藥物制劑質(zhì)量研究-南京

1、藥物制劑質(zhì)量研究藥物制劑質(zhì)量研究方法方法選擇與驗(yàn)證選擇與驗(yàn)證山廣山廣志志中國中國醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)院科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)醫(yī)藥生物技術(shù)研究所研究所2014.10 南京安全有效質(zhì)量可控、方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證產(chǎn)品考察產(chǎn)品考察確定質(zhì)量限度確定質(zhì)量限度檢測方法選擇檢測方法選擇質(zhì)量目標(biāo)質(zhì)量目標(biāo)是是/ /否否訂入標(biāo)準(zhǔn)訂入標(biāo)準(zhǔn)QbD終產(chǎn)品工藝工藝研究研究放行放行標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵中間體質(zhì)控關(guān)鍵中間體質(zhì)控藥物質(zhì)量研究藥物研發(fā)的要求研究對(duì)象是什么？研究對(duì)象是什么？研究目的是什么？研究目的是什么？如何達(dá)到目的？如何達(dá)到目的？達(dá)到何種程度？達(dá)到何種程度？安全有效質(zhì)量可控什么樣的藥物是安全的？什么樣的藥

2、物是安全的？如何證明藥物是安全的？如何證明藥物是安全的？什么樣什么樣的藥物是有效的？的藥物是有效的？如何保證藥物的有效性？如何保證藥物的有效性？好藥好藥【鑒別鑒別】【檢查檢查】【含量測定（效價(jià)）含量測定（效價(jià)）】【性狀性狀】 外觀外觀色、臭、溶解度色、臭、溶解度 化學(xué)化學(xué)色色譜譜光譜光譜雜質(zhì)的定量或限度檢查（有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)的定量或限度檢查（有關(guān)物質(zhì)、 無機(jī)無機(jī)元素、殘留溶劑）元素、殘留溶劑）制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防腐劑制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防腐劑）溶出度、釋放度等功能檢查的檢測方法溶出度、釋放度等功能檢查的檢測方法有效成分的含量測定有效成分的含量測定 目視目視資料留存資料留存是否專是否專

3、屬屬是否是否存在干擾存在干擾內(nèi)毒素、無菌、微生物限度內(nèi)毒素、無菌、微生物限度其他方法（起碼證實(shí)方法的專屬性）其他方法（起碼證實(shí)方法的專屬性）方法準(zhǔn)確性方法準(zhǔn)確性精密性精密性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項(xiàng)目及方法要求【鑒別鑒別】【檢查檢查】【含量測定（效價(jià)）含量測定（效價(jià)）】【性狀性狀】 UV、旋光、密度、熔點(diǎn)化學(xué)、UV、IR、NMR、旋光HPLC、GC、容量法、酶法、生物測定法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中常見檢測方法化學(xué)、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（釋放）度、原子吸收、水分檢測方法選擇和設(shè)置 任何分析測試的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù) 今天你“QbD”了么？ 本品“仿質(zhì)量”還是“仿標(biāo)準(zhǔn)”？

4、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是控制產(chǎn)品質(zhì)量的基本手段和范圍 檢測方法是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的手段 仿藥典品種如何驗(yàn)證方法？ 三類藥如何仿？ 進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn) 國外藥典 我該用什么方法。？ 創(chuàng)新藥的檢測方法如何選擇？儀器有確定的技術(shù)指標(biāo)，經(jīng)過檢測證實(shí)其適用于需要驗(yàn)證的方法證明方法能夠?qū)崿F(xiàn)預(yù)期目的，證明方法能夠?qū)崿F(xiàn)預(yù)期目的，按預(yù)期要求運(yùn)行按預(yù)期要求運(yùn)行證實(shí)系統(tǒng)運(yùn)行能夠達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，證實(shí)系統(tǒng)運(yùn)行能夠達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，得到準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確性證明樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確性系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性試驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量控制質(zhì)量控制檢查檢查分析儀器分析儀器確認(rèn)確認(rèn)分析方法分析方法驗(yàn)證驗(yàn)證影響數(shù)據(jù)質(zhì)量的因素檢測方法的選擇適用性適用性先

