泉州醫(yī)高專免疫學(xué)檢驗(yàn)習(xí)題集酶免疫技術(shù)

1、第9章酶免疫技術(shù)一、選擇題【A1型題】1. HRP的酶活性基團(tuán)是A.糖蛋白B.亞鐵血紅素C.白蛋白D.球蛋白E.色氨酸2. 關(guān)于酶免疫技術(shù)的特點(diǎn)，正確的是A.酶標(biāo)記物催化抗原反應(yīng)，使其結(jié)果放大，提高了檢測(cè)的靈敏度B.酶活性易受理化因素的影響，酶標(biāo)記物穩(wěn)定性差C.選擇高質(zhì)量的標(biāo)記用酶是建立酶免疫技術(shù)最重要的前提D.底物以酶催化后的成色，使酶標(biāo)記免疫反應(yīng)結(jié)果得以放大E.酶免疫技術(shù)檢測(cè)方法較為繁瑣3. HRP的RZ值表示的是A.HRP在403nm與275nm的OD值之比B.HRP在420nm與275nm的OD值之比C.HRP在403nm與300nm的OD值之比D.HRP在275nm與403nm的OD

2、值之比E.HRP在290nm與275nm的OD值之比4. 目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物是A.OPDB.ABTSC.TMBD.5-ASAE.p-NPP5. EMIT主要用于何種物質(zhì)的測(cè)定A.大分子抗原B.小分子抗原或半抗原C.多克隆抗體D.單克隆抗體E.補(bǔ)體6. ELISA雙抗體夾心法是A.酶標(biāo)記特異性抗體用于抗原的檢測(cè)B.屬于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定C.先將待測(cè)抗原包被于固相載體上D.標(biāo)記一種抗體可檢測(cè)多種抗原E.能用于半抗原物質(zhì)的測(cè)定7 捕獲法主要用于何種物質(zhì)的測(cè)定A.IgGB.IgAC.IgMD.IgDE.IgE8. 下例何種方法用一種標(biāo)記物可檢測(cè)多種被測(cè)物A.ELISA雙抗體夾心法B.ELISA

3、競(jìng)爭(zhēng)法C.放免疫法D.ELISA捕獲法E.ELISA間接法9. 用于標(biāo)記的HRP，下面哪一項(xiàng)描述是正確的A.HRP是由具有酶活性的糖白主酶和無(wú)酶活性的亞鐵血紅素輔基構(gòu)成B.根據(jù)HRP的RZ值可判斷酶活性的高低C.HRP對(duì)酶催化反應(yīng)中的受氫體專一性要求不高D.酶變性后，其RZ值不變E.HRP的底物為對(duì)-硝基苯磷酸酯 10. ELISA中的雙位點(diǎn)一步法試驗(yàn)時(shí)，造成抗原測(cè)定值低于實(shí)際含量或假陰性的常見原因是A.固相抗過多B.待測(cè)物過濃C.標(biāo)記抗體過多D.反應(yīng)時(shí)間不夠E.洗滌不徹底11. 酶免疫技術(shù)是根據(jù)何種特性分為均相和異相兩類技術(shù)的A.抗原特性B.抗體特性C.抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合和游離酶

4、標(biāo)記物D.酶的穩(wěn)定性E.載體特性12. 關(guān)于均相酶免疫測(cè)定，以下哪一項(xiàng)是正確的A.多用于大分子物質(zhì)的測(cè)定B.酶標(biāo)抗原和抗體在固相載體表面形成復(fù)合物，作用于底物顯色C.需要分離結(jié)合和游離酶標(biāo)記物D.常利用酶標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合后的空間位阻降低酶活性E.酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，故最終酶活力的大小與標(biāo)本中抗原量呈負(fù)相關(guān)13. 關(guān)于ELISA競(jìng)爭(zhēng)法，下列敘述正確的是A.用于檢測(cè)抗原B.被測(cè)物與酶標(biāo)記物的免疫活性各不相同C.被測(cè)物多則標(biāo)記物被結(jié)合的機(jī)會(huì)少D.待測(cè)管的顏色比對(duì)照管的淺則表示被測(cè)物量少E.結(jié)合于固相的酶標(biāo)記抗原量與被測(cè)抗原量成正比14. 堿性磷酸酶AP常用的底物A.OPDB.TMBC.

