TM-072重金屬檢查

1、檢驗方法文件編號: TM-072版本號: 01重金屬檢查法頁碼: 8 /8生效日期:重金屬檢查法起草人審核人審核人批準人部門QCQAQC質量管理部姓名饒濤黃祥彪汪大才鄧志軍簽名日期分發(fā)部門：質量管理部QC1. 目的制訂重金屬檢查的標準操作規(guī)程，規(guī)范重金屬檢查的操作。2. 范圍需進行重金屬檢查的物料。3. 職責QC 4. 操作內容4.1 簡述4.1.1 重金屬是指在規(guī)定實驗條件下能與顯色劑作用顯色的金屬鹽類雜質。中國藥典2010年版采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛的限量表示。4.1.2 由于實驗條件不同，分為四種檢查方法：第一法適用于供試品不經有機破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢

2、查；第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，經處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第三法用來檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬；第四法用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限量低的品種。4.1.3 四種方法顯示的結果均為重金屬硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色，采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時間長，就會有硫化物聚集下沉。4.1.4 重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml調節(jié)pH較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經實驗也以2ml為佳，顯色時間一

3、般為2分鐘。以1020gPb與顯色劑所產生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實驗條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產生的硫化氫呈色的金屬離子有銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。4.1.5 由于在藥品生產過程中遇到鉛的機會較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標準鉛溶液。4.2 儀器與用具4.2.1 納氏比色管 應注意選擇各管之間的平行性，玻璃色澤一致，內徑、刻度標線高度一致。比色管洗滌時避免劃傷內壁。4.2.2 過濾器、墊圈、濾膜（直徑為10mm，孔徑為3.0m，使用前在水中浸泡24小時以上，可使色斑均勻）、50ml注射器（應能與濾器上蓋入口處緊密聯(lián)接）。4

4、.3 試藥和試液4.3.1 標準鉛溶液 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.1598g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當于10g的Pb)。4.3.2 硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（pH3.5）與抗壞血酸等均按藥典規(guī)定配制。4.3.3 稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖約5g，置瓷坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過，貯于滴瓶中備用。臨用時，根據供試液色澤深淺，取適當量調節(jié)使用。4.4 操作方法4.4.

5、1 第一法4.4.1.1 取25ml納氏比色管兩支，編號為甲、乙。4.4.1.2 甲管中加標準鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水或該藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。4.4.1.3 乙管中加入該藥品項下規(guī)定的方法制成的供試液25ml。4.4.1.4 如供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它無干擾的有色溶液，使其色澤與乙管一致。4.4.1.5 在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.1.6 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時，可取該藥品項下規(guī)定的2倍量的供試品和試液，加水

6、或該藥品項下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙2等分，乙管中加水或該藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，經濾膜（孔徑3m）濾過，然后甲管中加入標準鉛溶液一定量，加水或該藥品項下規(guī)定的溶劑使成25ml，再在乙管中加硫代乙酰胺試液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比較，即得。4.4.1.7 供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時，可取該藥品項下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.51.0g，并在對照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。4.4.1.8 配制供試品溶液時，如使用的鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當?shù)南←}酸），氨試液超過2m

7、l，或加入其他試劑進行處理者，除另有規(guī)定外，對照液中應取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml溶解后，移置甲管中，加標準鉛溶液一定量，再加水稀釋成25ml。4.4.2 第二法4.4.2.1 除另有規(guī)定外，取在500600灼燒的熾灼殘渣項下遺留的殘渣，加硝酸0.5ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移至乙管中，加水稀釋成25ml。4.4.2.2 如不取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，則可取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.

8、0ml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移至乙管中，加水稀釋成25ml。4.4.2.3 取配制供試溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移至甲管中，加標準鉛溶液一定量，加水稀釋成25ml。4.4.2.4 在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.3

9、第三法4.4.3.1 取25ml納氏比色管兩支，編號為甲、乙。4.4.3.2 除另有規(guī)定外，取供試品適量，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置乙比色管中。4.4.3.3 取一定量的標準鉛溶液，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置甲比色管中。4.4.3.4 于甲、乙兩管中各加硫化鈉試液5滴，搖勻。4.4.3.5 甲、乙管同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中所顯的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.4 第四法4.4.4.1 標準鉛斑的制備 精密量取標準鉛溶液一定量，置小燒杯中，加水或該藥項下的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置1