5、進(jìn)性經(jīng)濟(jì)性經(jīng)濟(jì)性通用性通用性方法方法與技術(shù)與技術(shù)的的“更新?lián)Q代更新?lián)Q代”方法方法能夠滿足實(shí)驗(yàn)室能夠滿足實(shí)驗(yàn)室間方法傳遞的要求間方法傳遞的要求方法方法能夠充分反映質(zhì)控目標(biāo)能夠充分反映質(zhì)控目標(biāo)方法方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便、易行準(zhǔn)確、靈敏、簡便、易行含量和雜質(zhì)分析方法的選擇 含量與雜質(zhì)分析是否采用同一個(gè)條件 HPLC or UHPLC or 2DLC or GC 正相 or 反相 or HILIC IC or CE or 離子對(duì) 含量與雜質(zhì)采用何種檢測器 UV檢測器是否ok 折光、ELSD、CAD、NQAD CD 、ED MS？ 前處理方法是否有效？藥物有效性的基石-對(duì)照品 理化檢測用理化檢測用國家藥品

6、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)系指用于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中物理和化學(xué)測試用，具有確定特性，用以鑒別、檢查、含量測定、校準(zhǔn)設(shè)備的對(duì)照品。 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理辦法2011.10.1 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)要求 一級(jí)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有很好的質(zhì)量特性，其特性量值采用定義法或其他精準(zhǔn)、可靠的方法進(jìn)行計(jì)量 二級(jí)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有良好的質(zhì)量特性，其特性量值采用準(zhǔn)確、可靠的方法或直接與一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相比較的方法進(jìn)行計(jì)量。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分類化學(xué)對(duì)照品生物標(biāo)準(zhǔn)品生物參考品對(duì)照藥材/對(duì)照提取物體外診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)品藥用輔料對(duì)照品藥包材對(duì)照物質(zhì)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1. 含量測定用化學(xué)對(duì)照品：含量測定用化學(xué)對(duì)照品：系指具有確定的量值，用于

7、測定藥品中特定成分含量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。2. 鑒別或雜質(zhì)檢查用化學(xué)對(duì)照品：鑒別或雜質(zhì)檢查用化學(xué)對(duì)照品：系指具有特定化學(xué)性質(zhì)，用于鑒別或確定藥品某些特定成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。3. 對(duì)照藥材對(duì)照藥材/對(duì)照提取物：對(duì)照提取物：系指用于鑒別中藥材或中成藥中某一類成分或組分的對(duì)照物質(zhì)。4. 校正儀器校正儀器/系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用對(duì)照系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用對(duì)照品：品：系指具有特定化學(xué)性質(zhì)用于校正檢測儀器或供系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。供鑒供鑒別用別用供檢供檢查用查用供含供含量測量測定用定用供系統(tǒng)供系統(tǒng)適用性適用性用用對(duì)照品的特點(diǎn)均勻均勻量值準(zhǔn)確量值準(zhǔn)確穩(wěn)定穩(wěn)定藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制管理機(jī)構(gòu)藥典藥典管理機(jī)構(gòu)管理機(jī)構(gòu)品種品種中國藥典中國

8、食品藥品檢定研究院（NIFDC）2780國際藥典（Ph. Int）WHO委托歐洲藥事管理局（EDQM、NIBSC）542美國藥典（USP）美國藥典會(huì)（USP）3048歐洲藥典（Ph. Eur）歐洲藥事管理局（EDQM）2548英國藥典（BP）英國藥典會(huì)（BPCL）英國政府化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室（LGC）3109日本藥典（JP）日本公定書協(xié)會(huì)（PMRJ）246對(duì)照品（標(biāo)準(zhǔn)品）、工作對(duì)照品、雜質(zhì)對(duì)照品 對(duì)照品用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 標(biāo)準(zhǔn)品用于生物檢定、抗生素或生物藥品生物檢定、抗生素或生物藥品中含量或效價(jià)測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以效價(jià)單位(U)表示。 一級(jí)對(duì)照品在特定的背景下具有適

9、宜的質(zhì)量、其量值不需要再與另外的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)比的對(duì)照品 二級(jí)對(duì)照品經(jīng)與一級(jí)對(duì)照品對(duì)照而得來的對(duì)照品。確證的范圍及檢測的程度小于一級(jí)對(duì)照品。（亦稱：工作對(duì)照品） 雜質(zhì)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立的要求 制備 標(biāo)定 保存和分發(fā) 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)需要具有可行性和適用性 可大量制備高純物質(zhì) 方法專屬性強(qiáng) 穩(wěn)定性良好 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合理、可靠對(duì)照品標(biāo)定程序及項(xiàng)目制定標(biāo)化方案標(biāo)化實(shí)驗(yàn)分裝標(biāo)化報(bào)告發(fā)放/儲(chǔ)存/穩(wěn)定性標(biāo)化方案起草 查閱各國質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 原料的檢驗(yàn)報(bào)告 原料的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)及引濕性 確定對(duì)照品用途，了解原料性質(zhì) 制定標(biāo)化項(xiàng)目及要求 形成初稿，負(fù)責(zé)人審核標(biāo)化項(xiàng)目無國家對(duì)照品的品種 性狀（比旋度） 鑒別（MS、I

