主稿空氣微生物檢測(cè)培訓(xùn)教材PPT課件

1、范圍公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范 涉及到衛(wèi)生微生物指標(biāo)的條款包括：1、嗜肺軍團(tuán)菌（集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)冷卻水和冷凝水）2、細(xì)菌總數(shù) 500cfu/m3 真菌總數(shù) 500cfu/m3 溶血性鏈球菌等致病性微生物（集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)）3、細(xì)菌總數(shù) 100cfu/cm2 真菌總數(shù) 100cfu/cm2 致病微生物（集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)風(fēng)管內(nèi)表面） 集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè)（液體采樣法）第1頁(yè)/共73頁(yè)目的 控制由于空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)造成生物致病因子經(jīng)空氣播散；預(yù)防危害人體健康，疾病傳播的公共衛(wèi)生問題發(fā)生；規(guī)范現(xiàn)場(chǎng)與實(shí)驗(yàn)室操作，為監(jiān)督執(zhí)法、預(yù)警預(yù)報(bào)提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。第2頁(yè)/共73頁(yè)準(zhǔn)備與現(xiàn)場(chǎng)采樣 1

2、、采樣設(shè)備、器材、試劑與培養(yǎng)基準(zhǔn)備 2、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)研、現(xiàn)場(chǎng)記錄 3、采樣人員無菌操作與個(gè)人防護(hù) 4、采樣點(diǎn)的選擇 5、采樣無菌操作 6、氣溶膠樣品的采集（六級(jí)采樣器） 7、水樣品的采集 8、塵樣品的采集 9、樣品采集后的現(xiàn)場(chǎng)整理 10、樣品采集過程中，人員的一般安全防護(hù)第3頁(yè)/共73頁(yè) Inadequate ventilation（通風(fēng)不當(dāng)） 52% Contamination from inside building（建筑物內(nèi)部污染） 16% Contamination from outside building （建筑物外部污染） 10% Microbial contamination(微生物

3、污染） 5% Contamination from building fabric（紡織品的污染） 4% Unknown sources（來源不明） 13%第4頁(yè)/共73頁(yè)影響室內(nèi)環(huán)境（1、2、3、4、5）微生物污染的因素第5頁(yè)/共73頁(yè)空調(diào)系統(tǒng)調(diào)查結(jié)果（引用） 新風(fēng)量大室內(nèi)空氣質(zhì)量高 新設(shè)備運(yùn)行時(shí)空氣質(zhì)量?jī)?yōu)于老設(shè)備 清潔設(shè)備運(yùn)行時(shí)空氣質(zhì)量?jī)?yōu)于污染設(shè)備 檢測(cè)生物性污染物對(duì)空調(diào)系統(tǒng)的污染與對(duì)室內(nèi)空氣質(zhì)量的影響具有衛(wèi)生學(xué)意義。 空調(diào)系統(tǒng)的衛(wèi)生微生物學(xué)檢測(cè)不可能擺脫室內(nèi)空氣污染的規(guī)律與概念。第6頁(yè)/共73頁(yè)認(rèn) 識(shí)1、室內(nèi)污染來源占的份額高于室外。2、上述因素與空調(diào)系統(tǒng)均相關(guān)；但并不是說空調(diào)設(shè)備自身造

4、成了室內(nèi)空氣污染；其危險(xiǎn)與潛在的危害，是由于空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)把人類的活動(dòng)（工作、生活、愛好與環(huán)境等）造成的空氣質(zhì)量狀態(tài)，進(jìn)行了輸送、轉(zhuǎn)移、傳播?？照{(diào)給于了微生物一定的生存條件。3、空調(diào)系統(tǒng)的生物性污染除嗜肺軍團(tuán)菌外還有許多成員。如：目前國(guó)外有關(guān)室內(nèi)空氣真菌、空調(diào)系統(tǒng)所致真菌污染方面的研究日漸增多。4、環(huán)境對(duì)室內(nèi)空氣微生物存在極大影響（記錄重要）。5、我們現(xiàn)行的規(guī)范要求包括了我們目前遇到的、可能遇到的生物性致病因子。第7頁(yè)/共73頁(yè)指示生物與指標(biāo)菌第8頁(yè)/共73頁(yè)微生物在空氣中的傳播 名詞解釋： 氣溶膠（aerosol）：是固態(tài)或液態(tài)微粒懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系。其微粒為微生物時(shí)，稱之為微生物氣溶

