實(shí)驗(yàn)4. 酶的特異性ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 酶的特異性酶的特異性生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之1;.2【實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康摹?學(xué)習(xí)酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制備，了解酶的特異性及檢測(cè)方法。學(xué)習(xí)酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制備，了解酶的特異性及檢測(cè)方法。【實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】 酶是生物催化劑，酶對(duì)所作用的底物有嚴(yán)格的選擇性，即酶的特異性。酶是生物催化劑，酶對(duì)所作用的底物有嚴(yán)格的選擇性，即酶的特異性。 淀粉和蔗糖都是非還原性糖，分別為唾液淀粉酶和蔗糖酶的專一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解淀粉和蔗糖都是非還原性糖，分別為唾液淀粉酶和蔗糖酶的專一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有還原性的麥芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有還原性的

2、葡萄糖和果糖。生成具有還原性的麥芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有還原性的葡萄糖和果糖。 Benedict試劑（含有試劑（含有Cu 2+）常用于檢驗(yàn)還原糖的存在，其被還原后生成磚紅色的）常用于檢驗(yàn)還原糖的存在，其被還原后生成磚紅色的Cu2O沉淀。沉淀。3【器材及試劑器材及試劑】（一）器材：（一）器材： 1. 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋 2. 試管及試管架試管及試管架 3. 離心機(jī)離心機(jī) 4. 吸量管吸量管 5.燒杯、量筒燒杯、量筒 、漏斗等、漏斗等（二）試劑：（二）試劑： 1. 2%蔗糖蔗糖 2. 1%淀粉（內(nèi)含淀粉（內(nèi)含0.3%的的NaCl） 3. 唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液蔗糖酶

3、溶液 5. Benedict試劑試劑4【實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟】（一）淀粉酶的特異性（一）淀粉酶的特異性1.唾液淀粉酶溶液的制備：唾液淀粉酶溶液的制備： 先用蒸餾水漱口，然后用潔凈試管先用蒸餾水漱口，然后用潔凈試管1支，支，取唾液（無泡沫）約取唾液（無泡沫）約2ml，蒸餾水，蒸餾水20倍稀釋，倍稀釋，備用。備用。52.取試管取試管5支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：試劑試劑試管編號(hào)試管編號(hào)123451%淀粉溶液（淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液（蔗糖溶液（ml）1.01.0唾液淀粉酶（唾液淀粉酶（ml）1.01.01.0蒸餾水（蒸餾水（ml）1.01.01.06

4、 3. 搖勻，置搖勻，置37恒溫水浴保溫恒溫水浴保溫10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict試劑試劑2ml，再放沸水浴再放沸水浴5min。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 7(二二) 蔗糖酶的特異性蔗糖酶的特異性1. 蔗糖酶溶液的制備：蔗糖酶溶液的制備： 取活性干酵母取活性干酵母1.0g，置于研缽中，加少量蒸餾水及石英砂研磨提取約，置于研缽中，加少量蒸餾水及石英砂研磨提取約10min，再加蒸餾水至總體積約為再加蒸餾水至總體積約為20ml，過濾或離心，濾液或上清液備用。，過濾或離心，濾液或上清液備用。82. 取試管取試管5支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次

5、序操作：支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：試劑試劑試管編號(hào)試管編號(hào)123451%淀粉溶液（淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液（蔗糖溶液（ml）1.01.0蔗糖酶（蔗糖酶（ml）1.01.01.0蒸餾水（蒸餾水（ml）1.01.01.093. 搖勻，搖勻， 置置37恒溫水浴保溫恒溫水浴保溫10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict試劑試劑2ml，再放沸水浴，再放沸水浴5min。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。10【注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)】 唾液的稀釋倍數(shù)因人而異，有時(shí)差別很大，稀釋倍數(shù)可以是唾液的稀釋倍數(shù)因人而異，有時(shí)差別很大，稀釋倍數(shù)可以是5030

6、0倍。倍?！舅伎碱}思考題】 1、 若將淀粉酶和蔗糖酶煮沸若將淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，實(shí)驗(yàn)結(jié)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)發(fā)生什么樣的變化？果會(huì)發(fā)生什么樣的變化？ 2、 酶作用的專一性有哪幾種？酶作用的專一性有哪幾種？11移液槍的使用移液槍的使用部分用具與試劑部分用具與試劑121314量程的調(diào)節(jié)量程的調(diào)節(jié)1.按照從大體積調(diào)為小體積的方法調(diào)節(jié)。按照從大體積調(diào)為小體積的方法調(diào)節(jié)。2.用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字。用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字。注意：千萬不要將旋鈕旋出最大量程，否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置或者彈簧彈出而注意：千萬不要將旋鈕旋出最大量程

7、，否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置或者彈簧彈出而損壞了移液槍。損壞了移液槍。微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法1516槍頭（吸液嘴）的裝配槍頭（吸液嘴）的裝配在將槍頭（在將槍頭（pipette tips）套上移液槍時(shí)，正確的方法是將移液槍（器）垂直）套上移液槍時(shí)，正確的方法是將移液槍（器）垂直插入槍頭中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。插入槍頭中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。17移液的方法移液的方法1.吸取液體時(shí)，用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液吸取液體時(shí)，用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下面下23毫米。毫米。2.然后慢慢松開按鈕回原點(diǎn)。然后慢慢松開按鈕回原點(diǎn)。3.接著將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)吹出殘余的液體。接著將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)吹出殘余的液體。最后松開按鈕。最后松開按鈕。181920移液器的正確放置移液器的正確放置使用完畢，可以將其豎直掛在移液槍架上，但要小心別掉下來。使用完畢，可以將其豎直掛在移液槍架上，但要小心別掉下來。當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒流腐蝕活塞彈當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