需氧革蘭陽性桿菌及檢驗

1、需氧革蘭陽性桿菌及需氧革蘭陽性桿菌及檢檢驗驗華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院熊熊 艷艷革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別革蘭陽性桿菌菌屬間的鑒別棒狀桿菌棒狀桿菌屬屬芽胞桿菌芽胞桿菌屬屬李斯特菌李斯特菌屬屬丹毒絲菌丹毒絲菌屬屬加特納菌加特納菌屬屬形態(tài)形態(tài)棒狀棒狀桿菌有芽桿菌有芽胞胞短桿、鏈短桿、鏈或絲狀或絲狀細桿或絲細桿或絲狀狀桿菌、多桿菌、多形性形性觸酶觸酶+ + + +- - -動力動力- -v v+ +- - -對氧對氧需氧，兼需氧，兼性厭氧性厭氧需氧，兼需氧，兼性厭氧性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧兼性厭氧v v：炭疽芽胞桿菌陰性，其它芽胞桿菌陽性

2、。：炭疽芽胞桿菌陰性，其它芽胞桿菌陽性。 第一節(jié)第一節(jié)棒狀桿菌屬棒狀桿菌屬棒狀桿菌屬的共同特征棒狀桿菌屬的共同特征1)革蘭陽性多形態(tài)桿菌革蘭陽性多形態(tài)桿菌2)無莢膜、無鞭毛、無芽胞無莢膜、無鞭毛、無芽胞3)細菌呈不規(guī)則柵欄狀排列細菌呈不規(guī)則柵欄狀排列4)需氧或兼性厭氧需氧或兼性厭氧5)觸酶試驗陽性觸酶試驗陽性6)細胞壁結(jié)構(gòu)和血清學(xué)分析，證實與分枝細胞壁結(jié)構(gòu)和血清學(xué)分析，證實與分枝桿菌屬、奴卡氏菌屬有共同的成分。桿菌屬、奴卡氏菌屬有共同的成分。一一白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌（一）生物學(xué)特性（一）生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l菌落特征菌落特征l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抗原構(gòu)造抗原構(gòu)造

3、l抵抗力抵抗力10/21/2021形態(tài)與染色形態(tài)與染色 細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌細長彎曲、一端或兩端膨大的革蘭陽性桿菌。無莢膜、無芽胞、無鞭毛、無菌毛。細菌排。無莢膜、無芽胞、無鞭毛、無菌毛。細菌排列呈散在列呈散在l l、v v、y y字形及不規(guī)則柵欄狀。字形及不規(guī)則柵欄狀。 用美藍、用美藍、neisserneisser法、法、albertalbert法等染色時，法等染色時，在細菌的一端或兩端有濃染的顆粒，此顆粒與在細菌的一端或兩端有濃染的顆粒，此顆粒與菌體著色不同，稱為菌體著色不同，稱為異染顆粒異染顆粒，為本菌重要形，為本菌重要形態(tài)學(xué)特征，對鑒別細菌有重要意義。態(tài)學(xué)特征，對鑒別

4、細菌有重要意義。 10/21/2021培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 v需氧或兼性厭氧，生長溫度為需氧或兼性厭氧，生長溫度為1540，最適，最適生長溫度為生長溫度為3537，ph7.27.8。 v營養(yǎng)要求高，營養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上雖能生長，但在普通培養(yǎng)基上雖能生長，但生長不良，形態(tài)不典型，大多需要特殊氨基酸。生長不良，形態(tài)不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或雞蛋的培養(yǎng)基上生長迅速，在加有血液、血清或雞蛋的培養(yǎng)基上生長迅速，形態(tài)典型，異染顆粒明顯。形態(tài)典型，異染顆粒明顯。 菌落特征菌落特征l血平板：灰白、狹窄血平板：灰白、狹窄溶血環(huán)。溶血環(huán)。l雞蛋斜面和血清斜面：生長迅速，灰白色有光雞蛋斜面和血

5、清斜面：生長迅速，灰白色有光澤菌落。澤菌落。l亞碲酸鉀血平板：為選擇培養(yǎng)基，菌落呈黑色。亞碲酸鉀血平板：為選擇培養(yǎng)基，菌落呈黑色。菌落分為重型、輕型或中間型。菌落分為重型、輕型或中間型。10/21/2021生化反應(yīng)生化反應(yīng)觸酶（觸酶（+ +），氧化酶（），氧化酶（- -）能分解葡萄糖、麥芽糖、能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖等果糖等，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不分解乳糖不分解乳糖、多數(shù)不分解蔗糖、多數(shù)不分解蔗糖。靛基質(zhì)試驗、明膠液化、尿素分解靛基質(zhì)試驗、明膠液化、尿素分解抗原構(gòu)造抗原構(gòu)造l菌體菌體o o抗原：與分枝桿菌、奴卡菌有共同抗原。抗原：與分枝桿菌、奴卡菌有共同抗原。lk k抗原：型特異性抗原

6、，不耐熱?？乖盒吞禺愋钥乖?，不耐熱。抵抗力抵抗力l對濕熱和一般消毒劑敏感。對濕熱和一般消毒劑敏感。l對冷和干燥有一定抵抗力對冷和干燥有一定抵抗力。（二）致病性（二）致病性l致病物質(zhì)：白喉外毒素致病物質(zhì)：白喉外毒素l由攜帶由攜帶-棒狀桿菌噬菌體的白喉桿菌產(chǎn)生。棒狀桿菌噬菌體的白喉桿菌產(chǎn)生。l作用機制：抑制細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成。作用機制：抑制細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成。l經(jīng)呼吸道飛沫傳播，引起白喉。經(jīng)呼吸道飛沫傳播，引起白喉。l假膜脫落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。假膜脫落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。l中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。（三）免疫性（