5、p-NPPD.ABTSE.5-ASA15. 下述哪一種ELISA最常用于抗原的測(cè)定A.雙抗體夾心法ELISAB.間接法ELISA C.競(jìng)爭(zhēng)法ELISAD.捕獲法ELISA E.補(bǔ)體結(jié)合法16. ELISA間接法是用于A.酶標(biāo)記抗原用于檢測(cè)抗體B.酶標(biāo)記抗抗體用于檢測(cè)抗體C.酶標(biāo)記抗抗體用于檢測(cè)抗原D.酶標(biāo)記抗體用于檢測(cè)抗原E.酶標(biāo)記抗原用于檢測(cè)抗原17. HRP催化的反應(yīng)式為DH2+H2O2D+2H2O，何者習(xí)慣上被稱為底物A.DH2B.H2O2C.DD.H2OE.酸性磷酸酶18. TMB經(jīng)HRP作用后，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)锳.綠色B.紅色C.橙黃色D.黃色E.藍(lán)色19. 酶免疫分析技術(shù)中常

6、用于標(biāo)記的酶有 EA.辣根過氧化物酶和過氧化氫酶B.堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶C.半乳糖苷酶D.過氧化氫酶E. B和C20. 以下哪些方法屬于均相酶免疫技術(shù)A.捕獲夾心法B.酶放大免疫測(cè)定技術(shù)C.ELISA夾心法D.斑點(diǎn)-ELISAE.ELISA競(jìng)爭(zhēng)法【A2型題】21. 下列哪項(xiàng)不符合ELISA中固相載體的要求A.結(jié)合抗體或抗原的容量大B.抗原或抗體與其結(jié)合后，應(yīng)保持免疫活性C.固相方法簡(jiǎn)便易行，快速經(jīng)濟(jì) D.對(duì)蛋白吸附能力E.抗原或抗體與其結(jié)合后失去免疫活性22. 下列關(guān)于雙抗體夾心法原理，不正確的是A.使用分別針對(duì)抗原不同決定簇的兩種單克隆抗體作為酶標(biāo)記物B.一種單克隆抗體作為固相抗體，另

7、一種作為酶標(biāo)抗體C.可使標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入成為一步法D.用于檢測(cè)二價(jià)或二價(jià)以的抗原E.采用高親合力的單克隆抗體可提高檢測(cè)的靈敏度和特異性23. 下面哪項(xiàng)不屬于HRP的底物A.OPDB.TMBC.4MUGD.ABTSE.5-ASA24. 不屬于ELISA試劑要求的是A.選擇酶制劑時(shí)，酶的RZ值比酶活力指標(biāo)更重要B.選擇抗體要求具有高的比活性C.底物應(yīng)顏色變化明顯，反應(yīng)終止后顏色穩(wěn)定D.載體要示吸附性好，空白值低、透明度發(fā)E.抗原要求純度高，抗原性完整25. 下面哪項(xiàng)不屬于ELISA標(biāo)記酶必須具備的特異性A.有可與抗原、抗體結(jié)合的基團(tuán)B.標(biāo)記抗原后，酶活性保持穩(wěn)定C.當(dāng)酶標(biāo)記原與抗體結(jié)合后，酶

8、活性可出現(xiàn)激活或抑制D.酶催化底物反應(yīng)一生成的信號(hào)易于測(cè)定、重復(fù)性好E.標(biāo)記抗原后，不影響抗原的免疫活性【B1型題】（26-27題共用備選答案）A.HRPB.APC.半乳糖苷酶D.過氧化氫酶E.酸性磷酸酶26. 從植物辣中提取的是27. 大腸肝菌或小牛腸粘膜提取的是（28-30題共用備選答案）A.間接法B.雙抗體夾心法測(cè)抗原C.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體D.捕獲法E.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原28. 以下示意圖是哪一種ELISA檢測(cè)模式29. 以下示意圖是哪一種ELISA檢測(cè)模式30. 以下示意圖是哪一種ELISA檢測(cè)模式二、 名詞解釋 1.ELISA2.封閉（blocking）3.異相酶免疫測(cè)定（heterogenou

9、s enzyme immunosassay,異相EIA）4.包被（coating）5.均相酶免疫測(cè)定（homogenous enzyme immunosassay）三、 簡(jiǎn)答題1.試以ELISA為例，簡(jiǎn)述建立酶免疫實(shí)驗(yàn)方法的主要研究?jī)?nèi)容。2.簡(jiǎn)述酶免疫技術(shù)的分類。3.簡(jiǎn)述雙抗體夾心法的原理。4.簡(jiǎn)述ELISA的基本原理、方法類型及應(yīng)用。5.簡(jiǎn)述均相酶免疫測(cè)定的原理。參考答案一、選擇題1.B 2.D 3.A 4.C 5.B 6.A 7.C 8.E 9.D 10.B11.C 12.D 13C 14.C 15.A 16.B 17.B 18.D 19.E 20.B 21.E 22.A 23.C 24.