10、R、NMR、UV） 檢查 有關(guān)物質(zhì)（國內(nèi)外藥典方法）水分/干燥失重殘留溶劑熾灼殘?jiān)?含量測定（對(duì)標(biāo)、容量法）標(biāo)化項(xiàng)目有國家對(duì)照品的品種 性狀&鑒別 檢查 有關(guān)物質(zhì)水分/干燥失重 含量測定（對(duì)標(biāo)法）u當(dāng)國家對(duì)照品換批時(shí)，必須重新標(biāo)定u三個(gè)實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)對(duì)照品標(biāo)定項(xiàng)目 首批 UV IR NMR MS 元素分析 X-ray衍射 官能團(tuán)分析 常用 HPLC（DAD） GC TLC CE DSC 相容度法 UV、IR、NMR 容量法 旋光度 水分、殘留溶劑、干燥失重標(biāo)化實(shí)驗(yàn) 如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)過程中的現(xiàn)象 溶解過程，溶液狀態(tài) 有關(guān)物質(zhì)計(jì)算方式 歸一化法 自身對(duì)照法 外標(biāo)法 HPLC有關(guān)物質(zhì)：平行2份 干燥失重：

11、精密稱定2份，每份稱樣量約1.0g 水分：分裝前平行3份；分裝后取X支 熾灼殘?jiān)?：1份 引濕性 ：DVS/藥典附錄引濕性 含量測定：對(duì)照品和原料各平行2份，每份不低于20mg 分裝 分裝條件的確定 引濕性 用途 使用方式 分裝記錄 溫濕度 數(shù)量 分裝后均勻性的考察 水分 有關(guān)物質(zhì) 包裝容器必須能夠保證內(nèi)容物的穩(wěn)定性玻璃（塑料）安瓿主要用于易氧化及液體原料常規(guī)品種可采用西林瓶包裝對(duì)于易于氧化或潮解的品種，必須控制分裝間的濕度并在氮（氬）氣氛圍下分裝 最小包裝單元的實(shí)際裝量與標(biāo)示的裝量應(yīng)符合規(guī)定的允差要求，固體原料的裝量一般為標(biāo)示量的10%標(biāo)化報(bào)告（一）概述（一）概述（二）原料的來源與檢驗(yàn)（二）

12、原料的來源與檢驗(yàn)（三）結(jié)論（三）結(jié)論標(biāo)化報(bào)告（一）概述（一）概述 類別類別 各國藥典收載情況：各國藥典收載情況：EP、USP、JP 國內(nèi)藥品標(biāo)準(zhǔn)國內(nèi)藥品標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量（二）原料檢驗(yàn)：（二）原料檢驗(yàn)： 1. 性狀性狀 根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的描述判定質(zhì)量的優(yōu)劣；根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的描述判定質(zhì)量的優(yōu)劣；若沒有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也要將樣品實(shí)際性狀記錄下來若沒有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也要將樣品實(shí)際性狀記錄下來 理化性質(zhì)：比旋度、折光系數(shù)、引濕性等理化性質(zhì)：比旋度、折光系數(shù)、引濕性等 2. 鑒別鑒別 結(jié)構(gòu)確證：結(jié)構(gòu)確證：UV、IR、NMR、MS、元素分、元素分析、析、X衍射、衍射、HPLC/TL

13、C/GC鑒別、關(guān)鍵官能團(tuán)的專屬鑒別、關(guān)鍵官能團(tuán)的專屬性鑒別性鑒別標(biāo)化報(bào)告3. 檢查檢查純度純度 TLC、HPLC、 GC、DSC干燥失重或者水分干燥失重或者水分殘留溶劑殘留溶劑熾灼殘?jiān)鼰胱茪堅(jiān)?. 含量測定含量測定容量法容量法UV法法 HPLC法法標(biāo)化報(bào)告定值方法影響對(duì)照品準(zhǔn)確定值的因素 HPLC純度 水分 熾灼殘?jiān)?殘留溶劑 引濕性 穩(wěn)定性穩(wěn)定性考察 先密后疏原則 考察項(xiàng)目 有關(guān)物質(zhì) 水分/干燥失重 含量測定 可接受的變化限度對(duì)照品的使用的注意事項(xiàng)使用方式 本品使用前不需處理，可直接使用 X干燥3小時(shí)后使用 使用時(shí)自測水分注意事項(xiàng)： 開瓶后一次使用完畢 僅供國家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定項(xiàng)下使用 說明書網(wǎng)