7、三）免疫性l抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用?？拱缀砻庖咧饕揽堪缀砜苟舅氐闹泻妥饔?。l成人絕大多數(shù)具有免疫性，主要由于隱性感成人絕大多數(shù)具有免疫性，主要由于隱性感染所獲得的免疫力。染所獲得的免疫力。l錫克試驗用于檢測機體有無白喉抗毒素抗體錫克試驗用于檢測機體有無白喉抗毒素抗體存在。存在。（四）微生物學(xué)檢驗（四）微生物學(xué)檢驗 l標本采集標本采集 l檢驗程序檢驗程序 l檢驗方法檢驗方法l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l毒力試驗毒力試驗標本采集標本采集l用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物。采集分泌物。 l未見假膜的疑似患者或帶菌者可采集未見假膜的疑似患者或帶菌者可采

8、集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物。鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物。檢驗程序檢驗程序咽拭標本咽拭標本亞碲酸鉀亞碲酸鉀 血平板血平板觀察菌落特征觀察菌落特征 直接涂片直接涂片 革蘭染色革蘭染色異染顆粒染色異染顆粒染色血平板血平板 呂氏血清斜面呂氏血清斜面 直接涂片直接涂片 革蘭染色革蘭染色異染顆粒染色異染顆粒染色涂片染色鏡檢涂片染色鏡檢 生化反應(yīng)生化反應(yīng) 毒力試驗毒力試驗檢驗方法檢驗方法l標本直接涂片標本直接涂片 革蘭染色：觀察形態(tài)、染色性革蘭染色：觀察形態(tài)、染色性 異染顆粒染色：觀察異染顆粒異染顆粒染色：觀察異染顆粒 初步報告：檢出形似白喉棒狀桿菌初步報告：檢出形似白喉棒狀桿菌l分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 呂

9、氏斜面：生長迅速，涂片鏡檢異染顆粒明顯呂氏斜面：生長迅速，涂片鏡檢異染顆粒明顯 亞碲酸鉀血平板：黑色菌落亞碲酸鉀血平板：黑色菌落生化反應(yīng)生化反應(yīng)根據(jù)根據(jù)糖發(fā)酵是否產(chǎn)酸糖發(fā)酵是否產(chǎn)酸可鑒別棒狀桿菌可鑒別棒狀桿菌中的不同種。中的不同種。白喉棒狀桿菌發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)白喉棒狀桿菌發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸，不分解蔗糖；尿素酶（酸，不分解蔗糖；尿素酶（）、硝酸鹽）、硝酸鹽還原試驗（還原試驗（+）等可用于與其他棒狀桿菌）等可用于與其他棒狀桿菌的鑒別。的鑒別。 毒力試驗毒力試驗l意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據(jù)意義：是鑒定白喉桿菌為致病菌株的重要依據(jù)l方法方法 艾立克平板毒力試驗艾立克平板毒力試驗

10、對流電泳法對流電泳法 協(xié)同凝集試驗協(xié)同凝集試驗 動物實驗動物實驗二二其他棒狀桿菌其他棒狀桿菌第二節(jié)第二節(jié)需氧芽胞桿菌屬需氧芽胞桿菌屬芽胞桿菌屬共同特點芽胞桿菌屬共同特點1)1)絕大多數(shù)菌種在有氧條件下形成不大于絕大多數(shù)菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫徑的芽胞菌體橫徑的芽胞2)2)除炭疽芽胞桿菌外均有動力和溶血能力除炭疽芽胞桿菌外均有動力和溶血能力3)3)非抗酸性非抗酸性4)4)營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好好 一一炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌（一）生物學(xué)特性（一）生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l菌落特征菌落特征l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抗原構(gòu)造

11、抗原構(gòu)造l抵抗力抵抗力10/21/2021形態(tài)與染色形態(tài)與染色 為致病菌中最大的革蘭陽性桿菌，兩端齊平為致病菌中最大的革蘭陽性桿菌，兩端齊平或凹陷，呈竹節(jié)狀，單個或呈短鏈狀排列?；虬枷?，呈竹節(jié)狀，單個或呈短鏈狀排列。 無鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成莢膜。無鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成莢膜。 人工培養(yǎng)或在外界環(huán)境中易產(chǎn)生芽胞，在人工培養(yǎng)或在外界環(huán)境中易產(chǎn)生芽胞，在活體或完整未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)不形成芽胞，所活體或完整未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)不形成芽胞，所以以炭疽病尸體嚴禁解剖炭疽病尸體嚴禁解剖。10/21/2021培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 l需氧或兼性厭氧。需氧或兼性厭氧。l營養(yǎng)要求不高，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)