5、膠。 液態(tài)粒子稱霧； 小于1m的固態(tài)粒子稱煙； 大于1m的粒子稱塵。第9頁(yè)/共73頁(yè)名詞解釋氣溶膠粒子大?。簹馊苣z粒子大小分布從0.001100m微生物氣溶膠粒子大小，從0.00230m。第10頁(yè)/共73頁(yè)致病性生物因子 凡是在室內(nèi)空氣環(huán)境存在的致病性生物因子，都有可能通過空調(diào)系統(tǒng)播散，以致可能由于污染環(huán)境給人帶來危險(xiǎn)或潛在的危害。室內(nèi)空氣環(huán)境存在的致病性生物因子主要有如下幾類室內(nèi)空氣環(huán)境存在的致病性生物因子： 第11頁(yè)/共73頁(yè)空氣帶菌粒子危害部位1、15的空氣帶菌粒子可直接侵入肺泡2、610的空氣帶菌粒子易沉著在小支氣管3、1030的空氣帶菌粒子會(huì)沉積在支氣管第12頁(yè)/共73頁(yè)微生物與粒子

6、 1、空氣中與疾病有關(guān)的帶菌粒子直徑一般為420 m。 2、來自人體的微生物主要附著在1215 m的塵粒上。 3、許多真菌以單個(gè)孢子的形式存在。第13頁(yè)/共73頁(yè)微生物 1、細(xì)菌類：結(jié)核桿菌、非結(jié)核桿菌、肺炎雙球菌、嗜肺軍團(tuán)桿菌等160余種。 2、真菌類：球孢子菌、假絲酵母（念珠菌）、曲霉、毛霉、青霉等600余種。 3、病毒類：流感、水痘、風(fēng)疹、腺病毒等約幾百種。 4、其他：支原體、衣原體等。第14頁(yè)/共73頁(yè)相關(guān)因素 空氣中的微生物的存在和生存時(shí)間（存活力viability）與水環(huán)境、土壤環(huán)境的狀況緊密相關(guān)，微生物本身的特征起主導(dǎo)作用。研究微生物的生境是重要的工作內(nèi)容。第15頁(yè)/共73頁(yè)特

7、點(diǎn) 依據(jù)實(shí)驗(yàn)研究，空氣中的微生物如果不能回到有利于其生活和繁殖的環(huán)境中，遲早是要死亡的。 微生物幾乎全部是附著在塵埃上，塵埃并不全部有微生物的附著；灰塵量與菌數(shù)并不呈現(xiàn)線性正相關(guān)。 不同的采樣方法所捕獲的帶菌粒子也不相同。第16頁(yè)/共73頁(yè)趨勢(shì) 強(qiáng)毒力、高傳染性微生物氣溶膠的研究 兔熱桿菌：志愿者15個(gè)左右的菌即可；軍團(tuán)菌：氣溶膠中檢出即對(duì)人有感染。 日本乙型腦炎病毒、裂谷熱病毒、拉沙熱病毒、出血熱病毒、與畜牧業(yè)新城疫、流感等。 真菌、真菌毒素。第17頁(yè)/共73頁(yè)方法學(xué)中的問題 1、空調(diào)系統(tǒng)與室內(nèi)空氣質(zhì)量的相關(guān)性 2、不同的采樣方法所獲得的結(jié)果有差異 3、樣品處理方式、操作不一致影響結(jié)果的一致

