胃腸b細胞非霍奇金淋巴瘤病理特征及預后

1、淺談【摘要】  目的： 觀察胃腸b細胞性非霍奇金淋巴瘤的臨床病理特征，bcl-2、ki-67、cd5的表達和幽門螺桿菌（hp）的感染對其臨床病理特征及預后的影響。方法： 收集18例病人的臨床病理資料并進行隨訪，通過he及免疫組織化學染色，觀察黏膜相關淋巴瘤及氵彌漫大b細胞淋巴瘤的組織學特點，檢測bcl-2、ki-67、cd5及hp，對所得資料進行統(tǒng)計學分析。結果： cd5、ki-67表達及hp感染均隨著臨床分期的增加而增加。bcl-2陽性組及ki-67表達>30%組的淋巴結累及率要高于bcl-2陰性組及ki-67表達30%組。cd5陽性組的生存狀況要好于陰性組，而ki-67表達

2、>30%組及hp感染組生存狀況要差于ki-67表達30%組及hp未感染組。結論： bcl-2、cd5表達、ki-67高表達及hp感染可能與晚期淋巴瘤有關，bcl-2表達、ki-67高表達可能與淋巴結受累有關，而ki-67表達、hp感染與較差的生存狀況相關。 【關鍵詞】  淋巴瘤，非霍奇金；淋巴瘤，b細胞； 胃腸腫瘤； 基因，bcl-2； ki-67抗原； 抗原，cd5； 預后     abstract objective: to observe the clinicopathogical features of gastrointestinal b

3、 cell lymphomas, expression of bcl-2，cd5, ki-67 and the influence of helicobacter pylori （hp） infection to clinicopathogical features and prognosis of patients. methods: the clinicopathogical data of 18 patients were collected and further follow-up was carried out. the expression of bcl-2, cd5, ki-6

4、7 and hp infection were checked by using immunohistochemistry method. all of the data were statistically analyzed. results: the expression of cd5, and ki-67, and hp infection rates increased along with the increasing of the clinical staging of the disease. the rates of lymph node involvement in the

5、groups of bcl-2-positive and ki-67 higher （30%） expression （66.67% and 77.78%） were higher than those in groups of bcl-2-negative and ki-67 lower （30%） expression （33.33% and 22.22%）. the survival rate of cd5-positive group （100%） was higher than that of cd5-negative group （50%）, while the survival

6、rates in groups of ki-67 higher expression and hp infection-positive （66.67% and 33.33%） were lower than those in groups of ki-67 lower expression and hp infection-negative （100% and 83.33%）. conclusion: the advanced stage of the disease seems accompanied by expression of cd5, higher expression of k

7、i-67 and hp infection. lymph node involvement associates with bcl-2 expression and higher expression of ki-67. lower survival rates associate with higher expression of ki-67 and hp infection.     key words  lymphoma, non-hodgkin; lymphoma, b-cell；gastrointestinal neoplasms; genes

8、, bcl-2; ki-67 antigen; antigens, cd5; prognosis     淋巴瘤的發(fā)生與細胞增殖、分化和細胞凋亡失衡有關，其發(fā)生的分子機制、臨床治療的特異性靶點以及預后判斷的指標是當前普遍關注和迫切需要解決的問題。bcl-2在多種b細胞淋巴瘤中表達，是一種重要的凋亡抑制基因，ki-67則是細胞的增殖性標志之一，兩者對黏膜相關淋巴瘤（extranodal marginal zone b cell lymphoma of mucosa associated lymphoid tissue,malt）及彌漫大b細胞淋巴瘤（biffuse

9、large b cell lymphoma,dlbcl）的影響結論頗不一致。研究表明，cd5陽性表達的dlbcl比cd5陰性表達者具有更壞的臨床特性1。幽門螺桿菌（helicobacter pylori，hp）與malt淋巴瘤的發(fā)生有密切關聯(lián)2，但hp感染是否與胃腸b細胞淋巴瘤的預后和治療效果有關還少見報道。收集1999-2006年胃腸b細胞非霍奇金淋巴瘤18例，觀察其臨床病理特征，并通過免疫組織化學及隨訪，了解這類腫瘤的臨床病理特征及預后的相關因素，以發(fā)現(xiàn)較理想的預后預測指標。     1  材料與方法     11

10、60; 材料  確診的胃腸b細胞性非霍奇金淋巴瘤18例，其中dlbcl 7例，malt淋巴瘤11例（6例伴轉化）。所有標本采用10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，he切片觀察及腫瘤細胞免疫表型檢測，按照2001年who淋巴造血組織腫瘤分類進行病例篩選。參考胃腸淋巴瘤musshof分期3的分類標準進行分期。     12  免疫組織化學方法  采用s-p三步法，并做熱修復。bcl-2、ki-67、cd5、抗hp均為單克隆抗體，為dako公司產(chǎn)品。工作稀釋濃度bcl-2為1150、ki-67 150、抗hp 120，cd5為即用型抗體，采用