12、基上生長良好普通培養(yǎng)基上生長良好。10/21/2021菌落特征菌落特征l普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，普通瓊脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，無光澤，邊緣不整齊，在低倍鏡下可見到菌落邊緣無光澤，邊緣不整齊，在低倍鏡下可見到菌落邊緣呈呈卷發(fā)狀卷發(fā)狀。 l血液瓊脂平板：培養(yǎng)血液瓊脂平板：培養(yǎng)121215h15h，菌落周圍，菌落周圍無溶血環(huán)無溶血環(huán)，181824h24h后可有后可有輕微溶血輕微溶血，而其他需氧芽胞桿菌大多，而其他需氧芽胞桿菌大多數(shù)溶血明顯而快速。數(shù)溶血明顯而快速。l液體培養(yǎng)基中呈絮狀生長液體培養(yǎng)基中呈絮狀生長l明膠培養(yǎng)基中呈倒置的杉樹明膠培養(yǎng)基中呈倒置的杉樹l有毒株

13、在有毒株在nahconahco3 3培養(yǎng)基中形成莢膜，菌落呈粘液狀，培養(yǎng)基中形成莢膜，菌落呈粘液狀，有拉絲。有拉絲。 有毒株有毒株在在nahconahco3 3血瓊脂平板上置血瓊脂平板上置5%co5%co2 2環(huán)境中培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)181824h24h，可產(chǎn)生莢膜，菌落由，可產(chǎn)生莢膜，菌落由粗糙型變?yōu)榇植谛妥優(yōu)檎骋盒驼骋盒?，而呈現(xiàn)半圓形，突起，而呈現(xiàn)半圓形，突起，有光澤的菌落。以接種針挑取時有光澤的菌落。以接種針挑取時呈拉絲狀呈拉絲狀，此為鑒別菌落要點，而無毒株則形成粗糙此為鑒別菌落要點，而無毒株則形成粗糙型菌落。型菌落。 生化反應(yīng)生化反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)分解葡萄糖、麥芽糖、蔗

14、糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不分解乳糖。觸酶（氣。不分解乳糖。觸酶（+），），vp（），），吲哚（吲哚（），尿素（），尿素（）?？乖Y(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)1) 炭疽毒素炭疽毒素：由保護性抗原、致死因子、水腫因：由保護性抗原、致死因子、水腫因子組成的蛋白質(zhì)復(fù)合物，后兩者單獨不能發(fā)揮子組成的蛋白質(zhì)復(fù)合物，后兩者單獨不能發(fā)揮生物活性作用，都必須與保護性抗原組合才能生物活性作用，都必須與保護性抗原組合才能引起實驗動物的水腫致死。引起實驗動物的水腫致死。具有抗吞噬作用和具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。免疫原性，故患炭疽后有免疫力。2) 莢膜抗原莢膜抗原：與細菌毒力有關(guān)，失去莢膜后毒力：與細菌毒力有關(guān)，失去莢膜后

15、毒力也就消失。該抗原具有高度特異性，在臨床診也就消失。該抗原具有高度特異性，在臨床診斷中有鑒別診斷價值。斷中有鑒別診斷價值。10/21/20213)3)菌體抗原菌體抗原：耐熱、耐腐敗，耐熱、耐腐敗，無毒性，有種特異性。無毒性，有種特異性。4)4)芽胞抗原芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原決定簇，與皮質(zhì)層：芽胞的外膜含有抗原決定簇，與皮質(zhì)層一起組成炭疽芽胞桿菌芽胞的特異性抗原，此抗原一起組成炭疽芽胞桿菌芽胞的特異性抗原，此抗原具有免疫原性和血清學(xué)診斷價值。具有免疫原性和血清學(xué)診斷價值。 ascoli熱沉淀反應(yīng)熱沉淀反應(yīng)：感染動物尸體組織浸出液煮：感染動物尸體組織浸出液煮沸半小時后，耐熱的菌體抗原不被破

16、壞，能與特沸半小時后，耐熱的菌體抗原不被破壞，能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng)，稱異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應(yīng)，稱ascoli熱沉淀反熱沉淀反應(yīng)，對炭疽病具有一定的診斷價值。應(yīng)，對炭疽病具有一定的診斷價值。 抵抗力抵抗力 本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，本菌繁殖體抵抗力與其它細菌相同，芽胞抵芽胞抵抗力很強抗力很強。在干燥的土壤或者皮毛中可存活。在干燥的土壤或者皮毛中可存活2020余余年。年。 芽胞對碘和氧化劑敏感。芽胞對碘和氧化劑敏感。 耐藥性：本菌對磺胺類、青霉素、四環(huán)素、耐藥性：本菌對磺胺類、青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星敏感。環(huán)丙沙星敏感。（二）致病性與免疫性（二）致病性與免疫性l致病物質(zhì)：炭疽毒素

17、、莢膜致病物質(zhì)：炭疽毒素、莢膜l所致疾病所致疾病經(jīng)多途徑感染，引起炭疽病。經(jīng)多途徑感染，引起炭疽病。臨床類型：肺炭疽、腸炭疽、皮膚炭疽、敗血癥。臨床類型：肺炭疽、腸炭疽、皮膚炭疽、敗血癥。屬人畜共患傳染病，死亡率高。屬人畜共患傳染病，死亡率高。l免疫性：病后可獲得持久性免疫力，再次感染者免疫性：病后可獲得持久性免疫力，再次感染者甚少。甚少。（三三）微生物學(xué)檢驗）微生物學(xué)檢驗l標本采集標本采集l檢驗程序檢驗程序l檢驗方法檢驗方法標本采集標本采集l標本采集標本采集病人血液、痰、糞便、滲出液、腦脊液等。病人血液、痰、糞便、滲出液、腦脊液等。死亡病畜標本：死亡病畜標本：死于敗血癥的動物，嚴禁宰殺、死于