10、A 25.C 26.A 27.B 28.A 29.B 30.C二、名詞解釋1.ELISA：全稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，它是將抗原或抗體包被在固相載體表面，然后加入待測(cè)抗體或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體，反應(yīng)后用洗滌的方法使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的物質(zhì)分離，最后加入底物，根據(jù)酶對(duì)底物催化的顯色反應(yīng)程度而對(duì)標(biāo)本中的抗原或抗體進(jìn)行定性或定量的分析方法。2.封閉：是指在抗原或抗體包被ELISA板后，用1%5%牛血清蛋白或5%20%小牛血清再包被一次，以消除固相載體表面未吸附的位點(diǎn)，以防止非特異性吸咐。3.異相EIA：是指在酶免疫測(cè)定中，抗原抗體反應(yīng)中，需分離游離的和與抗原（或抗體）結(jié)合形成復(fù)合物的酶

11、標(biāo)記物，然后對(duì)經(jīng)酶催的底物顯色程度進(jìn)行測(cè)定，再推算出樣品中待測(cè)抗體（或抗體）的含量的方法。又可分為液相和固相酶免疫測(cè)定兩種類型4.包被：是指將抗原或抗體結(jié)合在固相載體上的過程。5.均相酶免疫測(cè)定：均相法是利用酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)記物分離的情況下，通過測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。主要用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測(cè)定。三、 簡(jiǎn)答題1. 試以ELISA為例，簡(jiǎn)述建立酶免疫實(shí)驗(yàn)方法的主要研究?jī)?nèi)容。答：ELISA是固相酶免疫的代表，此實(shí)驗(yàn)涉及以下幾個(gè)方面的問題：酶標(biāo)記物是酶免疫技術(shù)的核心組成部分，因此用于制備酶

12、標(biāo)記物的抗原要求純度高，抗原性完整；抗體則不僅需要特異性好、效價(jià)高、親合力強(qiáng)以及比活性較高，而且還需要能批量生產(chǎn)和易于分離純化。標(biāo)記的酶要求活性高，穩(wěn)定，標(biāo)記后不影響抗原抗體的活性，作用專一性強(qiáng)，無(wú)害、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)。選用好的交聯(lián)劑和交聯(lián)方法制備出高質(zhì)量的酶標(biāo)記物。選用合適的酶作用底物。篩選有效的分離結(jié)合與游離酶標(biāo)記物的方法。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)步驟。2. 簡(jiǎn)述酶免疫技術(shù)的分類。答：酶免疫技術(shù)按實(shí)際用途，分為酶免疫組化和酶免疫測(cè)定兩大類。酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需將結(jié)合和游離的酶標(biāo)記物分離，分為均相酶免疫測(cè)定和異相酶免疫測(cè)定，異相酶免疫測(cè)定又可分為固相酶免疫測(cè)定和液相酶免疫測(cè)定。3. 簡(jiǎn)述雙抗體夾心法

13、的原理。答：其基本工作原理是利用連接于固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體可分別與待檢標(biāo)本中被測(cè)抗原上兩個(gè)不同的抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。由于反應(yīng)系統(tǒng)中固相抗體和酶標(biāo)抗體的量相對(duì)于待檢抗原是過量的。因此復(fù)合物的形成量與待檢抗原的含量成正比。測(cè)定復(fù)合物中酶作用于加入底物后生成的有色物質(zhì)量，即可確定待檢抗原含量。4. 簡(jiǎn)述ELISA的基本原理、方法類型及應(yīng)用。答：基本原理是抗原或抗體預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面；測(cè)定時(shí)，將待測(cè)樣品（含待測(cè)抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)形成抗原或抗體復(fù)合物；反應(yīng)終止時(shí)，固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量（免疫復(fù)合物）與待測(cè)標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量成一定比例；經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)，加入底物進(jìn)行顯色，最后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待測(cè)物質(zhì)含量。方法類型及應(yīng)用：雙抗體夾心法：用于檢測(cè)抗原，適用于檢測(cè)兩個(gè)或兩個(gè)以