8、性 4、注意樣品處理過程的一致性 第18頁(yè)/共73頁(yè)指示生物的選擇 腸道指示生物為例（N條）：腸道獨(dú)有，代表性強(qiáng)數(shù)量多存活時(shí)間比致病菌稍長(zhǎng)對(duì)消毒劑的耐受性比致病菌稍高對(duì)人危害無或很小檢測(cè)方便，程序簡(jiǎn)單第19頁(yè)/共73頁(yè)指示生物 大腸桿菌作為水污染與否的衛(wèi)生指示生物應(yīng)用多年，行之有效，各界公認(rèn)，基本符合指示生物的多項(xiàng)要求。對(duì)于室內(nèi)空氣而言，指示生物則難以被選出。大腸桿菌作為糞便污染的指示生物，與腸道傳染病的病原體不僅同原，還存在諸多共性，有代表性?？諝鈩t無法找到這么一個(gè)指示生物。所以對(duì)空氣質(zhì)量的認(rèn)同，我們選擇了指示生物與致病生物監(jiān)測(cè)兩個(gè)途徑。 第20頁(yè)/共73頁(yè)指示生物的目前選擇細(xì)菌總數(shù)、真菌總

9、數(shù)、溶血性鏈球菌、嗜肺軍團(tuán)桿菌等等 第21頁(yè)/共73頁(yè)檢測(cè)方法的論述采樣第22頁(yè)/共73頁(yè)樣品保存與運(yùn)輸 1、帶培養(yǎng)基的樣品 2、一般水、土樣品 3、分離軍團(tuán)菌的樣品 4、培養(yǎng)基的運(yùn)輸與保存 （時(shí)間、溫度、避光）（防污染、防增殖、防消亡、防破損、防亂號(hào)）第23頁(yè)/共73頁(yè)注意事項(xiàng)1、采樣： 氣體：（以時(shí)間確定）儀器法。 塵量：適時(shí)評(píng)估確定方法（擦拭、刮拭）。2、培養(yǎng)基檢查有無污染3、培養(yǎng)時(shí)間相關(guān)的問題（菌數(shù)多少、濕度保證、溫度控制）4、采樣點(diǎn)的選擇5、關(guān)注采樣環(huán)境第24頁(yè)/共73頁(yè)采樣與檢測(cè)方法1、對(duì)室內(nèi)空氣常用的采樣方法有： 自然沉降法（曝皿法）（本稿不采納） 空氣微生物采樣器法：推薦撞擊式

10、 6級(jí)空氣微生物采樣器2、液體過濾、沖擊采樣： 采集室內(nèi)空氣軍團(tuán)菌時(shí)應(yīng)用 3、管道：擦拭法、刮拭法第25頁(yè)/共73頁(yè)采樣人工 擦（棉）拭法：布、棉花或其他材料，通常用滅菌鹽水潤(rùn)濕，通過擦拭采取通風(fēng)管道表面的微生物；然后在同樣的溶液洗脫微生物，并涂平板培養(yǎng)與計(jì)數(shù)菌落形成單位以供分析，涂板方法可用濕拭子直接涂布，也可以用洗脫液涂布。在無法進(jìn)行機(jī)械采樣的風(fēng)管中應(yīng)用。 刮拭法：塵量多、板結(jié)、粘稠時(shí)使用 第26頁(yè)/共73頁(yè)采樣機(jī)器人 人工采樣受到多方面的影響，一致性不高，難完成規(guī)范要求的任務(wù)；機(jī)器人采樣同一性高；能滿足規(guī)范要求的工作內(nèi)容；目前品種較少，通風(fēng)管道沒有標(biāo)化： 符合規(guī)范要求 按產(chǎn)品說明書的要求

