活性。陽性結(jié)果在凝膠電泳上顯示相隔6 bp的梯狀條帶，條帶的深淺表示端粒酶活性的大小。二、熒光定量pcr法：原理端粒酶蛋白催化亞基tert或trt具有反轉(zhuǎn)錄酶的主要特征，其表達(dá)在正常細(xì)胞中受到抑制，與端粒酶活性的表達(dá)一致。實(shí)時(shí)熒光定量pcr端粒酶檢測實(shí)驗(yàn)通過檢測tert的mrna表達(dá)水平來間接反應(yīng)端粒酶的活性。8簡述mtdna結(jié)構(gòu)異常的可能原因。mtdna表現(xiàn)為母系遺傳。由于其裸露于線粒體基質(zhì)中，既沒有組蛋白的結(jié)合保護(hù)，又缺少dna損傷的修復(fù)系統(tǒng)，所以極易發(fā)生突變，且突變結(jié)果容易保存下來，因此mtdna的突變率

20、為核dna的10倍以上。1有些遺傳病，如leber遺傳性視神經(jīng)病，肌陣攣性癲癇等均與線粒體基因突變有關(guān)。9何謂限制性核酸內(nèi)切酶？寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別dna序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)?？梢宰R(shí)別dna的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈dna的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶。限制作用實(shí)際就是限制酶降解外源dna ，維護(hù)宿主遺傳穩(wěn)定的保護(hù)機(jī)制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤a和胞嘧啶c甲基化而受到保護(hù)。通過甲基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的10何謂血管抑制因子？試舉例說明。血管生成過程受到血管增生刺激因子和血管增生抑制因子的調(diào)節(jié)。常見的抑制因子有血管抑素 (angi0statin)、內(nèi)

21、皮抑素 (endostatin)、色素上皮衍生因子(pedf)、kallistatin，腫瘤抑素 (tumstatin)等 。11簡述類限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)？型限制性內(nèi)切酶只催化非甲基化的dna的水解。類酶有ecor i、bamh i、hind 、hind 等。其分子量小于105道爾頓；反應(yīng)只需mg2+；最重要的是在所識(shí)別的特定堿基順序上有特異性的切點(diǎn)，因而dna分子經(jīng)過類酶作用后，可產(chǎn)生特異性的酶解片斷，這些片斷可用凝膠電泳法進(jìn)行分離、鑒別。只具有認(rèn)知切割的作用，修飾作用由其他酵素進(jìn)行。所認(rèn)知的位置多為短的回文序列（palindrome sequence）；所剪切的堿基序列通常即為所認(rèn)

22、知的序列。是遺傳工程上，實(shí)用性較高的限制酶種類。例如：ecori、hind。12闡述腫瘤“饑餓療法”的依據(jù)和策略。腫瘤”與“血管”的關(guān)系是“樹”與“根”、“魚”與“水”的關(guān)系，“血管”就是腫瘤的“命門”，破壞或者清除腫瘤的血管，腫瘤必然死亡。血液腫瘤血管生成的實(shí)驗(yàn)研究提示，抑制血管生成勢必導(dǎo)致血液系統(tǒng)惡性細(xì)胞血供不足，營養(yǎng)缺乏，處于“饑餓”狀態(tài)，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這為提出抗血管生成治療的新策略提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。定向于血管生成的治療代表了一種特異的、毒性小而有效的治療方法。隨著對血管生成在血液系統(tǒng)惡性疾病中的深入研究，抗血管生成在臨床治療中的應(yīng)用必將取得更大的進(jìn)展。13以質(zhì)粒為例，說說基因載

23、體應(yīng)具備哪些條件？是染色質(zhì)外的雙鏈共價(jià)閉合環(huán)形dna能自主復(fù)制，是能獨(dú)立復(fù)制的復(fù)制子質(zhì)粒對宿主生存并不是必需的。14簡述血漿脂蛋白的分類及其功能。（1） 乳糜微粒(0.95g/cm3)，密度非常低，運(yùn)輸甘油三酯和膽固醇酯，從小腸到組織肌肉和adipose組織。（2） 極低密度脂蛋白vldl(0.95-1.006g/cm3)，在肝臟中生成，將脂類運(yùn)輸?shù)浇M織中，當(dāng)vldl被運(yùn)輸?shù)饺斫M織時(shí)，被分解為三酰甘油、脫輔基蛋白和磷脂，最后，vldl被轉(zhuǎn)變?yōu)榈兔芏戎鞍?。?） 低密度脂蛋白(ldl，1.006-1.063g/cm3)，把膽固醇運(yùn)輸?shù)浇M織，經(jīng)過一系列復(fù)雜的過程，ldl與ldl受體結(jié)合并被細(xì)胞