18、敗血癥的動物，嚴禁宰殺、解剖解剖，可在消毒皮膚后割取耳朵、舌尖、采集，可在消毒皮膚后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。少量血液。污染物品：皮革、獸毛、土壤等。污染物品：皮革、獸毛、土壤等。l標本處理標本處理：無雜菌污染標本直接接種，有雜菌：無雜菌污染標本直接接種，有雜菌污染標本先加熱殺死繁殖體和雜菌再接種。污染標本先加熱殺死繁殖體和雜菌再接種。已處理標本已處理標本直接涂片直接涂片增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)ascoli試驗試驗革蘭染色革蘭染色莢膜染色莢膜染色初步報告初步報告血平板血平板戊烷脒瓊脂平板戊烷脒瓊脂平板可疑菌落可疑菌落菌落涂片菌落涂片染色鏡檢染色鏡檢鑒定試驗鑒定試驗肉湯培養(yǎng)肉湯培養(yǎng)動

19、物實驗動物實驗動物死亡動物死亡分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)噬菌體裂解噬菌體裂解串珠試驗串珠試驗青霉素抑制試驗青霉素抑制試驗檢驗方法檢驗方法l涂片染色鏡檢涂片染色鏡檢革蘭染色：涂片后升汞固定，革蘭染色發(fā)現(xiàn)革革蘭染色：涂片后升汞固定，革蘭染色發(fā)現(xiàn)革蘭陽性粗大桿菌、有莢膜，呈竹節(jié)樣排列可初蘭陽性粗大桿菌、有莢膜，呈竹節(jié)樣排列可初步報告。步報告。l分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)：一般接種血平板，一般接種血平板，3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h后后觀察菌落特點。觀察菌落特點。污染的標本先加熱處理再接種。污染的標本先加熱處理再接種。l動物試驗：注射部位膠樣水腫，肝脾腫大，出動物試驗：注射部位膠樣水腫，肝脾腫大，出血等。血等。在芽胞桿

20、菌屬中，除蠟樣芽胞桿菌毒素在芽胞桿菌屬中，除蠟樣芽胞桿菌毒素對動物有致病作用外，炭疽芽胞桿菌是唯一具對動物有致病作用外，炭疽芽胞桿菌是唯一具有致病力者。有致病力者。鑒定試驗鑒定試驗i.i. 青霉素抑制試驗青霉素抑制試驗 炭疽芽胞桿菌在含炭疽芽胞桿菌在含5 iu/ml5 iu/ml的青霉素培養(yǎng)基的青霉素培養(yǎng)基上能生長，而在含上能生長，而在含1010、100 iu/ml100 iu/ml的青霉素培的青霉素培養(yǎng)基上受到抑制不生長。養(yǎng)基上受到抑制不生長。鑒定試驗鑒定試驗ii.ii.串珠試驗串珠試驗 與類炭疽芽胞桿菌鑒別與類炭疽芽胞桿菌鑒別 炭疽芽胞桿菌受低濃度青霉素作用后，在炭疽芽胞桿菌受低濃度青霉素

21、作用后，在形態(tài)上發(fā)生明顯的變化。形態(tài)上發(fā)生明顯的變化。如將本菌幼稚培養(yǎng)物如將本菌幼稚培養(yǎng)物接種于含接種于含0.050.050.5u/ml0.5u/ml青霉素的培養(yǎng)基上，青霉素的培養(yǎng)基上，376h376h，菌體腫大呈圓珠狀，稱串珠反應(yīng)。，菌體腫大呈圓珠狀，稱串珠反應(yīng)。 此反應(yīng)可能與青霉素抑制細菌胞壁的合成此反應(yīng)可能與青霉素抑制細菌胞壁的合成作用有關(guān)，為炭疽桿菌所特有，可用于與其他作用有關(guān)，為炭疽桿菌所特有，可用于與其他類炭疽類炭疽芽胞桿菌的鑒別。芽胞桿菌的鑒別。 鑒定試驗鑒定試驗iii.iii.青霉素和串珠聯(lián)合試驗青霉素和串珠聯(lián)合試驗iv.iv. 噬菌體裂解試驗噬菌體裂解試驗 與類炭疽芽胞桿菌鑒

22、別與類炭疽芽胞桿菌鑒別v.v. nahconahco3 3毒力試驗毒力試驗 有毒力的炭疽桿菌形成莢膜，菌落呈粘液型，有毒力的炭疽桿菌形成莢膜，菌落呈粘液型，無毒力的炭疽桿菌不形成莢膜，菌落呈粗糙型。無毒力的炭疽桿菌不形成莢膜，菌落呈粗糙型。10/21/2021鑒定試驗鑒定試驗vi.vi.植物凝集素試驗植物凝集素試驗 根據(jù)炭疽芽胞桿菌菌體多糖是植物凝集素受根據(jù)炭疽芽胞桿菌菌體多糖是植物凝集素受體的原理。體的原理。vii.vii.ascoliascoli熱沉淀試驗熱沉淀試驗 用已知的抗炭疽桿菌抗體測定標本中未知的用已知的抗炭疽桿菌抗體測定標本中未知的抗原。炭疽桿菌沉淀原具有耐高熱特征，在尸抗原。炭

