第七章微生物的研究方法1

1、第七章第七章 微生物的研究方法微生物的研究方法滅菌滅菌配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基純種分離純種分離鑒定鑒定菌種保藏、復(fù)壯菌種保藏、復(fù)壯菌落形態(tài)菌落形態(tài)菌體形態(tài)菌體形態(tài)生理生化實(shí)驗(yàn)生理生化實(shí)驗(yàn)第一節(jié)第一節(jié) 配制培養(yǎng)基和純種分離配制培養(yǎng)基和純種分離 一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基 按照培養(yǎng)基制成的形式，可分為按照培養(yǎng)基制成的形式，可分為（1）液體培養(yǎng)基：）液體培養(yǎng)基：增殖、鑒定微生物增殖、鑒定微生物（2）固體培養(yǎng)基兩種：）固體培養(yǎng)基兩種：分離、保藏菌種及鑒定微生物分離、保藏菌種及鑒定微生物 a 平板培養(yǎng)基：平板培養(yǎng)基：分離、鑒定微生物分離、鑒定微生物 b 斜面培養(yǎng)基：斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)、保藏菌種培養(yǎng)、保藏菌種另：常用

2、的凝固劑是瓊脂另：常用的凝固劑是瓊脂(洋菜洋菜)，當(dāng)加入，當(dāng)加入1.53時(shí)時(shí)就形成固體，而加入就形成固體，而加入0.50.8時(shí)，則成半固體。時(shí)，則成半固體。 培養(yǎng)、分離微生物常用的培養(yǎng)基培養(yǎng)、分離微生物常用的培養(yǎng)基二、純種分離二、純種分離u工具工具 接種針、接種環(huán)、接種鉤、玻璃涂棒、移液槍接種針、接種環(huán)、接種鉤、玻璃涂棒、移液槍u 方法方法 平板涂布法平板涂布法 傾注平板法傾注平板法 平板劃線法平板劃線法第二節(jié)第二節(jié) 滅菌滅菌 一、概念一、概念消毒：指只殺死一部分微生物，主要是病原微生物消毒：指只殺死一部分微生物，主要是病原微生物 滅菌：指殺死一切微生物，包括芽孢和孢子滅菌：指殺死一切微生物，

3、包括芽孢和孢子物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法熱滅菌熱滅菌紫外線和射線紫外線和射線 15 w紫外燈紫外燈過(guò)濾過(guò)濾干熱干熱濕熱濕熱灼燒灼燒烘烤烘烤消毒劑消毒劑 75 %乙醇、甲醛、乳酸、石炭酸、石灰乙醇、甲醛、乳酸、石炭酸、石灰 水、水、 福爾馬林、新潔爾滅、龍膽紫等福爾馬林、新潔爾滅、龍膽紫等防腐劑防腐劑 有機(jī)汞、有機(jī)錫、酚類等有機(jī)汞、有機(jī)錫、酚類等160 2h/ 170 1.5h121 15-30min 適用范圍最廣適用范圍最廣高壓高壓常壓常壓 巴氏消毒巴氏消毒 間歇滅菌間歇滅菌二、方法二、方法干燥熱空氣滅菌注意事項(xiàng)干燥熱空氣滅菌注意事項(xiàng)(1) 滅菌的玻璃器皿切不可有水，有水的玻璃器皿在干熱滅菌滅菌

4、的玻璃器皿切不可有水，有水的玻璃器皿在干熱滅菌中容易炸裂。中容易炸裂。(2) 滅菌物品不能堆得太滿、太緊，以免影響溫度均勻上升。滅菌物品不能堆得太滿、太緊，以免影響溫度均勻上升。(3) 滅菌物品不能直接放在電烘箱底板上，以防止包裝紙或棉滅菌物品不能直接放在電烘箱底板上，以防止包裝紙或棉花被烤焦?；ū豢窘?。(4) 滅菌溫度恒定在滅菌溫度恒定在160170為宜。溫度超過(guò)為宜。溫度超過(guò)180，棉花、，棉花、報(bào)紙會(huì)燒焦甚至燃燒。報(bào)紙會(huì)燒焦甚至燃燒。(5) 降溫時(shí)，需待溫度自然降至降溫時(shí)，需待溫度自然降至60以下才能打開(kāi)箱門(mén)取出物以下才能打開(kāi)箱門(mén)取出物品，以免因溫度過(guò)高而驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。品，以