11、0.01 mol/l，pbs（ph7.27.4）代替一抗作空白對照。陽性結果判定：cd20、cd79a、cd5陽性信號位于胞膜，、bcl-2位于胞漿，以陽性細胞數(shù)>20%為陽性。ki-67陽性信號位于胞核，每張切片計數(shù)10個（400倍）視野，計算ki-67 陽性細胞的百分率?？筯p陽性信號在胃腸腺上皮細胞膜以及胃小凹上皮的游離緣。     1.3  隨訪  電話隨訪，以病人初次住院后出院為隨訪開始時間，以20070830為隨訪結束時間。     1.4  統(tǒng)計學方法  計數(shù)資料采用四格表的

12、fisher確切概率法檢驗，生存分析采用kaplan-meier軟件。     2  結果     21  bcl-2、cd5、ki-67表達及hp感染  淋巴瘤臨床病理特征及預后的關系見表1。     2.2  臨床資料  dlbcl 7例，malt淋巴瘤11例（6例伴大細胞轉化）；男性12例，女性6例。發(fā)病年齡為2284歲，中位發(fā)病年齡56歲；臨床分期i期4例，ii期3例，iii期7例，iv期4例；淋巴結累及者9例。肉眼觀察：7例呈潰瘍型腫塊，10例表

13、現(xiàn)為圓型或橢圓型腫塊，腫塊直徑28cm，1例表現(xiàn)為腸腔狹窄及腸壁增厚。病理組織學檢查：malt淋巴瘤腫瘤細胞為中心細胞樣細胞（細胞中等偏小，細胞質(zhì)較豐富，透明，胞核成角或略凹陷）或單核樣b細胞（細胞中等大，胞核圓形、卵圓形或略凹陷，染色質(zhì)較粗，胞質(zhì)中等量，透明，細胞界限清楚），其中見少量散在的轉化大細胞，可見淋巴上皮病損（圖1）及反應性濾泡生發(fā)中心逐漸被 表1  bcl-2、cd5、ki-67及hp感染與淋巴瘤臨床病理特征及預后的關系腫瘤細胞取代，形成濾泡植入，6例轉化的大細胞明顯增多，全部病例均表達cd20（圖2）及cd79a，具有或輕鏈限制性；dlbcl腫瘤細胞彌漫分布，瘤細胞為

14、轉化的淋巴樣大細胞，核呈泡狀，核仁單個或多個，胞質(zhì)常嗜堿性或嗜雙色性（圖3），腫瘤細胞呈cd20陽性及cd79a陽性，bcl-2表達（圖4）和cd5表達（圖5）。2.3  隨訪  18例病例中，9例獲隨訪資料，獲訪率50%。9例中有7例malt淋巴瘤和2例dlbcl。7例malt淋巴瘤分期為： i期2例，ii期2例，iii期1例，iv期2例；術后3例化療（其中1例死亡，臨床分期?期），1例服抗生素和中藥，2例只服中藥，1例未做任何治療。2例dlbcl皆為iv期，術后都做化療，其中1例接受骨髓移植，2例病人都死亡。由此可見，dlbcl比malt淋巴瘤的生存狀況要差。隨訪患者總

15、的生存率為66.67%。3  討論     胃非霍奇金淋巴瘤大多數(shù)是b細胞淋巴瘤，腸的b細胞淋巴瘤也不少見，其中dlbcl和malt淋巴瘤最為常見。淋巴瘤呈惰性臨床經(jīng)過，可以復發(fā)，還可以轉化成侵襲性的dlbcl。有研究表明，胃malt淋巴瘤常為惰性，而腸malt淋巴瘤中度惡性的比例明顯增高。malt淋巴瘤低度惡性病例中僅少數(shù)表達低水平ki-67，而伴有轉化的病例細胞增殖活性明顯增高2。     bcl-2基因是細胞凋亡調(diào)節(jié)基因，bcl-2與bcl-xl平衡及二聚體的形成對凋亡具有重要影響4，bcl-2通過抑制多種因素引起的細