24、吞食。（4） 高密度脂蛋白(hdl，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝臟中生成，可能負(fù)責(zé)清除細(xì)胞膜上過量的膽固醇。當(dāng)血漿中的卵磷脂：膽固醇?；D(zhuǎn)移酶 lcat將卵磷脂上的脂肪酸殘基轉(zhuǎn)移到膽固醇上生成膽固醇脂時(shí)，hdl將這些膽固醇脂運(yùn)輸?shù)礁?。肝臟將過量的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。16質(zhì)粒作為基因工程載體應(yīng)具備什么條件？能自主復(fù)制，是能獨(dú)立復(fù)制的復(fù)制子對宿主生存并不是必需的。（1）復(fù)制子（ori）：一段具有特殊結(jié)構(gòu)的dna序列；（2）有一個(gè)或多個(gè)便于檢測的遺傳表型，如抗藥性、顯色表型反應(yīng)等；（3）有一個(gè)或幾個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，便于外源基因片段的插入；（4）適當(dāng)?shù)目截悢?shù)。17為什么選用m13噬菌

25、體作定點(diǎn)突變的目的基因載體？m13dna的復(fù)制起始位點(diǎn)定位在基因間隔區(qū)內(nèi)。但是基因間隔區(qū)的有些核苷酸序列即使發(fā)生突變、缺失或插入外源dna片段，也不會(huì)影響m13dna的復(fù)制，這為13dna構(gòu)建克隆載體提供了條件。18、vegf促進(jìn)血管增生的機(jī)制？vegf在血管新生中起重要作用10：vegf通過增強(qiáng)小血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的囊泡、細(xì)胞器、囊狀結(jié)構(gòu)的活性來促進(jìn)血管腔內(nèi)和腔外血漿成分代謝，以及通過對鈣粘蛋白/鏈蛋白復(fù)合體的作用使單層內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附連接松解，從而提高循環(huán)代謝中小血管通透性。血管通透性增加可使血漿蛋白外滲并形成細(xì)胞外基質(zhì)，引起內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。vegf刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生纖溶酶原激活物(

26、upa和tpa)、纖溶酶原激活物抑制劑-1（pai-1）和膠原酶，并使蛋白分解增加而引起血管外基質(zhì)成分改變，為內(nèi)皮細(xì)胞遷移創(chuàng)造條件。vegf刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖（vegf僅可刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，而不能刺激其他類型細(xì)胞，如角膜內(nèi)皮細(xì)胞、晶狀體上皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞及腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞的增殖）。vegf促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，這是從血管前體形成內(nèi)皮分支重要的一步。vegf抑制內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。19何謂膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)作用？簡述其作用機(jī)制及生物學(xué)意義。hdl 將多余的膽固醇從周圍組織細(xì)胞(包括動(dòng)脈粥樣斑塊)轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行機(jī)體的再循環(huán)或以膽酸的形式排泄出體外，這一過程稱作膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)(rct)。膽固醇通過rct這一過程

27、可以減少其在血管壁的沉積，從而阻止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)包括組織細(xì)胞膽固醇的流出、膽固醇的酯化以及清除。20從基因文庫釣取目的基因的困難何在？存在兩個(gè)限制因素：1） 必須存在著目的基因的突變品系2） 需要一種只有野生型能夠生長的培養(yǎng)基。21何謂“內(nèi)共生假說”，列舉出支持它的證據(jù)。認(rèn)為線粒體來源于細(xì)菌，即細(xì)菌被真核生物吞噬后,在長期的共生過程中,通過演變,形成了線粒體。該學(xué)說認(rèn)為:線粒體祖先原線粒體(一種可進(jìn)行三羧酸循環(huán)和電子傳遞的革蘭氏陰性菌)被原始真核生物吞噬后與宿主間形成共生關(guān)系。在共生關(guān)系中,對共生體和宿主都有好處：原線粒體可從宿主處獲得更多的營養(yǎng),而宿主可借用原線粒體具有的