14、上下載，按說明書操作 更換新批次后，根據(jù)品種監(jiān)測情況，一般對(duì)上一批次設(shè)置3-6個(gè)月仍可使用的緩沖期對(duì)照品局限性 盡管同一批對(duì)照品不同標(biāo)定方法的含量有很好的相關(guān)性，但并不完全相同，有時(shí)差別會(huì)很大。 如：頭孢呋肟酯對(duì)照品，HPLC標(biāo)定為96.9%，供含量測定用；UV為98.8%，供溶出度測定。 中國藥典凡例明確規(guī)定Chp對(duì)照品僅用于正文中所規(guī)定的分析方法。 常將含量測定用的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌酚糜谌艹龆葯z查，而含量測定方法與溶出度分析方法又不同，故極易引起問題！效期和說明書 中國藥品生物制品檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)品大部分均無使用說明書和使用期限。 大都沿用新的批號(hào)出現(xiàn)、舊的批號(hào)自動(dòng)停止的管理方式。二級(jí)對(duì)照品（

15、工作對(duì)照品）的標(biāo)定一級(jí)對(duì)照品的規(guī)格小、價(jià)格高、購買周期長的缺點(diǎn)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室對(duì)照品用量大的企業(yè)來說，使用二級(jí)對(duì)照品成了實(shí)驗(yàn)室的首選。選定樣品優(yōu)質(zhì)，高純標(biāo)定樣品選擇“合理”的方法標(biāo)定13人、3樣、3機(jī)。RSD應(yīng)小于0.5%（HPLC法）標(biāo)定2建議按照“新”對(duì)照品標(biāo)定一次，與“對(duì)標(biāo)”結(jié)果應(yīng)相符。分裝西林瓶，單次使用量，一次用完。效期1或2年（據(jù)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)），不超過樣品效期儲(chǔ)存28期間核查半效期雜質(zhì)對(duì)照品 是否需要設(shè)置雜質(zhì)對(duì)照品 外標(biāo)法定量？自身對(duì)照行不行？加校正因子行不行？ 系統(tǒng)適用性（定位）？相對(duì)保留時(shí)間行不行？降解能否獲得？是否有相似替代品？ 技術(shù)門檻？！ 雜質(zhì)對(duì)照品的研制 獲得方式：定向合成、

16、富集純化、分離純化 結(jié)構(gòu)確證 純度檢查 是否穩(wěn)定，能否滿足長期供應(yīng)？“量體裁衣”方法學(xué)驗(yàn)證方法驗(yàn)證的步驟USP規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用試驗(yàn)方式進(jìn)行方法驗(yàn)證：“應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)室的研究制定成一定的分析方法驗(yàn)證程序，證明方法的性能參數(shù)符合預(yù)期的分析應(yīng)用要求?！彬?yàn)證過程應(yīng)滿足以下條件：易于使用；能夠用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)自動(dòng)控制；每次分析的成本；樣品能量；運(yùn)行時(shí)間；以及環(huán)境、健康和安全要求分析方法驗(yàn)證的法規(guī)要求方法驗(yàn)證的目的證明所采用方法適合于相應(yīng)檢測項(xiàng)目的要求，能夠真實(shí)反映產(chǎn)品質(zhì)量，做到質(zhì)量可控！新分析方法用于常規(guī)檢測前必須驗(yàn)證方法轉(zhuǎn)移到新的實(shí)驗(yàn)室后需要進(jìn)行重現(xiàn)驗(yàn)證（或方法確認(rèn)）新藥申報(bào)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的分析方法必須驗(yàn)證！生

17、產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、分析方法修訂時(shí)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的分析方法必須驗(yàn)證！方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則中國藥典2010年版二部附錄XIX A（只有項(xiàng)目沒有標(biāo)準(zhǔn)）ICH Q2（A/B）FDA cGMPs 211.165，211.194USP 通則, ,驗(yàn)證項(xiàng)目及內(nèi)容不同項(xiàng)目驗(yàn)證內(nèi)容不同！以證明方法適用為根本目的！項(xiàng)目內(nèi)容項(xiàng)目內(nèi)容鑒別鑒別雜質(zhì)定量測定雜質(zhì)定量測定雜質(zhì)限度檢查雜質(zhì)限度檢查含量測定及含量測定及溶出度測定溶出度測定準(zhǔn)確度+精密度+重復(fù)性+中間精密度+專屬性檢測限定量限線性范圍耐用性 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。 視具體情況予以驗(yàn)證。含量測定方法