11、操作 注意質(zhì)控第27頁(yè)/共73頁(yè)采樣與檢測(cè)方法 直接的灰塵培養(yǎng)： 從空調(diào)通風(fēng)管道表面取得灰塵，直接懸浮于0.01%吐溫80（PBS或生理鹽水）溶液中，然后稀釋并選擇適宜稀釋度，取1mL按傾注法操作，培養(yǎng)與計(jì)數(shù)菌落形成單位以供分析。 塵量大需要秤量。第28頁(yè)/共73頁(yè)檢測(cè)方法的論述 細(xì)菌總數(shù)第29頁(yè)/共73頁(yè)細(xì)菌總數(shù)細(xì)菌總數(shù)定義： 儀器法采集室內(nèi)空氣，計(jì)數(shù)在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)3748小時(shí)培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，換算為每立方米室內(nèi)空氣中菌落總數(shù)，以cfu/m3（colony forming units/m3）每立方米室內(nèi)空氣菌落形成單位報(bào)告。 管道塵的稀釋傾注法：檢測(cè)管道塵中的細(xì)菌總數(shù)依Xcfu/cm

12、2 報(bào)告。第30頁(yè)/共73頁(yè)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)第31頁(yè)/共73頁(yè)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)第32頁(yè)/共73頁(yè)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)第33頁(yè)/共73頁(yè)細(xì)菌總數(shù)的衛(wèi)生學(xué)意義 空氣沒有提供作為細(xì)菌和它種微生物生長(zhǎng)所需要足夠的水分與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以空氣不是微生物產(chǎn)生與繁殖的場(chǎng)所，檢測(cè)出空氣中存在微生物，主要來源于外環(huán)境（包括植物在內(nèi)）與人、動(dòng)物的活動(dòng)。某一種或幾種致病性微生物存在的內(nèi)在原因，即是人、畜污染所致，致病微生物的存在，對(duì)生活之中的人們就可能構(gòu)成了潛在的危險(xiǎn)，在條件適宜的情況下造成疾病的傳播。一般說，室內(nèi)空氣質(zhì)量在適宜微生物貯留與生長(zhǎng)繁殖的場(chǎng)所，與換氣量不足、通風(fēng)不良、人員較多時(shí)，就造成微生物數(shù)量的增加。雖然單純微生物

13、種類與數(shù)量的多寡，不能說就一定引起人們的疾病，卻可以有不舒適的感覺。 第34頁(yè)/共73頁(yè)室內(nèi)空氣標(biāo)準(zhǔn)制定的情況 蘇聯(lián)：規(guī)定夏季清潔空氣為細(xì)菌總數(shù)1500 cfu/ m3、污染空氣為細(xì)菌總數(shù)2500 cfu/ m3；而冬季清潔空氣細(xì)菌總數(shù)4500 cfu/ m3、污染空氣為細(xì)菌總數(shù)7000 cfu/ m3。 第35頁(yè)/共73頁(yè)室內(nèi)空氣標(biāo)準(zhǔn)制定的情況 日本：日本采用自然沉降法統(tǒng)一用直徑9cm9cm平皿: :將室內(nèi)空氣分為5 5級(jí)： 清潔29、 普通3074、 可接收界限75149、 輕污染150299、重污染300。 第36頁(yè)/共73頁(yè)室內(nèi)空氣標(biāo)準(zhǔn)制定的情況我國(guó)： 醫(yī)院：撞擊法2500 cfu/m

14、3 沉降法30 cfu/皿。 公共場(chǎng)所 撞擊法 4000cfu/m3；沉降法 45 cfu/皿。 香港特別行政區(qū)（制訂“辦公室及公眾場(chǎng)所室內(nèi)空氣質(zhì)素管理指引”，指明微生物污染物包括三大類，細(xì)菌、真菌、過濾性病毒。） 空氣中細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)是，一類500 cfu/m3，二類1000 cfu/m3。 第37頁(yè)/共73頁(yè)空調(diào)通風(fēng)管道表面細(xì)菌濃度 在空調(diào)通風(fēng)管道表面細(xì)菌濃度，在3.210 51.5106 cfu /g之間。一般情況下，微生物濃度增加的一些因子包括潮濕條件與空氣回流。在空調(diào)通風(fēng)管道表面細(xì)菌污染一般情況下低于旋轉(zhuǎn)熱交換器（10 7 cfu/ m2）、冷卻管或加濕器（10 7 cfu/ m2）。有資