28、氧化分解功能獲得更多的能量。由美國生物學(xué)家馬古利斯（lynnmargulis）于1970年出版的真核細(xì)胞的起源一書中正式提出。她認(rèn)為，好氣細(xì)菌被變形蟲狀的原核生物吞噬后、經(jīng)過長期共生能成為線粒體，藍(lán)藻被吞噬后經(jīng)過共生能變成葉綠體，螺旋體被吞噬后經(jīng)過共生能變成原始鞭毛。22談?wù)劵蚬こ碳捌鋺?yīng)用價(jià)值?；蚬こ蹋╣enetic engineering）又稱基因拼接技術(shù)和dna重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種dna分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。應(yīng)用價(jià)值：農(nóng)牧業(yè)、食品工業(yè)

29、：運(yùn)用基因工程技術(shù)，不但可以培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、抗性好的農(nóng)作物及畜、禽新品種，還可以培養(yǎng)出具有特殊用途的動(dòng)、植物。環(huán)境保護(hù)：基因工程做成的dna探針能夠十分靈敏地檢測環(huán)境中的病毒、細(xì)菌等污染?；蚬こ套龀傻摹俺?jí)細(xì)菌”能吞食和分解多種污染環(huán)境的物質(zhì)。醫(yī)學(xué)：用基因治病是把功能基因?qū)氩∪梭w內(nèi)使之表達(dá)，并因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)發(fā)揮了功能使疾病得以治療。醫(yī)藥衛(wèi)生：基因工程藥品的生產(chǎn)，基因診斷與基因治療。23為什么說端粒酶是一個(gè)抗癌靶點(diǎn)? 有何抗癌策略?端粒酶在絕大多數(shù)惡性腫瘤中特異性表達(dá)，這使得人們對腫瘤的抗端粒酶療法產(chǎn)生了特別的關(guān)注。設(shè)想以端粒、端粒酶為靶點(diǎn)，通過抑制癌細(xì)胞端粒酶活性或直接抑制端粒延長、穩(wěn)定

30、，而使細(xì)胞無法連續(xù)增殖，繼而進(jìn)入衰老途徑，直至死亡。同時(shí)端粒、端粒酶在腫瘤細(xì)胞與正常體組織之間的差別又可以減少端粒、端粒酶抑制劑對機(jī)體的毒副作用。抗癌策略:1 控制端粒延長靶點(diǎn)的物質(zhì)；2抑制端粒酶結(jié)構(gòu)和功能靶點(diǎn)的物質(zhì)。24根據(jù)端粒和端粒酶的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)論述它們與細(xì)胞“永生化”的關(guān)系？端粒（telomere）是真核細(xì)胞染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)。人端粒是由6個(gè)堿基重復(fù)序列（ttaggg）和結(jié)合蛋白組成。端粒有重要的生物學(xué)功能，可穩(wěn)定染色體的功能，防止染色體dna降解、末端融合，保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因dna，調(diào)節(jié)正常細(xì)胞生長。端粒酶（telomerase）是使端粒延伸的反轉(zhuǎn)錄dna合成酶。是個(gè)由rna和蛋

31、白質(zhì)組成的核糖核酸-蛋白復(fù)合物。其rna組分為模板，蛋白組分具有催化活性，以端粒3末端為引物，合成端粒重復(fù)序列。端粒酶的活性在真核細(xì)胞中可檢測到，其功能是合成染色體末端的端粒，使因每次細(xì)胞分裂而逐漸縮短的端粒長度得以補(bǔ)償，進(jìn)而穩(wěn)定端粒長度。端粒的縮短，引起衰老。如果端粒長度得不到維持，細(xì)胞停止分裂或者死亡。在某種情況下，瀕臨衰亡的細(xì)胞愈變成永生細(xì)胞，即癌細(xì)胞。25從基因組遺傳信息傳遞的角度論述線粒體與原核生物的相似之處。26為什么說端粒是歷數(shù)細(xì)胞生命歷程的“分子鐘”?端粒本身沒有任何密碼功能，它就像一頂高帽子置于染色體頭上。在新細(xì)胞中，細(xì)胞每分裂一次，染色體頂端的端粒就縮短一次，當(dāng)端粒不能再縮