23、疽桿菌沉淀原具有耐高熱特征，在尸體組織和皮毛中數(shù)年仍能檢出，故可作追溯性體組織和皮毛中數(shù)年仍能檢出，故可作追溯性診斷。診斷。炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別炭疽芽胞桿菌與其它需氧芽胞桿菌的鑒別鑒別項目鑒別項目炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌枯草芽胞桿菌枯草芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌及其蠟樣芽胞桿菌及其它需氧芽胞桿菌它需氧芽胞桿菌形態(tài)形態(tài)菌體兩端平整或凹陷菌體兩端平整或凹陷兩端鈍圓兩端鈍圓兩端鈍圓兩端鈍圓莢膜莢膜+ +- - -動力動力- -+ + +菌落菌落有小突起，邊緣呈卷有小突起，邊緣呈卷發(fā)狀，粘稠菌落發(fā)狀，粘稠菌落鋸齒狀粗糙菌落鋸齒狀粗糙菌落蠟樣或粗糙不粘稠蠟樣或粗糙不粘稠菌落菌落肉湯肉湯絮狀沉淀

24、，上層清晰絮狀沉淀，上層清晰均勻混濁有菌膜均勻混濁有菌膜均勻混濁有菌膜均勻混濁有菌膜ascoliascoli+ +- - -溶血溶血不溶血或微溶血不溶血或微溶血+ + +二二蠟樣芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌（一）生物學(xué)特性（一）生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l菌落特征菌落特征l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抵抗力抵抗力形態(tài)與染色形態(tài)與染色 革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，革蘭陽性大桿菌，兩端較鈍、鏈桿狀，長短不一，有鞭毛，無莢膜，可形成芽長短不一，有鞭毛，無莢膜，可形成芽胞。胞。 10/21/2021培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 v需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。v 普通瓊脂

25、平板：可形成圓形、隆起、灰白色普通瓊脂平板：可形成圓形、隆起、灰白色、不透明、不透明、r r型型蠟滴樣蠟滴樣大菌落。大菌落。 v 血瓊脂平板：菌落呈淺灰色，似毛玻璃狀，血瓊脂平板：菌落呈淺灰色，似毛玻璃狀，菌落周圍有菌落周圍有或或溶血溶血。 乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng)：乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng)： 在卵黃瓊脂平板上生長迅速，培養(yǎng)在卵黃瓊脂平板上生長迅速，培養(yǎng)3h3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成而形成白色的混濁環(huán)白色的混濁環(huán)，即為乳光反應(yīng)或卵，即為乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng)。黃反應(yīng)。 生化反應(yīng)生化反應(yīng) 分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)

26、氣，不分解乳糖。氣，不分解乳糖。 vpvp（+ +），液化明膠。），液化明膠。抵抗力抵抗力 耐熱，抵抗力強耐熱，抵抗力強, , 能耐受能耐受10030min10030min。（二）（二）致病性致病性條件致病菌，主要引起食物中毒。條件致病菌，主要引起食物中毒。 臨床上分為兩種類型：臨床上分為兩種類型：a.a. 腹瀉型：由不耐熱的腸毒素引起。腹瀉型：由不耐熱的腸毒素引起。b.b. 嘔吐型：由耐熱的腸毒素引起。嘔吐型：由耐熱的腸毒素引起。（三三）微生物學(xué)檢驗）微生物學(xué)檢驗 l1標本采集標本采集 除進行本菌的分離培養(yǎng)外，必須作除進行本菌的分離培養(yǎng)外，必須作活菌計活菌計數(shù)數(shù)。因暴露于空氣中的食物，在一定

27、程度上都。因暴露于空氣中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故受本菌污染，故不能因分離出蠟樣芽胞桿菌則不能因分離出蠟樣芽胞桿菌則認為是引起食物中毒的病原菌認為是引起食物中毒的病原菌。l2檢驗程序檢驗程序 3檢驗方法檢驗方法1)1)直接鏡檢直接鏡檢： 2)2)活菌計數(shù)活菌計數(shù) ： 一般認為蠟樣芽胞桿菌的活菌數(shù)一般認為蠟樣芽胞桿菌的活菌數(shù)大于大于10105 5 /ml/ml時，即有發(fā)生食物中毒的可能。時，即有發(fā)生食物中毒的可能。 3)3)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) ：4)4)鑒定鑒定 第三節(jié)第三節(jié)產(chǎn)單核李斯特菌產(chǎn)單核李斯特菌一一生物學(xué)特性生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抗

28、原結(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)l抵抗力抵抗力10/21/2021（一）形態(tài)與染色（一）形態(tài)與染色 革蘭陽性小桿菌，直或稍彎，常呈革蘭陽性小桿菌，直或稍彎，常呈v v字形成字形成對排列，有時呈絲狀，偶爾可見雙球狀。對排列，有時呈絲狀，偶爾可見雙球狀。 多數(shù)菌體一端較大，似棒狀，易誤認為是污多數(shù)菌體一端較大，似棒狀，易誤認為是污染的類白喉棒狀桿菌；染的類白喉棒狀桿菌； 又因菌體短小，三、五成鏈，并有又因菌體短小，三、五成鏈，并有溶血溶血性，易與鏈球菌混淆，用觸酶試驗加以區(qū)別。性，易與鏈球菌混淆，用觸酶試驗加以區(qū)別。 在在22222525環(huán)境中形成環(huán)境中形成4 4根鞭毛，故根鞭毛，故在在2525肉湯培養(yǎng)液中肉湯培養(yǎng)