18、驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn) 容量分析法：原料藥精制品（99.5%）或?qū)φ掌房疾炀芏萊SD0.2%；回收率99.7100.3% UV法：精制品考察精密度RSD1%；制劑回收率98102%；線性吸光度在0.20.7，r0.9999(n 5)，截距近于零。 HPLC法：精制品考察精密度RSD2%；制劑回收率98102%；線性r0.999(n 5)，截距趨于零方法驗(yàn)證的步驟 初步確定分析方法 制定驗(yàn)證方案 驗(yàn)證目的、驗(yàn)證項(xiàng)目、接受標(biāo)準(zhǔn) 準(zhǔn)備儀器設(shè)備、原料、對(duì)照品 人員準(zhǔn)備、文獻(xiàn)材料調(diào)研 開展驗(yàn)證 收集實(shí)驗(yàn)記錄和圖譜 提交驗(yàn)證報(bào)告 評(píng)價(jià)方法是否通過驗(yàn)證方法驗(yàn)證的籌備防止不必要的失誤 用于測定關(guān)鍵驗(yàn)證參數(shù)的化學(xué)品，應(yīng)

19、具備足夠的數(shù)量，足夠穩(wěn)定，并且按照技術(shù)指標(biāo)核查其具有確切的成分和純度。 其他材料和消耗品也應(yīng)符合要求。應(yīng)選用新的并且符合色譜柱性能指標(biāo)要求的色譜柱（防止材料導(dǎo)致的失?。?分析設(shè)備應(yīng)有明確的規(guī)定和良好的性能，并經(jīng)過確認(rèn)或校準(zhǔn)，以確保其滿足分析方法要求的功能和性能指標(biāo)。 應(yīng)選擇中等性能的設(shè)備，而不要選擇性能最好的設(shè)備。否則，用不同設(shè)備進(jìn)行中間精密度和重現(xiàn)性研究時(shí)可能會(huì)有問題，不容易滿足標(biāo)準(zhǔn)限度的要求。 操作人員應(yīng)對(duì)技術(shù)和設(shè)備足夠熟悉。這樣，他們可以更容易地識(shí)別和診斷不可預(yù)見的問題，并且更加高效地完成整個(gè)過程。分析方法驗(yàn)證順序沒有標(biāo)準(zhǔn)程序！耗時(shí)最長的實(shí)驗(yàn)放在最后！1. 專屬性2. 重復(fù)性（RT、Ar

20、ea）3. 線性、定量限、檢測限、范圍4. 準(zhǔn)確度5. 中間精密度（重現(xiàn)性）6. 耐用性部分?jǐn)?shù)據(jù)可以套用！說法不一！斟酌考慮！方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求保證分析方法能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制 專屬性有其他成分（雜質(zhì)、輔料等）存在時(shí)，擬定的方法能否準(zhǔn)確（分離）測定出被測物；反映方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力；指用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾。 分別分析加有雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等控制成分的樣品和實(shí)際樣品，比較兩組測試結(jié)果空白無干擾主成分與有關(guān)物質(zhì)完全分離（分離度r 1.5）峰純度符合規(guī)定（ 980） 考慮基質(zhì)(輔料、水、食品等)對(duì)專屬性的干擾，關(guān)注樣品制備減少干擾的發(fā)生。方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬

21、性 鑒別 與可能的共存物或結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)相區(qū)別 空白輔料、結(jié)構(gòu)相似物以及其他組分均呈負(fù)反應(yīng) 含量測定、雜質(zhì)檢測 提供代表性色譜圖 表明各組分（成分）位置 分離度符合規(guī)定 含量測定供試品中加入雜質(zhì)，考察對(duì)測試結(jié)果的影響(雜質(zhì)定位) 雜質(zhì)測定供試品加入雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間的分離情況降解試驗(yàn)以及降解途徑的研究 降解條件選擇 酸、堿、氧化 濃度、溫度、時(shí)間 高溫、光照 時(shí)間、光強(qiáng) 分離條件的優(yōu)化 峰純度 分離度 主要降解雜質(zhì)鑒定 降解程度控制 降解1020% 至少有一個(gè)條件降解 與非降解品比較；體現(xiàn)考察摸索和研究的過程方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性嘗試選擇合適的色譜柱或色譜條件獲得方法的專屬性評(píng)價(jià)目標(biāo)色譜峰純度（

22、二極管陣列檢測器、MS）當(dāng)共洗脫化合物的光譜圖非常接近時(shí)，紫外-可見二極管陣列檢測器就有其局限性，這在代謝物及其母體化合物時(shí)極有可能發(fā)生方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性 當(dāng)共洗脫化合物的光譜圖非常接近時(shí)，采用MS檢測器 質(zhì)譜通常比紫外光譜專屬性更強(qiáng)，因此常用于色譜的選擇性評(píng)價(jià)方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性豬去氧膽酸+膽酸膽酸 RT: 0.00 - 40.0002468101214161820222426283032343638Time (min)05101520253035404550556065707580859095100Relative Abundance15.5715.4615.7314.3415.