10、0分鐘，用50ml注射器轉移至過濾器中進行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，即得。4.4.4.2 檢查法 照該藥品項下規(guī)定制成的供試液10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉移至過濾器中進行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，將生成的色斑與標準鉛斑比較，不得更深。4.4.4.3 若溶液有顏色或渾濁，應對換輔助濾板與濾膜的位置，進行預濾，如濾膜上有污染，應換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；反轉輔助濾板與濾膜的位置，然后取濾液10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代

11、乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉移至過濾器中進行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，所得供試液鉛斑與標準鉛斑比較，不得更深。4.5 注意事項4.5.1 標準鉛溶液應在臨用前精密量取標準鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差，配制標準鉛溶液使用的玻璃儀器，均不得含有鉛。4.5.2 硫代乙酰胺試液與重金屬反應的最佳pH值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時，要用pH計調節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時呈色最深；第四法中檢測限度為25g的Pb，且體積小，所以用量為1.0ml。硫代乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時間為2分鐘，除第四法

12、由于檢測限量低，且為了方便過濾，顯色時間為10分鐘外，第一、二法均為放置2min。4.5.3 為了便于目視比較，第一、二和三法中的標準鉛溶液用量以2ml（相當于20g的Pb）為宜，小于1ml或大于3ml，呈色太淺或太深均不利于目視比較。4.5.4 如需將熾灼殘渣項下遺留的殘渣作重金屬檢查時，則熾灼溫度必須控制在500600。實驗證明，熾灼溫度在700以上時，多數(shù)重金屬鹽都有不同程度的損失；以鉛為例，在700經6小時熾灼，損失達68%。某些供試品在熾灼時能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應改用石英坩堝或鉑坩堝操作。4.5.5 熾灼殘渣加硝酸處理，必須蒸干，將亞硝酸除盡，否則亞硝酸會使硫代乙酰胺水解

13、生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘渣加鹽酸處理，使重金屬轉化為氯化物，在水浴上蒸干趕除多余鹽酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5），使供試液的pH調節(jié)至3.5。4.5.6 供試品中如含高鐵鹽，在弱酸性溶液中會使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進一步氧化析出乳硫，影響檢查，可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。4.5.7 如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這些藥品中的其他重金屬時，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進行檢查。如枸櫞酸鐵銨中檢查鉛鹽時，利用Fe+在一定濃度的鹽酸中形成HFeCl62，

14、用乙醚提取除去，再調節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后進行檢查；右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進行檢查。4.5.8 藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡合物，再依法檢查。4.5.9 為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜重金屬，故在配制供試品溶液時，如使用鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當?shù)南←}酸）或使用氨試液超過2ml，以及用硫酸 或硝酸進行有機破壞，或加入其他試劑進行處理者，除另有規(guī)定

15、外，對照溶液應取同樣量試液蒸干后，依法檢查。4.5.10 當采用第四法時，將注射器套于濾器上后，讓注射器內管自然下降，產生的壓力比較均勻，而且對于大多數(shù)樣品溶液過濾速度達到每1分鐘1ml左右；對于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使達到該速度，以保證色斑上色調的均勻性。濾過時如濾器中存在氣泡則會影響色斑質量，故在裝置輔助濾板、濾膜和墊圈時應以水排除氣泡。濾器上端與注射器聯(lián)接處的尺寸大小應以兩者能嚴密，嵌合為宜，以免濾過時溶液溢漏；必要時可改用乳膠管聯(lián)接。4.6 記錄與計算4.6.1 記錄 必須記錄所采用的方法，樣品取樣量，標準鉛溶液取用量，操作過程中使用的特殊試劑，試劑名稱和用量或對檢查結果有

16、影響的試劑用量，實驗過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實驗結果等。4.6.2 計算4.6.2.1 標準鉛溶液濃度計算1 mol的硝酸鉛Pb(NO3)2的質量為331.2g，含鉛（Pb）207.2g；稱取硝酸鉛0.1598g配成1000ml貯備液，含Pb量為：207.20.15981000=0.1mg/ml331.21000 貯備液依法稀釋十倍后所得標準鉛溶液的濃度為每1ml含10g的Pb。4.6.2.2 重金屬限量計算 進行檢查時，如取供試品1.0g，與標準鉛溶液2.0ml制成的對照液比較，計算重金屬限量。重金屬限量%=標準鉛溶液體積（ml）標準鉛溶液濃度（g/ml）100%供試品量（g）=2.00.000010100%1.0=0.0020%=百萬分之二十=20ppm4.6.2.3 標準鉛溶液取樣量計算根據取供試品量及限量計算，如取供試品2.