16、胞凋亡，使腫瘤細胞凋亡受阻，在淋巴瘤發(fā)病中起重要作用，同時它還是一種耐藥基因。凋亡減少可能是低度惡性非霍奇金淋巴瘤的主要發(fā)病機制，而高度惡性非霍奇金淋巴瘤的發(fā)病機制可能與細胞增殖活性增高有關。本實驗中，7例dlbcl有2例bcl-2陽性表達，5例malt淋巴瘤中4例陽性表達，而6例伴轉化的malt淋巴瘤中3例陽性表達,可見dlbcl的bcl-2陽性表達明顯低于伴轉化的malt淋巴瘤及普通的malt淋巴瘤，這與文獻報道一致。bcl-2表達有隨著淋巴瘤臨床分期的增加而增加的趨勢，說明bcl-2高表達可能與較晚臨床分期有關。bcl-2表達病例要比未表達的病例的淋巴結累及率明顯升高。但由于病例較少，上

17、述比較均沒有統(tǒng)計學意義。     ki-67表達與許多腫瘤的預后相關早已被公認。呂方芳等5認為ki-67乘積高的非霍奇金淋巴瘤患者生存期較短，ki-67指數(shù)高為復發(fā)危險因素。本實驗中ki-67有隨著臨床分期的增加而增加的趨勢，ki-67高表達的患者淋巴結累及率比低表達患者的淋巴結累及率明顯升高，與文獻報道基本相符。     yoshioka t等6通過實驗發(fā)現(xiàn)cd5陽性的dlbcl在染色體8p21和11q13存在高頻率的畸變，其中8p21比11q13突變的dlbcl患者具有更壞的臨床過程，包括臨床分期、體力狀態(tài)、生存曲線。8p21和1

18、1q13同時突變尚未在一個患者身上檢出，還發(fā)現(xiàn)每種畸變都有不同的染色體添加或缺失。由此認為，cd5陽性的dlbcl與cd5陰性的dlbcl和套細胞淋巴瘤的起源均不同。suguro 等7也認為cd5陽性的dlbcl和cd5陰性的dlbcl是不同的亞群，具有不同的臨床特點，cd5陽性患者預后差。本實驗中，cd5在malt中的表達率比在dlbcl中高，cd5隨著臨床分期的增高有增加的趨勢，cd5陽性的患者淋巴結累及率要比陰性患者的累及率略高，與文獻報道一致。但cd5陽性的患者比cd5陰性患者的生存狀況要好，與文獻報道不盡相同。     hp被認為是malt淋巴瘤的始動因

19、子。目前malt淋巴瘤中hp感染與api2-malt1出現(xiàn)的關系報道較多。一種觀點認為，hp感染同api2-malt1融合基因是不同的兩種致病因素，可能是通過兩種不同的途徑參與malt淋巴瘤的發(fā)生機制8。也有報道t（11;18） （q21;q21）易位與cga陽性的hp菌株感染明顯相關9。yin hf等10發(fā)現(xiàn)malt淋巴瘤的凋亡指數(shù)低而bcl-2 陽性率高，dlbcl卻相反，hp感染兩者無明顯差異，認為hp感染和胃腸malt淋巴瘤具有明顯相關性。目前認為早期malt淋巴瘤經(jīng)單純抗hp治療可獲完全緩解，晚期胃malt淋巴瘤應在手術或化療前先清除hp，這樣可減少術后腫瘤的復發(fā)11。本實驗中，7例

20、dlbcl有hp感染3例，11例malt淋巴瘤中3例感染；隨著臨床分期的增加，hp感染有增加的趨勢；hp感染對淋巴結累及沒有影響，但是hp感染者的生存狀況要比陰性者差,cd5表達與hp感染無關。hp感染與胃腸b細胞淋巴瘤預后的關系有待進一步研究。     本研究表明bcl-2、ki-67、cd5表達及hp感染與胃腸b細胞淋巴瘤的類型、分期、淋巴結累及等臨床特征有一定相關，有待進一步增加病例做深入研究?！緟⒖嘉墨I】  1hioka t,miura i,kume m,et al.cytogenetic features of de novo cd5-posi

21、tive diffuse large b-cell lymphomaj.genes chromosomes cancer,2005（2）:149-157.2克曉燕，景紅梅.37例黏膜相關淋巴組織型淋巴瘤的病理、臨床資料分析j.北京大學學報，2003（2）：123-127.3schechter nr,yahalom j.low-grade malt lymphoma of the stomach:a review of treatment j radiation oncol phys,2000（46）:1093-1103.4reena ray,gao chen,chris

22、tine vande velde,et al.bnip3 heterodimerizes with bcl-2/bcl-xl and induces cell death independent of bcl-2 homology3（bh3） domain at both mitochondrial and nonmitochondrial sitesj, j biol chem, 2000（2）:1439-1448.5呂方芳.urvivin、bcl-2及ki-67在彌漫大b細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義j.腫瘤，2006（10）：930-934.6yoshioka t,miura i,kume m,et al.cytogenetic features of de novo cd5-positive diffuse large b-cell