23、8914.2016.1513.3116.4417.4918.757.0425.8512.7821.499.838.7224.2826.93 28.9832.465.964.943.222.0036.7238.5935.86NL:1.19E7Base Peak F: ITMS - c ESI Full ms 50.00-1000.00 MS dansuan+zhu2m/z=391.44豬去氧膽酸m/z=407.43膽酸m/z=407.38膽酸異構(gòu)體？膽酸豬去氧膽酸方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求系統(tǒng)適用性 系統(tǒng)適用性 6份供試品溶液 響應(yīng)因子RSD 2.0 % 主峰保留時(shí)間RSD 1.0% 主峰拖尾因子2.0

24、（0.951.05） 主峰與雜質(zhì)峰基線分離（ 2.0 ） 理論板數(shù)符合規(guī)定方法驗(yàn)證項(xiàng)目準(zhǔn)確度方法驗(yàn)證項(xiàng)目準(zhǔn)確度原料藥原料藥 利用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測定 與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定結(jié)果進(jìn)行比較（容量法！）制劑制劑 空白輔料+對(duì)照品 制劑+對(duì)照品（無法獲得空白輔料）方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求精密度 精密度同一樣品多次測定結(jié)果的接近程度 重復(fù)性 6份供試液（100%濃度），含量RSD 2.0%（n=6） 檢測范圍內(nèi)，3水平，9樣品測定（回收率結(jié)果） 中間精密度 （與重現(xiàn)性“二選一”） 6份供試液，雙人雙機(jī)分別測定，含量RSD 2.0%（n=12） 人員、儀器、操作條件、試劑、色譜柱等因素影響 重現(xiàn)

25、性 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人員測定結(jié)果的精密度（方法通用性，方法轉(zhuǎn)移）準(zhǔn)，不精不準(zhǔn)，精準(zhǔn)，精方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求靈敏度（檢測限） 檢測限被測物能夠被檢測出的最低濃度或含量。 限度指標(biāo)，無需定量。 目視法：能夠可靠檢出的被測物的最低濃度或含量(結(jié)果記錄！) 信噪比法：儀器分析法(計(jì)算基線噪音)，s/n 3 標(biāo)準(zhǔn)差法(I)：A3 (n6) A:平均峰面積；：偏差 標(biāo)準(zhǔn)差法(II)： 空白=0：測背景噪音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲上3對(duì)應(yīng)的濃度，即為檢出限 空白0：測背景噪音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲上(Y截距+3)對(duì)應(yīng)的濃度，該濃度即為檢出限 空白0：測背景噪音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲

26、上3對(duì)應(yīng)的濃度，X截距+該濃度即為檢出限方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求靈敏度（定量限） 檢測限被測物能夠被定量測定的最低濃度或含量，結(jié)果應(yīng)準(zhǔn)確和精密。 信噪比法：儀器分析法(計(jì)算基線噪音)，s/n 10 標(biāo)準(zhǔn)差法：A10 (n6) A:平均峰面積；：偏差 六份定量限溶液，主峰保留時(shí)間RSD 2.0%；主峰峰面積RSD 2.0% 工作站計(jì)算信噪比，注意選取參比時(shí)間 色譜圖顯示s/n方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求線性 線性被測物濃度與結(jié)果之間呈正比關(guān)系的程度 回歸方程（最小二乘法；一次、二次、雙對(duì)數(shù)） 80%120%；定量限120% n6（至少五個(gè)點(diǎn)，均勻分布） r 0.998 Y截距在100%響應(yīng)值的2%內(nèi) 響應(yīng)因子R

27、SD 2.0%方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求范圍 范圍 達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性下，測試方法使用的高、低濃度或量的區(qū)間 根據(jù)分析方法具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確性、精密度驗(yàn)證的結(jié)果和要求確定 一般用與檢測結(jié)果相同的單位表述（百分比、百萬分之幾）。 含量測定：80%120% 含量均勻度：70%130% 雜質(zhì)：報(bào)告值（定量限）限度120% 溶出度：范圍20%（下限-20%上限+20%）10012080線性回收精密度范圍方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求耐用性 耐用性實(shí)驗(yàn)條件略有變動(dòng)，是否影響檢測結(jié)果；衡量城規(guī)情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性；如方法易受影響，應(yīng)著重注明！關(guān)注溶液穩(wěn)定性影響（不同儲(chǔ)存時(shí)間的樣品和對(duì)照品溶液與新制備對(duì)照品溶液的