29、液中運動活潑運動活潑；而在；而在3737時僅形成時僅形成1 1根鞭毛，根鞭毛，動力緩慢動力緩慢。 10/21/2021（二）培養(yǎng)特性（二）培養(yǎng)特性v 需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高。4 44545均均能生長，最適溫度能生長，最適溫度30303737。因在因在44能生長，故能生長，故可進行可進行冷增菌冷增菌。 v 初時菌落極小似初時菌落極小似露珠狀露珠狀、光滑透明，通過側(cè)光、光滑透明，通過側(cè)光微顯藍綠色，微顯藍綠色，3737培養(yǎng)數(shù)日，菌落增大變成灰暗，培養(yǎng)數(shù)日，菌落增大變成灰暗，血平板上的菌落有狹窄的血平板上的菌落有狹窄的溶血環(huán)。溶血環(huán)。 （三）生化反應(yīng)（三）生化反應(yīng)

30、l 1 12d2d內(nèi)發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，內(nèi)發(fā)酵葡萄糖、果糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，在產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，在3 310d10d內(nèi)可發(fā)酵乳糖、內(nèi)可發(fā)酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。觸酶陽性，蔗糖、阿拉伯糖。觸酶陽性，vpvp（+ +），），mrmr（+ +）。）。 10/21/2021（四）抗原結(jié)構(gòu)（四）抗原結(jié)構(gòu)l 分為分為4 4個血清型，個血清型，1 1型主要感染嚙齒動型主要感染嚙齒動物，各型對人類均可致病，但以物，各型對人類均可致病，但以1a1a和和lblb最最為多見。為多見。l 本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌及大腸埃希菌等具有共及大腸埃希菌等具有共同同抗原?？乖＃?/p>

31、五）抵抗力（五）抵抗力l在土壤、糞便、飼料中能長期存活。在土壤、糞便、飼料中能長期存活。l耐鹽、耐堿、不耐酸。耐鹽、耐堿、不耐酸。l對熱敏感，對對熱敏感，對般消毒劑敏感，般消毒劑敏感，7070的的乙醇乙醇5min5min即可殺死本菌。即可殺死本菌。二致病性二致病性 本菌常伴隨本菌常伴隨ebeb病毒引起傳染性單核病毒引起傳染性單核細胞增多癥。細胞增多癥。三三微生物學(xué)檢驗微生物學(xué)檢驗 （一）標本采集（一）標本采集（二）檢驗程序（二）檢驗程序10/21/2021（三）檢驗方法（三）檢驗方法 1 1分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 2 2鑒定要點鑒定要點 a.a.形態(tài)染色：革蘭陽性小桿菌。形態(tài)染色：革蘭陽性小桿菌。b

32、.b.溶血：本菌的溶血：本菌的溶血環(huán)很窄，往往把菌溶血環(huán)很窄，往往把菌落刮去，方可見菌落下面的落刮去，方可見菌落下面的溶血環(huán)。溶血環(huán)。c.c.動力試驗：動力試驗：2525動力陽性。動力陽性。d.d.44能生長能生長 第四節(jié)第四節(jié)紅斑丹毒絲菌紅斑丹毒絲菌一一生物學(xué)特性生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l生化反應(yīng)生化反應(yīng)10/21/2021（一）形態(tài)與染色（一）形態(tài)與染色 革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，革蘭陽性桿菌，單個或形成短鏈狀，粗糙型菌落形成長絲狀。無鞭毛，無莢粗糙型菌落形成長絲狀。無鞭毛，無莢膜，無芽胞。膜，無芽胞。 （二）培養(yǎng)特性（二）培養(yǎng)特性 厭氧或微需氧菌。初次分離

33、需在厭氧厭氧或微需氧菌。初次分離需在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，傳代后在有氧條件下也能環(huán)境中培養(yǎng)，傳代后在有氧條件下也能生長。生長。10/21/2021（三）生化反應(yīng)（三）生化反應(yīng)v 氧化酶（氧化酶（），觸酶（），觸酶（），發(fā)酵葡萄），發(fā)酵葡萄糖、乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。糖、乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。 二致病性二致病性 紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原紅斑丹毒牡菌為紅斑丹毒絲菌病的病原體。體。 主要發(fā)生在魚類、家畜、家禽和兔類，主要發(fā)生在魚類、家畜、家禽和兔類，人類也感染發(fā)病。人類也感染發(fā)病。 人接觸動物或其產(chǎn)品經(jīng)皮膚損傷而引起人接觸動物或其產(chǎn)品經(jīng)皮膚損傷而引起類丹毒。以局部感染為主，繼而發(fā)展成淋巴類丹毒。以局部感染

34、為主，繼而發(fā)展成淋巴管炎，可轉(zhuǎn)變成關(guān)節(jié)炎。也可引起急性敗血管炎，可轉(zhuǎn)變成關(guān)節(jié)炎。也可引起急性敗血癥或心內(nèi)膜炎。癥或心內(nèi)膜炎。10/21/2021三微生物學(xué)檢驗三微生物學(xué)檢驗 （一）標本采集（一）標本采集（二）檢驗程序（二）檢驗程序 （三）檢驗方法（三）檢驗方法 1直接鏡檢直接鏡檢 2分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 3生化反應(yīng)生化反應(yīng) 4動物試驗動物試驗 第五節(jié)第五節(jié)陰道加特納菌陰道加特納菌一一生物學(xué)特性生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抵抗力抵抗力（一）形態(tài)與染色（一）形態(tài)與染色 本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌革蘭染色視菌株和菌齡不同而異。本菌具有多形性，兩端鈍圓