32、短時(shí)，細(xì)胞就無法繼續(xù)分裂了。這時(shí)候細(xì)胞也就到了普遍認(rèn)為的分裂100次的極限并開始死亡。因此，端粒被科學(xué)家們視為“生命時(shí)鐘”。27從脂蛋白代謝的角度闡述脂肪肝可能的發(fā)生機(jī)制和治療策略。脂類代謝障礙是產(chǎn)生脂肪肝的原因：(1)食物中脂肪過量、高脂血癥及脂肪組織動(dòng)員增加(饑餓、創(chuàng)傷及糖尿病)，游離脂肪酸(ffa)輸送入肝增多，為肝內(nèi)三酰甘油合成提供大量前體。(2)食物中缺乏必需脂肪酸，急性酒精中毒、急性蘇氨酸缺乏、攝入大劑量巴比妥鹽等使肝細(xì)胞內(nèi)三酰甘油及游離脂酸合成增加。(3)熱量攝入過高，從糖類轉(zhuǎn)化為三酰甘油增多。(4)肝細(xì)胞內(nèi)游離脂酸清除減少，過量飲酒、膽堿缺乏、四氯化碳和乙硫氨酸中毒等均可抑制肝

33、內(nèi)游離脂酸的氧化。乙硫氨酸中毒及膽堿缺乏可阻斷磷脂合成。(5)vldl合成或分泌障礙等一個(gè)或多個(gè)環(huán)節(jié)，破壞脂肪組織細(xì)胞、血液及肝細(xì)胞之間脂肪代謝的動(dòng)態(tài)平衡，引起肝細(xì)胞三酰甘油的合成與分泌之間失去平衡，最終導(dǎo)致中性脂肪為主的脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)過度沉積形成脂肪腫。治療：1、找出病因，有的放矢采取措施。2、調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)，提倡高蛋白質(zhì)、高維生素、低糖、低脂肪飲食。3、適當(dāng)增加運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)體內(nèi)脂肪消耗。4、藥物輔助治療。9試述端粒、端粒酶與惡性腫瘤的關(guān)系及其應(yīng)用前景。正常細(xì)胞的分裂次數(shù)是有限的。端粒酶的激活是細(xì)胞走向永生化的必要途徑，而永生化又被認(rèn)為是腫瘤惡化的必要步驟。腫瘤細(xì)胞的端粒長度很短，其繼續(xù)縮短將導(dǎo)

34、致染色體融合、細(xì)胞死亡，而端粒酶的激活可以維持端粒的長度，從而維持腫瘤的繼續(xù)分裂、增殖和生存。端粒酶的表達(dá)，可能是腫瘤形成和發(fā)展的共同途徑。端粒酶的活性與某些腫瘤的惡性程度和預(yù)后相關(guān)。臨床應(yīng)用前景1.腫瘤的治療方面：端粒酶與惡性腫瘤之間令人驚異的相關(guān)性，使他在腫瘤的診斷和治療上有望成為行之有效的新的靶目標(biāo)。通過各種途徑抑制端粒酶的活性，可能將有效地抑制大多數(shù)腫瘤的生長。這種抑制作用可以通過直接抑制端粒酶活性、抑制端粒酶rna(如導(dǎo)入反義核酸)，或端粒酶蛋白成分以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生分化等方法實(shí)現(xiàn)。2.診斷與鑒別診斷及臨床預(yù)后方面：端粒酶可以出現(xiàn)在某些腫瘤的早期甚至癌前病變，在分化低有轉(zhuǎn)移傾向的腫

35、瘤中高度表達(dá)，使其在診斷及評(píng)價(jià)預(yù)后方面，具有一定價(jià)值。31ox-ldl是怎樣形成的？試述它與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系。天然的ldl中含有大量的不飽和脂肪酸，在氧自由基及其他多種氧化劑的作用下可生成脂類自由基，介導(dǎo)產(chǎn)生更多的過氧化脂質(zhì)引起連鎖的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，最終形成多種活性醛。這些活性醛與ldl中的脂質(zhì)蛋白apob結(jié)合，產(chǎn)生新的抗原決定族，形成oxldl。（1）細(xì)胞介導(dǎo)ldl氧化修飾。;（2）化學(xué)氧化修飾ldl。;（3）其他形式的氧化修飾。物理方法如紫外線、鈷60或過氧化酶類等均可對ldl進(jìn)行氧化修飾。1、 oxldl能夠引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和內(nèi)皮細(xì)胞損傷，這一作用是啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。.