28、比對(duì)結(jié)果分析）關(guān)注提取條件影響！常規(guī)考察：流動(dòng)相比例變化(5%)、pH變化(0.2)、柱溫變化(5)、流速變化(20% )、檢測波長（2nm）色譜柱：同品牌不同批號(hào)每條件測試2次拖尾因子2.0主峰與雜質(zhì)峰基線分離各條件含量數(shù)據(jù) RSD2.0%方法確認(rèn)和轉(zhuǎn)移 方法驗(yàn)證主要在產(chǎn)品開發(fā)階段完成 生產(chǎn)后的驗(yàn)證包括方法確認(rèn)和方法轉(zhuǎn)移 方法確認(rèn)本單位生產(chǎn)的產(chǎn)品是否符合變更后的國家標(biāo)準(zhǔn)或藥典標(biāo)準(zhǔn)關(guān)注新舊方法的區(qū)別確認(rèn)新方法的接受標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)際樣品和穩(wěn)定性樣品進(jìn)行考察 方法轉(zhuǎn)移研發(fā)單位轉(zhuǎn)移方法至接受單位（生產(chǎn)單位）恰當(dāng)?shù)姆桨盖‘?dāng)?shù)姆桨高m用的方法適用的方法精密的驗(yàn)證精密的驗(yàn)證優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品雜質(zhì)譜分析 根據(jù)主成

29、分及雜質(zhì)的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)的控制要求，采用適當(dāng)手段將雜質(zhì)的信號(hào)放大，易于辨認(rèn)和定量。 化合物結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)、劑型特征、工藝過程、標(biāo)準(zhǔn)要素 綜合設(shè)計(jì)、嚴(yán)謹(jǐn)研究、規(guī)范驗(yàn)證。 專屬、靈敏、準(zhǔn)確、簡捷。 分析方法各有局限，注意不同原理分析方法間的相互補(bǔ)充和驗(yàn)證。 雜質(zhì)譜研究遵循原則：雜質(zhì)譜分析方法建立 方法的選擇 不同原理方法比較 方法的最優(yōu)化 色譜系統(tǒng)選擇 雜交色譜（柱串聯(lián)） 二維色譜 新技術(shù)應(yīng)用（HILIC） 檢測器的選擇 UV、DAD/ ELSD、CAD、NQAD IR / MS雜質(zhì)譜分析雜質(zhì)比較與譜峰歸屬 比較方法 圖譜疊加 平行列表 逐峰比較 結(jié)果報(bào)告 新雜質(zhì)（個(gè)數(shù)、單個(gè)最大、總

30、量） 單一新雜質(zhì)量（0.1%？、0.2%？） 新雜質(zhì)總量所占比例峰序號(hào)峰序號(hào)溶劑峰溶劑峰對(duì)照藥對(duì)照藥自制品自制品峰性質(zhì)峰性質(zhì)新增雜質(zhì)總量新增雜質(zhì)總量10.20.20.2溶劑峰24.2/0.2%新增雜質(zhì)新增雜質(zhì)38.2/0.5%8.2/0.3%原有雜質(zhì)411.8/0.5%苯乙胺518.2/0.5%新增雜質(zhì)（苯乙醇）雜質(zhì)總量1.2%1.0%0.7%雜質(zhì)譜分析阿奇霉素中可能的雜質(zhì)：37種原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9

31、，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾?、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氫阿奇霉素、 O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮系統(tǒng)圖

32、實(shí)際圖雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)方法合理性色譜方法色譜方法（HPLC、TLC、GC）HPLC：雜質(zhì)是否有UV吸收(檢測器的選擇)、溶液是否穩(wěn)定、方法本身是否引起藥物降解TLC：固定相的選擇顯色方式（UV吸收的差異、顯色劑靈敏度的差異）溶液是否穩(wěn)定薄層固定相是否會(huì)引起藥物的降解檢測手段檢測手段檢測器DAD / UVELSD /CAD/ NQADIR /MS 首選DAD 檢測器，考慮”通用”檢測器檢出雜質(zhì)的數(shù)與量干擾因素操作的便捷性 除非GC，不建議衍生化雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)建立的方法能否有效檢出所有雜質(zhì)？ HPLC洗脫方法的選擇-等度洗脫等度洗脫 or 梯度梯度洗脫洗脫 等度洗脫極性大的化合物可能被掩蓋；極性小的