35、，無鞭毛，無本菌具有多形性，兩端鈍圓，無鞭毛，無莢膜，無芽胞。莢膜，無芽胞。 10/21/2021（二）培養(yǎng)特性（二）培養(yǎng)特性v 兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，在一般營養(yǎng)瓊脂平板上不生長。養(yǎng)瓊脂平板上不生長。 v 在含在含5%5%人血瓊脂平板上置人血瓊脂平板上置5%co5%co2 2，35353737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h后，形成針尖大小菌落；經(jīng)后，形成針尖大小菌落；經(jīng)48h48h后形成后形成溶血、圓形、光滑不透明的溶血、圓形、光滑不透明的菌落。菌落。 10/21/2021（三）生化反應(yīng)（三）生化反應(yīng)v 氧化酶（氧化酶（），觸酶（），觸酶（），尿素酶（），尿素酶（）

36、。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等，產(chǎn)酸）。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不產(chǎn)氣。 （四）抵抗力（四）抵抗力 所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、所有菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素和甲硝唑苯唑青霉素、青霉素、萬古霉素和甲硝唑敏感；對萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺敏感；對萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐藥。嘧啶耐藥。二致病性二致病性l 陰道加特納菌和厭氧菌陰道加特納菌和厭氧菌在陰道內(nèi)過度在陰道內(nèi)過度生長，造成陰道正常菌群微生態(tài)平衡失生長，造成陰道正常菌群微生態(tài)平衡失調(diào)，而引起非特異細菌性陰道?。ㄕ{(diào)，而引起非特異細菌性陰道病（bvbv）。l 可導(dǎo)致婦產(chǎn)科多種嚴重并發(fā)癥

37、。如子可導(dǎo)致婦產(chǎn)科多種嚴重并發(fā)癥。如子宮全切術(shù)后感染、絨毛膜炎等。宮全切術(shù)后感染、絨毛膜炎等。l 本菌還能引起新生兒敗血癥和軟組織本菌還能引起新生兒敗血癥和軟組織感染。感染。10/21/2021l 并非并非gvgv陽性者都是陽性者都是bvbv，因為，因為202040%40%的正常婦女的正常婦女陰道也可檢出此菌。陰道也可檢出此菌。l bvbv診斷標準：診斷標準：a.a. 陰道分泌物增多，稀薄均質(zhì)灰白色，有惡臭味。陰道分泌物增多，稀薄均質(zhì)灰白色，有惡臭味。b.b. 分泌物分泌物phph4.54.54.74.7。c.c. 分泌物胺試驗陽性。分泌物胺試驗陽性。d.d. 鏡檢有線索細胞。鏡檢有線索細胞。

38、 三三微生物學(xué)檢驗微生物學(xué)檢驗 （一）標本采集（一）標本采集（二）檢驗程序（二）檢驗程序10/21/2021（三）檢驗方法（三）檢驗方法 1 1陰道分泌物直接檢查陰道分泌物直接檢查 a.a. 直接濕片鏡檢：線索細胞直接濕片鏡檢：線索細胞 b.b. 涂片染色鏡檢：涂片染色鏡檢：c.c. phph測定：陰道測定：陰道phph4.74.7，提示細菌性陰道炎。，提示細菌性陰道炎。d.d. 胺試驗：胺試驗： 2 2分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 分枝桿菌屬及檢驗分枝桿菌屬及檢驗 分枝桿菌屬主要特點分枝桿菌屬主要特點l是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。l細胞壁脂質(zhì)含量高，主

39、要為分枝菌酸。細胞壁脂質(zhì)含量高，主要為分枝菌酸。l具有抗酸性，革蘭染色不易著色，常用具有抗酸性，革蘭染色不易著色，常用抗酸染抗酸染色色。l專性需氧，營養(yǎng)要求特殊，大多數(shù)生長緩慢。專性需氧，營養(yǎng)要求特殊，大多數(shù)生長緩慢。l不產(chǎn)內(nèi)、外毒素和侵襲性酶等致病物質(zhì)，不產(chǎn)內(nèi)、外毒素和侵襲性酶等致病物質(zhì)，其致其致病性與菌體成分有密切關(guān)系，病性與菌體成分有密切關(guān)系，所致疾病呈慢性。所致疾病呈慢性。分枝桿菌屬種類分枝桿菌屬種類結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌非典型分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌光產(chǎn)色分枝桿菌暗產(chǎn)色分枝桿菌不產(chǎn)色分枝桿菌迅速生長分枝桿菌分枝桿菌屬第一節(jié)第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌結(jié)核

