瓊脂糖凝膠電泳課件

1、瓊脂糖凝膠電泳課件瓊瓊 脂脂 糖糖 凝凝 膠膠 電電 泳泳瓊脂糖凝膠電泳課件一一 實驗目的實驗目的 學習瓊脂糖凝膠電泳分離學習瓊脂糖凝膠電泳分離DNA的原理和方法的原理和方法 檢測水稻總檢測水稻總DNA的純度與分子量的純度與分子量 檢測檢測PCR的結(jié)果的結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳課件二二 實驗原理實驗原理 電泳是分離和純化電泳是分離和純化DNA片段的最常用技術(shù)片段的最常用技術(shù) 瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45 開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度決定于瓊脂糖的濃度 DNA分子在堿性環(huán)境

2、中帶負電荷，在外加電場作用分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動下向正極泳動瓊脂糖凝膠電泳課件二二 實驗原理實驗原理 DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同的子篩效應。不同的DNA，分子量大小及構(gòu)型不同，分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶 瓊脂糖凝膠電泳法分離瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，是利用分子篩效應，是利用分子篩效應，遷移速度與分子量的對數(shù)值成反比關(guān)系遷移速度與分子量的對數(shù)值成反比關(guān)系 可依據(jù)可依據(jù)DNA分子的大小使其分離分子的大小使其分離瓊脂糖凝

3、膠電泳課件DNA分子在電泳條件下的遷移演示分子在電泳條件下的遷移演示.exe瓊脂糖凝膠電泳課件 Goodview可與可與DNA分子形成復合物，發(fā)射的熒分子形成復合物，發(fā)射的熒光強度較游離的光強度較游離的Goodview強度大強度大10倍以上，且倍以上，且熒光強度與熒光強度與DAN含量成正比含量成正比 示蹤染料和分子量標準參照物示蹤染料和分子量標準參照物二二 實驗原理實驗原理瓊脂糖凝膠電泳課件M 1 2 3 4PCR產(chǎn)物的產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳課件三三 實驗材料、用具及試劑實驗材料、用具及試劑 提取的水稻總提取的水稻總DNA和和PCR產(chǎn)物產(chǎn)物 電泳儀，電泳槽，電子水平，

4、移液器，槍頭，三角電泳儀，電泳槽，電子水平，移液器，槍頭，三角瓶、點樣板，微波爐等瓶、點樣板，微波爐等 瓊脂糖，瓊脂糖，TAE電泳緩沖液，電泳緩沖液， Goodview，載樣緩沖，載樣緩沖液（液（Loading buffer）瓊脂糖凝膠電泳課件四、實驗步驟四、實驗步驟1 制膠制膠： 100ml(0.5TAE)+0.8g瓊脂糖瓊脂糖 三角瓶三角瓶(1/3) 煮膠煮膠 溶解，冷卻至溶解，冷卻至60(不燙手不燙手)，加，加Goodview，倒板，倒板(4-6mm)，室溫下充分凝固，豎，室溫下充分凝固，豎直拔下梳子直拔下梳子 瓊脂糖凝膠電泳課件2 點樣點樣： 5l水稻總水稻總DNA+12 loadin

5、g buffer=7l PCR產(chǎn)物產(chǎn)物+3l loading buffer，混勻，吸取，混勻，吸取10l 10l Mark DNA( DNA-Hind )3 電泳電泳：電壓電壓3-5V/cm，約，約80-90V，注意電極方向，注意電極方向4 觀察觀察：紫外透射分析儀下觀察，時間不要太久紫外透射分析儀下觀察，時間不要太久四、實驗步驟四、實驗步驟瓊脂糖凝膠電泳課件五五 注意事項注意事項1 倒膠時把握好膠的溫度，不要高于倒膠時把握好膠的溫度，不要高于60 ，否則溫度，否則溫度太高會使制板變形太高會使制板變形2 膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，不要弄壞點樣孔不要弄壞點樣孔3 點樣時槍頭下伸，點樣孔內(nèi)不能有氣泡，緩沖液不點樣時槍頭下伸，點樣孔內(nèi)不能有氣泡，緩沖液不要太多要太多4 Goodview有毒，切勿用手接觸，更不要污染環(huán)境，有毒，切勿用