15、料表明，灰塵表面濃度對(duì)可生存的微生物濃度影響小，沉積于空調(diào)通風(fēng)管道表面后再形成生物氣溶膠的菌存活時(shí)間一般較短，有待于更多的實(shí)驗(yàn)與檢測(cè)數(shù)據(jù)證實(shí)。第38頁(yè)/共73頁(yè)室內(nèi)空氣標(biāo)準(zhǔn)制定的情況 實(shí)驗(yàn)資料：人群聚集80min 空氣中細(xì)菌數(shù) ，沉降法44 cfu/皿，撞擊法4300cfu/m3。在撞擊法 細(xì)菌總數(shù)4000cfu/m3，沉降法 33 cfu/皿，CO2濃度時(shí)，有異臭感和不適感者為；在撞擊法 細(xì)菌總數(shù)6000cfu/m3，沉降法 75 cfu/皿，CO2 濃度時(shí)，有異臭感和不適感者出現(xiàn)率為55。第39頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 采樣時(shí)必須在空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)條件下，關(guān)閉門窗（參考時(shí)間30分鐘），盡

16、量減少人、畜的活動(dòng)幅度與頻率，記錄采樣位置、室內(nèi)人員數(shù)量、溫濕度與天氣狀況等。 第40頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 采樣應(yīng)用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，372培養(yǎng)484小時(shí)，觀查并記錄結(jié)果（37培養(yǎng)24h時(shí)應(yīng)進(jìn)行觀查，不必記錄結(jié)果）。 第41頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與樣品處理要求 空調(diào)系統(tǒng)管道：無菌操作準(zhǔn)確稱取管道塵（記錄數(shù)量），加入到含有0.01% Tween-80的中，作10倍梯級(jí)稀釋，視灰塵含菌量多少選三個(gè)數(shù)量級(jí)的稀釋液，各取1mL稀釋液直接加入平皿中，用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作混碟培養(yǎng)。372培養(yǎng)484小時(shí)，觀查并記錄結(jié)果（37培養(yǎng)24h時(shí)應(yīng)進(jìn)行觀查，不必記錄結(jié)果），其所得菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，換算cfu/cm2

17、細(xì)菌總數(shù)。 第42頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 空調(diào)送風(fēng)：依監(jiān)測(cè)目的和應(yīng)用方法確定采樣點(diǎn)，選擇儀器法采樣一般在送風(fēng)口下方1520cm距離 50100cm處；室內(nèi)空氣：采樣點(diǎn)的高度為。不同采樣方法所獲得的結(jié)果不一致，報(bào)告結(jié)果時(shí)應(yīng)注明采樣方法。第43頁(yè)/共73頁(yè)培養(yǎng)基的制備 成分：蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 肉膏 5g 瓊脂 20g 蒸餾水 1,000ml 制法：將上述成分加熱溶化于蒸餾水中，校正pH值為。加入瓊脂，12120min滅菌。 用途：供空氣細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)用。第44頁(yè)/共73頁(yè)含0.01% Tween-80的 磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水 至990mL Tween-80 最終濃度0.01

18、% 方法：將磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀溶于少量蒸餾水中，溶解混勻加水至990mL，按比例加入1% Tween-80液10mL，使最終濃度0.01%，121蒸汽滅菌20min。 第45頁(yè)/共73頁(yè)注意點(diǎn) 1、采塵樣條要浸泡在轉(zhuǎn)運(yùn)液體中。 2、稀釋與取樣時(shí)充分洗脫，操作一致 3、進(jìn)口安德森采樣器的應(yīng)用：注意平皿中瓊脂的厚度第46頁(yè)/共73頁(yè)檢測(cè)方法的論述 真菌總數(shù)：儀器法采集室內(nèi)空氣，計(jì)數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)282培養(yǎng)5天培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，換算為每立方米室內(nèi)空氣中菌落總數(shù)，以cfu/m3（colony forming units/m3）每立方米室內(nèi)空氣菌落形成單位報(bào)告。 管道塵的稀釋傾注法：檢測(cè)管道