5、免因溫度過(guò)高而驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。(6) 培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品等不能使用干熱滅菌。培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品等不能使用干熱滅菌。濕熱滅菌注意事項(xiàng)濕熱滅菌注意事項(xiàng)(1) 每次使用前，應(yīng)檢查滅菌鍋內(nèi)有足夠水量，使水位過(guò)電熱管。每次使用前，應(yīng)檢查滅菌鍋內(nèi)有足夠水量，使水位過(guò)電熱管。(3) 擺放滅菌物品時(shí)，嚴(yán)禁堵塞安全閥的出氣孔，必須留出空位擺放滅菌物品時(shí)，嚴(yán)禁堵塞安全閥的出氣孔，必須留出空位保證其暢通放汽。保證其暢通放汽。(4) 每次開(kāi)鍋前，一定要檢查確認(rèn)鍋內(nèi)無(wú)壓力！壓力指示表必須每次開(kāi)鍋前，一定要檢查確認(rèn)鍋內(nèi)無(wú)壓力！壓力指示表必須指示為指示為0！(5) 如果使用儀器的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有超溫及

6、超壓等異?，F(xiàn)象，請(qǐng)斷如果使用儀器的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有超溫及超壓等異?，F(xiàn)象，請(qǐng)斷開(kāi)電源，開(kāi)關(guān)處于開(kāi)電源，開(kāi)關(guān)處于OFF位置，并將插頭從電源處拔下，待機(jī)器壓位置，并將插頭從電源處拔下，待機(jī)器壓力降下來(lái)為零時(shí)，再打開(kāi)鍋蓋進(jìn)行檢查。力降下來(lái)為零時(shí)，再打開(kāi)鍋蓋進(jìn)行檢查。(6) 滅菌液體時(shí)，應(yīng)將液體灌裝在硬質(zhì)的耐熱玻璃瓶中，以不超過(guò)滅菌液體時(shí)，應(yīng)將液體灌裝在硬質(zhì)的耐熱玻璃瓶中，以不超過(guò)3/4 體積為好，瓶口選用棉花紗塞，切勿使用未打孔的橡膠或軟木塞。體積為好，瓶口選用棉花紗塞，切勿使用未打孔的橡膠或軟木塞。(7) 使用間歇法或持續(xù)法滅菌時(shí)必須在滅菌物里外都達(dá)到使用間歇法或持續(xù)法滅菌時(shí)必須在滅菌物里外都達(dá)到100

7、后，后，開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間 在相同溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好的原因：在相同溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好的原因：熱蒸汽對(duì)細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)。水分子的存在有助熱蒸汽對(duì)細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)。水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)含水量與其凝固溫度成反比；更易使蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)含水量與其凝固溫度成反比；熱蒸汽比熱空氣穿透力強(qiáng)，能更加有效地殺滅微生物；熱蒸汽比熱空氣穿透力強(qiáng)，能更加有效地殺滅微生物；蒸汽存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w時(shí)可放出大量熱量，蒸汽存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變?yōu)?/p>