33、化合物難以被洗脫，甚至保留在柱上 梯度洗脫雜質(zhì)研究中值得借鑒的手段；有效檢出極性相差懸殊的系列雜質(zhì)驗(yàn)證等度洗脫法對(duì)各類雜質(zhì)的檢出能力原方法原方法新方法新方法雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)測定值是否真實(shí)反映雜質(zhì)的含量？ 申報(bào)資料中“HPLC檢測波長的選擇”問題 (a)直接將主藥的最大吸收波長選作檢測波長; (b)簡單地套用含量測定的色譜條件。實(shí)際仍是以主藥的最大吸收波長作為有關(guān)物質(zhì)檢測波長; (c)以樣品進(jìn)行破壞性試驗(yàn)（酸、堿、熱、光照、氧化等）后的溶液做紫外掃描。由于未破壞主藥所占比例較大，故破壞性試驗(yàn)后溶液的最大吸收波長一般仍為主藥的最大吸收波長。若盲目地將主藥的最大吸收波長確定為檢測波長，則雜質(zhì)在此波長下

34、的吸收可能偏低；某些雜質(zhì)甚至無吸收，這樣會(huì)造成對(duì)雜質(zhì)含量的低估甚至漏檢，從而不能反映產(chǎn)品的真實(shí)質(zhì)量。無紫外吸收或檢測波長處吸收相差較大的多種化合物，有時(shí)在單一檢測波長處不能檢出雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)測定值是否真實(shí)反映雜質(zhì)的含量？HPLC波長選擇解決方案對(duì)產(chǎn)品中可能存在的雜質(zhì)（合成原料、中間體、副產(chǎn)物以及降解產(chǎn)物）的紫外吸收特性進(jìn)行研究。 已知雜質(zhì)的紫外吸收特性可采用對(duì)其流動(dòng)相溶液直接進(jìn)行掃描的方法考察; 未知雜質(zhì)（如未知降解產(chǎn)物等）可通過二極管陣列檢測器考察其紫外吸收情況。根據(jù)各主要雜質(zhì)及主成分的紫外吸收特性，選取響應(yīng)值基本一致的波長作為有關(guān)物質(zhì)的檢測波長。 若對(duì)不同雜質(zhì)難于找到均適宜的檢測波長： 選

35、擇在不同波長下分別測定， 采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。改用通用檢測器（ELSD、CAD、NQAD）雜質(zhì)研究首選HPLC-DAD；建議HPLC-DAD-CAD聯(lián)用！雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)多種方法聯(lián)用 由雜質(zhì)多樣性復(fù)雜性和方法局限性所決定。 單一方法不能滿足多個(gè)雜質(zhì)的檢測時(shí)，可采用兩種或兩種以上的方法互為補(bǔ)充。 化學(xué)法、色譜法、光譜法、生物檢定法 同一方法采用不同的測試條件，如正相HPLC、反相HPLC、不同流動(dòng)相的反相HPLC等 分離技術(shù)與檢測手段聯(lián)用，較為有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-DAD、CE等 多維色譜（HPLC-IC） 多檢測器聯(lián)用（LC-DAD-CAD-MS

36、）雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測方法的規(guī)范性驗(yàn)證 專屬性：原料藥合成中間體、粗品等的分離度考察 原料藥及制劑的強(qiáng)制破壞實(shí)驗(yàn) 制劑輔料干擾實(shí)驗(yàn) 雜質(zhì)加入實(shí)驗(yàn) 與藥典或經(jīng)過論證的其他方法比較 峰純度檢測（DAD/MS）雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測方法的規(guī)范性驗(yàn)證 靈敏度：通常用檢測限及定量限表征 直觀評(píng)價(jià)、信噪比、響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率獲得。 關(guān)注雜質(zhì)紫外吸收特性，確定適宜波長； 判斷是否需要采用雜質(zhì)對(duì)照品 精密度： 重復(fù)性(在相同條件下由同一分析人員測定所得結(jié)果的精密度) 中間精密度(在同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度) 重現(xiàn)性(在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度)雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測方法的規(guī)范性驗(yàn)證 準(zhǔn)確度： 已知雜質(zhì)：回收率（根據(jù)精密度、專屬性、線性）推斷 未知雜質(zhì)：與另一成熟方法比對(duì)、根據(jù)質(zhì)量平衡原理結(jié)合含量等結(jié)果進(jìn)行粗略判定，必要時(shí)研究幾種不同色譜條件甚至不同測定原理的方法進(jìn)行比較選用 線性：在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，響應(yīng)值與待測物質(zhì)量之間成正比例關(guān)系的程度。 范圍：檢測方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的高、低濃度或量的區(qū)間 范圍應(yīng)在規(guī)定限度的20%間或定量限至限度的+20%間，若含量測定和雜質(zhì)檢查同用一套色譜系統(tǒng)，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)限度的-20%至含量限度（上限）的+20%間 耐用性：指測定條件有