19、塵中的真菌總數(shù)依Xcfu/cm2 報(bào)告。第47頁(yè)/共73頁(yè)空調(diào)系統(tǒng)與真菌病 病態(tài)建筑綜合癥的典型癥狀包括：眼刺激，鼻刺激和鼻充血，咽刺激和咳嗽、呼吸困難、嘶啞、皮膚刺激、頭痛、嘔吐、疲勞、精神疲憊和對(duì)味的感知問題等。 確定引起上述癥狀的原因很難。性別、社會(huì)心理因素、從事的職業(yè)等主觀因素影響作用雖小，卻難斷然排除。第48頁(yè)/共73頁(yè)真菌總數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)情況 我國(guó)目前的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)尚無對(duì)真菌總數(shù)的具體要求，但是該指標(biāo)受到國(guó)際社會(huì)日益關(guān)注。在某些居室建筑、辦公場(chǎng)所中真菌總數(shù)每立方米可達(dá)數(shù)百至千，在有霉變氣味的室內(nèi)真菌總數(shù)則更高。污染真菌絕大多數(shù)是在土壤中或其他基物上生長(zhǎng)、繁殖，真菌孢子體積小、質(zhì)量輕、數(shù)量大，

20、易隨氣流的運(yùn)動(dòng)而被傳播，故有“氣傳真菌”之稱。 第49頁(yè)/共73頁(yè)相關(guān)性 空氣中真菌的含量有明顯的季節(jié)性，與溫度、濕度、地理位置等因素密切相關(guān)。巴黎6月時(shí)空氣中真菌濃度n104/m3，冬季則僅為100/m3；國(guó)內(nèi)某坑道的監(jiān)測(cè)顯示空氣濕度增加真菌數(shù)也增加，為此我們對(duì)南北方以維持高濕度天氣的長(zhǎng)短，分別給予了不同的要求；室內(nèi)鋪有地毯的一般比沒有鋪地毯的真菌數(shù)高；人的活動(dòng)、清掃衛(wèi)生、換衣鋪床等空氣中的真菌數(shù)增加。 第50頁(yè)/共73頁(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) WHO的要求：150cfu/m3（采樣方法：離心式采樣器）； 芬蘭：200 cfu/m3（采樣方法：Anderson采樣器）； 美國(guó)：1,000 cfu/m3（采

21、樣方法：未說明）第51頁(yè)/共73頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)值依據(jù)與參考數(shù)值 我國(guó)目前的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)尚無對(duì)真菌總數(shù)的具體要求，但是該指標(biāo)受到國(guó)際社會(huì)日益關(guān)注。在某些居室建筑、辦公場(chǎng)所中真菌總數(shù)每立方米可達(dá)數(shù)百至千，在有霉變氣味的室內(nèi)真菌總數(shù)則更高。 第52頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 空調(diào)送風(fēng)：依監(jiān)測(cè)目的和應(yīng)用方法確定采樣點(diǎn)，選擇儀器法采樣一般在送風(fēng)口下方1520cm距離 50100cm處； 室內(nèi)空氣采樣點(diǎn)的高度為。報(bào)告結(jié)果時(shí)應(yīng)注明采樣方法。 管道塵：機(jī)器人采樣與刮拭法采樣第53頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 采樣時(shí)必須在空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)條件下，關(guān)閉門窗（參考時(shí)間30分鐘），盡量減少人、畜的活動(dòng)幅度與頻率，記錄采樣位置、室內(nèi)