40、分枝桿菌一一生物學(xué)特性生物學(xué)特性l形態(tài)與染色形態(tài)與染色l培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l生化反應(yīng)生化反應(yīng)l抵抗力抵抗力l變異性變異性形態(tài)與染色形態(tài)與染色l細長略彎，分枝生長細長略彎，分枝生長趨勢。趨勢。l無芽孢，無鞭毛，部無芽孢，無鞭毛，部分菌株有莢膜。分菌株有莢膜。l革蘭染色陽性，不易革蘭染色陽性，不易著色。著色。l抗酸染色陽性抗酸染色陽性，多數(shù)多數(shù)菌體含有一至數(shù)個菌體含有一至數(shù)個異異染顆粒染顆粒。 結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌（抗酸染色）（抗酸染色）培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性l 生長條件：生長條件： 細胞內(nèi)寄生菌，專性需氧細胞內(nèi)寄生菌，專性需氧，8%8%12%co12%co2 2可刺激其可刺激其生長。生長。最適最適p

41、h6.5ph6.56.86.8。 營養(yǎng)要求較高，必須在含有血清、卵黃、甘油、營養(yǎng)要求較高，必須在含有血清、卵黃、甘油、馬鈴薯以及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長。馬鈴薯以及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長。 l 生長現(xiàn)象：生長現(xiàn)象： 生長緩慢生長緩慢，在一般的培養(yǎng)基中，在一般的培養(yǎng)基中每分裂一代的速每分裂一代的速度為度為181824h24h。 改良羅氏培養(yǎng)基改良羅氏培養(yǎng)基菌落菌落特征：干燥、淡黃色、特征：干燥、淡黃色、 質(zhì)地較硬的質(zhì)地較硬的r r型菌落型菌落 液體培養(yǎng)基：形成菌膜，有毒株呈索狀生長。液體培養(yǎng)基：形成菌膜，有毒株呈索狀生長。結(jié)核分枝桿菌菌落結(jié)核分枝桿菌菌落生化反應(yīng)生化反應(yīng)l生化反應(yīng)不

42、活潑，不發(fā)酵糖類。生化反應(yīng)不活潑，不發(fā)酵糖類。觸酶陽性。觸酶陽性。l與非結(jié)核分枝桿菌鑒別：與非結(jié)核分枝桿菌鑒別： 耐熱觸酶試驗；（非結(jié)核分枝桿菌）耐熱觸酶試驗；（非結(jié)核分枝桿菌）l與牛分枝桿菌鑒別與牛分枝桿菌鑒別 煙酸試驗；（牛分枝桿菌）煙酸試驗；（牛分枝桿菌）抵抗力抵抗力l抵抗力特點：抵抗力特點：“三耐四敏三耐四敏” 耐干燥、耐酸堿、耐孔雀綠（耐干燥、耐酸堿、耐孔雀綠（1:130001:13000） 對濕熱、對濕熱、7070乙醇、紫外線、常用抗結(jié)乙醇、紫外線、常用抗結(jié)核藥物（但長期使用易產(chǎn)生耐藥性）敏感。核藥物（但長期使用易產(chǎn)生耐藥性）敏感。 結(jié)核分枝桿菌細胞壁含有大量脂質(zhì)，酒結(jié)核分枝桿菌細

43、胞壁含有大量脂質(zhì)，酒精較易滲入細胞壁將其殺死，故對精較易滲入細胞壁將其殺死，故對70%70%75%75%的酒精敏感的酒精敏感。但脂質(zhì)可防止菌體內(nèi)水分丟失，。但脂質(zhì)可防止菌體內(nèi)水分丟失，故對干燥的抵抗力特別強。故對干燥的抵抗力特別強。變異性變異性 典型形態(tài)典型形態(tài)多形性多形性 r r型菌落型菌落s s型菌落型菌落 有毒有毒無毒（用于制備疫苗）無毒（用于制備疫苗） 抗結(jié)核藥敏感抗結(jié)核藥敏感耐藥耐藥二致病性與免疫性二致病性與免疫性l致病物質(zhì)致病物質(zhì)l所致疾病所致疾病l免疫性與變態(tài)反應(yīng)免疫性與變態(tài)反應(yīng)致病物質(zhì)致病物質(zhì)l脂質(zhì)脂質(zhì) 索狀因子：與該菌毒力有密切關(guān)系索狀因子：與該菌毒力有密切關(guān)系 磷脂：磷脂：

44、 分枝菌酸：與抗酸性有關(guān)分枝菌酸：與抗酸性有關(guān) 蠟質(zhì)蠟質(zhì)d d：具有佐劑作用：具有佐劑作用 硫酸腦苷脂：硫酸腦苷脂：l蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)l糖類糖類l結(jié)核桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，不產(chǎn)生侵襲性酶。結(jié)核桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，不產(chǎn)生侵襲性酶。所致疾病所致疾病l經(jīng)多途徑感染，引起結(jié)核病，以肺結(jié)核經(jīng)多途徑感染，引起結(jié)核病，以肺結(jié)核多見多見l類型：原發(fā)感染和繼發(fā)感染類型：原發(fā)感染和繼發(fā)感染免疫性與變態(tài)反應(yīng)免疫性與變態(tài)反應(yīng) 抗結(jié)核免疫以細胞免疫為主抗結(jié)核免疫以細胞免疫為主 抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫 抗結(jié)核免疫與抗結(jié)核免疫與型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn)型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn)結(jié)核菌素試驗結(jié)核菌素試驗l原理：用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者原理：用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結(jié)核桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的對結(jié)核桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗。試驗。l結(jié)果：根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果結(jié)果：根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果 5mm5mm為陰性為陰性 5mm5mm為陽性