36、2、oxldl募集單核細(xì)胞并誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成。.3 、oxldl作為抗原形成抗原抗體復(fù)合物促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成。.4 oxldl誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增生和凋亡。5 、oxldl抑制內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放no。6、 oxldl促血栓形成。32 線粒體的半自主性線粒體自主程度是有限的，它們對核遺傳系統(tǒng)有很大的依賴性。因此，線粒體的生長和增殖是受核基因組及自身的基因組兩套遺傳信息系統(tǒng)控制的，所以它們都被稱為半自主性細(xì)胞器。線粒體dna可以自我復(fù)制，復(fù)制也是以半保留方式進(jìn)行的。線粒體dna復(fù)制的時(shí)間主要在細(xì)胞周期的s期及g2期，而且dna先復(fù)制，隨后線粒體分裂。自身合成蛋白質(zhì)的種類十分有限，絕大多數(shù)蛋白

37、質(zhì)都是由核dna編碼，在細(xì)胞質(zhì)核糖體上合成。33 mtdna對氧化損傷具有易感性，為什么？35 防治動(dòng)脈粥樣硬化的根本方法是清洗血管，其唯一手段是什么？為什么？升高高密度脂蛋白膽固醇（hdl）是清洗血管的唯一手段。高密度脂蛋白是血管保護(hù)因子，起到血清到夫的作用，能夠把血管內(nèi)壁的血垢”轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，通過代謝排出體外，不但可以預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生，而且對已經(jīng)形成的粥樣斑塊沉積能徹底清除.37舉一例說明基因工程載體應(yīng)具備哪些條件？對理想的基因工程載體一般至少有以下幾點(diǎn)要求：能在宿主細(xì)胞中復(fù)制繁殖，而且最好要有較高的自主復(fù)制能力。容易進(jìn)入宿主細(xì)胞，而且進(jìn)入效率越高越好。容易插入外來核酸片段，插入后不影

38、響其進(jìn)入宿主細(xì)胞和在細(xì)胞中的復(fù)制。這就要求載體dna上要有合適的限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)。每種酶的切位點(diǎn)最好只有一個(gè)。容易從宿主細(xì)胞中分離純化出來， 這才便于重組操作。有容易被識(shí)別篩選的標(biāo)志，當(dāng)其進(jìn)入宿主細(xì)胞、或攜帶著外來的核酸序列進(jìn)入宿主細(xì)胞都能容易被辨認(rèn)和分離出來。這才介于克隆操作。39為什么說正常血漿脂蛋白有四大類6種，請分析之。超速離心法是根據(jù)各種脂蛋白在一定密度的介質(zhì)中進(jìn)行離心時(shí)，因漂浮速率不同而進(jìn)行分離的方法。通?？蓪⒀獫{脂蛋白分為乳糜微粒、極低密度脂蛋白（vldl）、低密度脂蛋白（ldl）和高密度脂蛋白（hdl）等四大類。電泳法:：由于血漿脂蛋白表面電荷量大小不同，在電場中，其遷移速

39、率也不同，從而將血漿脂蛋白分為乳糜微粒、-脂蛋白、前-脂蛋白和-脂蛋白等四種。40 試述一種血管生成抑制的重要因子及其作用。血管抑制素是相對分子量為3.8104的纖維蛋白溶酶原片段（krigles 1-3）。它選擇性抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，從而阻礙腫瘤血管的形成和腫瘤轉(zhuǎn)移灶建立。總的是腫瘤介導(dǎo)纖維蛋白溶酶原的蛋白溶解作用。gately等發(fā)現(xiàn)在人前列腺癌細(xì)胞顯示酶的活性轉(zhuǎn)化纖維蛋白溶酶原為血管抑制素。經(jīng)鑒定其尿激酶（urokinase, upa）和游離硫氫基供體（free eulfhydryl donors，fsds）可滿足促進(jìn)癌細(xì)胞血管抑制素的形成。游離細(xì)胞源血管抑制素在體內(nèi)能抑制lewis肺癌轉(zhuǎn)移。這些發(fā)現(xiàn)證明瘤細(xì)胞介導(dǎo)血管抑制素為直接機(jī)制。當(dāng)前可以將大量生物的活性血管抑制素作為研究和潛在的腫瘤治療應(yīng)用。41簡述支持“內(nèi)共生假說”的證據(jù)。線粒體和葉綠體起源于古代細(xì)菌內(nèi)共生的證據(jù)如下：線粒體和葉綠體都含有dna，這些dna與細(xì)胞核中的很不同，卻類似