8、液體時(shí)可放出大量熱量，故可迅速提高滅菌物體的溫度。故可迅速提高滅菌物體的溫度。 在微生物實(shí)驗(yàn)室中所采取的預(yù)防雜菌污染的一切操作在微生物實(shí)驗(yàn)室中所采取的預(yù)防雜菌污染的一切操作措施，主要包括創(chuàng)造無(wú)菌環(huán)境、使用無(wú)菌器材和遵循無(wú)措施，主要包括創(chuàng)造無(wú)菌環(huán)境、使用無(wú)菌器材和遵循無(wú)菌操作規(guī)范。菌操作規(guī)范。 無(wú)菌環(huán)境：酒精燈、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌室無(wú)菌環(huán)境：酒精燈、超凈工作臺(tái)、無(wú)菌室 無(wú)菌器材：無(wú)菌器材： 無(wú)菌操作規(guī)范：無(wú)菌操作規(guī)范： 三、無(wú)菌操作三、無(wú)菌操作第三節(jié)第三節(jié) 微生物的觀察微生物的觀察一、菌落形態(tài)一、菌落形態(tài)大小大小 極?。O?。?mm）;?。ㄐ。?-2mm）；中等（）；中等（2-4mm）；大（）；大

9、（4mm）表面表面 光滑、皺褶、粗糙、同心環(huán)龜裂光滑、皺褶、粗糙、同心環(huán)龜裂邊緣邊緣 整齊、波狀、齒狀、卷毛狀、輪紋狀、木耳狀、缺刻狀整齊、波狀、齒狀、卷毛狀、輪紋狀、木耳狀、缺刻狀隆起隆起 扁平、略高、微凹、半球、瘤狀扁平、略高、微凹、半球、瘤狀 突起多丘陵?duì)钔黄鸲嗲鹆隊(duì)铑伾伾?光澤光澤 閃光、不閃光、金屬光澤閃光、不閃光、金屬光澤透明透明 不透明、半透明、透明不透明、半透明、透明質(zhì)地質(zhì)地 油脂、膜、粘稠狀、脆油脂、膜、粘稠狀、脆形狀形狀 圓形、放射狀、假根狀、絲狀伸展蔓延、分枝狀圓形、放射狀、假根狀、絲狀伸展蔓延、分枝狀一、菌體形態(tài)（鏡檢）一、菌體形態(tài)（鏡檢）1 1、工具、工具 顯微鏡顯

10、微鏡普通光學(xué)顯微鏡：明視野、暗視野、相差、熒光普通光學(xué)顯微鏡：明視野、暗視野、相差、熒光電子顯微鏡：幾十萬(wàn)倍至一百萬(wàn)倍電子顯微鏡：幾十萬(wàn)倍至一百萬(wàn)倍 掃描電鏡掃描電鏡 透射電鏡透射電鏡二、染色二、染色觀察觀察u 活菌活菌 壓滴壓滴 懸滴懸滴 美蘭染色美蘭染色u 方法方法正染正染 單染色法單染色法 不能鑒別不能鑒別 復(fù)染色法復(fù)染色法 可鑒別可鑒別 革染、抗酸性染色革染、抗酸性染色負(fù)染負(fù)染 莢膜莢膜其它其它二、測(cè)大小二、測(cè)大小測(cè)微尺測(cè)微尺 目鏡測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺 鏡臺(tái)測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺步聚：步聚：裝入目鏡裝入目鏡 臺(tái)測(cè)微尺夾于載物臺(tái)臺(tái)測(cè)微尺夾于載物臺(tái) 調(diào)好光線、焦距、晴晰看到刻度調(diào)好光線、焦距、晴晰看到刻度 移到臺(tái)微尺、轉(zhuǎn)目微尺，使兩者刻度第一移到臺(tái)微尺、轉(zhuǎn)目微尺，使兩者刻度第一 條線重合，向條線重合，向 左找出另外重合線左找出另外重合線 記錄兩尺重疊格數(shù)，公式計(jì)算記錄兩尺重疊格數(shù)，公式計(jì)算第三節(jié)第三節(jié) 保藏與復(fù)壯保藏與復(fù)壯 目的目的 不致死亡、絕種、不污染雜菌、保優(yōu)不致死亡、絕種、不污染雜菌、保優(yōu) 良性狀良性狀 原理原理 代謝處于不活躍、生長(zhǎng)繁殖受抑制代謝處于不活躍、生長(zhǎng)繁殖受抑制 低溫低溫 干燥干燥 缺氧缺氧一、保藏一