考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)含量干貨分享

1、考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)含量一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆湛捡R斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法.學(xué)習(xí)分光光度計(jì)的原理及使用方法.二、 實(shí)驗(yàn)原理三、 實(shí)驗(yàn)步驟試劑試管編號(hào)024567標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液m000020040.060081樣品0。樣品0.1相當(dāng)于蛋白質(zhì)含量/微克0.0 2060800未知未知蒸餾水/l0。0.080。60.000000考馬斯亮藍(lán)染液/ml33331、 打開(kāi)分光光度計(jì)，預(yù)熱3mn。2、 取8支潔凈的干燥試管,按上表進(jìn)行編號(hào)，05號(hào)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制,號(hào)、號(hào)用于樣品溶液的測(cè)定.3、 取微量注射器,用蒸餾水清洗3次，再用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液潤(rùn)洗次。按上表在0號(hào)試管中加入標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，然后用

2、蒸餾水洗3次，再按上表在05號(hào)試管中加入相應(yīng)含量的蒸餾水。.文檔交流 僅供參考.4、 微量注射器用樣品潤(rùn)洗2次，抽取100微克的樣品加入到6號(hào)試管，再抽取100微克加到號(hào)試管.用蒸餾水清洗微量注射器.文檔交流 僅供參考.5、 取5m的移液管，用蒸餾水清洗3次，用考馬斯亮藍(lán)染液潤(rùn)洗次。在7號(hào)試管中各加入3。0ml的考馬斯亮藍(lán)染液。振蕩試管，混合均勻。.文檔交流 僅供參考.6、 待其充分反應(yīng)（約2分鐘）后，用分光光度計(jì)分別測(cè)它的吸光值。7、 用5號(hào)的數(shù)據(jù).以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。8、 由樣品液的吸光值查標(biāo)準(zhǔn)曲線求出蛋白質(zhì)含量。四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析試管編號(hào)01245a5

3、9500。330630。871.931.1890860。836樣品溶液吸光值(0.860。836)/2=0.56查標(biāo)準(zhǔn)曲線得樣品液的蛋白質(zhì)含量為66。0微克分析:考馬斯亮藍(lán)g250能與蛋白質(zhì)結(jié)合,染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后引起染料最大吸收峰的改變，從6nm變?yōu)?5nm,光吸收值增加。同時(shí)蛋白質(zhì)染料復(fù)合物具有高的消光系數(shù),大大提高了蛋白質(zhì)測(cè)定的靈敏度，最低檢出量為1微克蛋白質(zhì)。染料與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速約2n，結(jié)合物的顏色在h內(nèi)保持穩(wěn)定。一些陽(yáng)離子如k+，n+,+以及（nh4）2so,乙醇等物質(zhì)不干擾測(cè)定，而大量的去污劑如trtonx0，sd等則嚴(yán)重干擾測(cè)定，少量的去污劑可通過(guò)用適當(dāng)?shù)膶?duì)照而消除。.文檔交流 僅供參考.優(yōu)點(diǎn)：染色法簡(jiǎn)單迅速，干擾物質(zhì)少，靈敏度高。缺點(diǎn)：每次測(cè)量都得重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。注意事項(xiàng)：1、每次測(cè)量吸收值都應(yīng)用0號(hào)試管中的溶液去校準(zhǔn)，以免后面的結(jié)果偏差過(guò)大.2、0號(hào)試管起空白對(duì)照的作用，消除一定的系統(tǒng)誤差.3、6、7號(hào)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，它們之間的吸收值應(yīng)非