22、裝修狀況（織物包廂、地毯鋪置、花草養(yǎng)殖）與人員數(shù)量、溫濕度與天氣狀況等。第54頁(yè)/共73頁(yè)培養(yǎng)要求 應(yīng)用沙氏瓊脂培養(yǎng)基，282培養(yǎng)57d，需逐日觀查并及時(shí)記錄結(jié)果（如培養(yǎng)至5日時(shí)，霉菌或放線菌的菌絲生長(zhǎng)掩蓋周圍菌落或菌絲長(zhǎng)至滿皿，可停止觀查并記錄結(jié)果，但在報(bào)告時(shí)需注明） 第55頁(yè)/共73頁(yè)采樣方法與要求 空調(diào)系統(tǒng)管道塵：無菌操作準(zhǔn)確稱取管道塵，加入到含有0.01% Tween-80的自來水中，作10倍梯級(jí)稀釋，視灰塵含菌量多少選三個(gè)數(shù)量級(jí)的稀釋液，各取稀釋液直接涂沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿，282培養(yǎng)，其所得菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，換算成cfu/cm2真菌總數(shù)。 第56頁(yè)/共73頁(yè)培養(yǎng)基的制備 1、沙氏（

23、Sabourands agar）瓊脂培養(yǎng)基：成分： 蛋白胨 10g 葡萄糖 40g 瓊脂 20g 蒸餾水 1,000ml制法：將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中，校正 pH值為，加入瓊脂，115 15min滅菌備用。用途：供空氣真菌總數(shù)檢測(cè)用。第57頁(yè)/共73頁(yè)說 明 此培養(yǎng)基是國(guó)際上培養(yǎng)真菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，應(yīng)用廣泛。培養(yǎng)基的pH值為，除真菌外一般菌不易在此酸性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，在配制時(shí)一般不需調(diào)整pH，其值即與此接近。瓊脂在酸性條件下多次加熱，降低或喪失瓊脂的凝固性，需注意。為抑制細(xì)菌與放線菌的生長(zhǎng)，可在1L沙氏瓊脂培養(yǎng)基中加入4050mg氯霉素和500mg放線菌酮，兩種抗菌素均耐熱，在高壓蒸汽滅菌前

24、加入。 第58頁(yè)/共73頁(yè)含0.01% Tween-80的自來水稀釋液 與自來水中加入Tween-80，使最終濃度為0.01%，121 20min滅菌備用。 第59頁(yè)/共73頁(yè)檢測(cè)方法的論述 溶血性鏈球菌第60頁(yè)/共73頁(yè)溶血性鏈球菌（HS） 溶血性鏈球菌（HS）定義：經(jīng)3537，2448小時(shí)培養(yǎng)，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直徑的細(xì)小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；鏡檢為革藍(lán)氏陽(yáng)性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列（視培養(yǎng)與操作條件影響鏈可短可長(zhǎng)48個(gè)細(xì)胞至幾十個(gè)細(xì)胞）；菌落周圍有明顯的24mm界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)。符合上述特征的菌量稱為溶血性鏈球菌。以cfu/m3（colony forming units/m3）每立方米室內(nèi)空氣菌落形成單位報(bào)告。 第61頁(yè)/共73頁(yè)溶血性鏈球菌（HS） 第62頁(yè)/共73頁(yè)溶血性鏈球菌的衛(wèi)生學(xué)意義 溶血性鏈球菌與細(xì)菌總數(shù)的相關(guān)性：溶血性鏈球菌與細(xì)菌總數(shù)并沒有相關(guān)性，陶曉燕在空調(diào)環(huán)境中三家證券交易所的調(diào)查報(bào)告結(jié)果顯示，在細(xì)菌總數(shù)并沒有顯示嚴(yán)重污染時(shí)，溶血性鏈球菌的數(shù)量表明空氣污染的程度已很嚴(yán)重。 第63頁(yè)/共73頁(yè)溶血性鏈球菌的衛(wèi)生學(xué)意義 因此確認(rèn)空調(diào)覆蓋面積大?。〒Q氣量大小）與人員數(shù)量的關(guān)系密切，人員增加必定會(huì)使致