液相基本術(shù)語及操作

1、-作者xxxx-日期xxxx液相基本術(shù)語及操作【精品文檔】 液相色譜檢測1 儀器的基本常識及術(shù)語1.1 儀器結(jié)構(gòu)：液相色譜儀主要包括泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器；1.2 儀器分類：液相色譜儀屬于精密儀器中的色譜儀器；按照分為離機(jī)制，吸附、分配、離子交換、親和色譜，體積排阻色譜；按照流動相與固定相的極性，分為正相色譜法和反相色譜法； 高效液相色譜法的應(yīng)用范圍：高效液相色譜法適用于高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、受熱不穩(wěn)定易分解、分子量大的，不同極性的有機(jī)化合物，生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3 儀器檢定：液相色譜儀檢定周期為1年，在兩次檢定間期內(nèi)進(jìn)行一次期間核查，也可以根據(jù)情況增加

2、核查次數(shù)；1.4 維護(hù)保養(yǎng)：對于液相維護(hù)方式主要是周維護(hù)和日維護(hù)，其中周維護(hù)包括聯(lián)機(jī)系統(tǒng)及中工作站軟件維護(hù)、數(shù)據(jù)庫整理備份、檢測器自檢、維護(hù)單向閥、溶劑砂芯濾頭、進(jìn)樣器、電機(jī)泵檢查維護(hù)、溶劑瓶清洗等；日維護(hù)包括環(huán)境溫度、環(huán)境濕度、色譜柱溫度、壓力流速、進(jìn)樣口是否潔凈、進(jìn)液處的砂芯過濾頭是否潔凈、流動相交換時是否有沉淀；色譜法的常用基本術(shù)語基線：在色譜操作條件下,沒有被測組分通過鑒定器時,記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線.死時間,保留時間及校正保留時間:從進(jìn)樣到惰性氣體峰出現(xiàn)極大值的時間稱為死時間,以td表示.從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰最高值所需的時間稱保留時間,以tr表示.保留時間與死時

3、間之差稱校正保留時間.以Vd表示.死體積,保留體積與校正保留體積:死時間與載氣平均流速的乘積稱為死體積,以Vd表示,載氣平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留時間與載氣平均流速的乘積稱保留體積,以Vr表示,Vr=trxFc峰面積：流出曲線(色譜峰)與基線構(gòu)成之面積稱峰面積,用A表示.拖尾因子：是反映峰對稱性的指標(biāo)，計(jì)算公式：拖尾因子 TW0.05h/2d1（其中W0.05h為5%峰高處的峰寬，d1為峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離）。峰高與半峰寬:由色譜峰的濃度極大點(diǎn)向時間座標(biāo)引垂線與基線相交點(diǎn)間的高度稱為峰高,一般以h表示.色譜峰高一半處的寬為半峰寬,一般以 x1/2表示； 1.7 色譜檢測的特

4、性（1）靈敏度高；（2）線性范圍寬；（3）分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間的關(guān)系：（4）分離度與柱效的平方根成正比，選擇因子一定時，增加柱效；（5）分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化：一般通過改變固定相和流動相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可增大選擇因子；（6）增大選擇因子的最有效方法是選擇合適的固定液。對于液相色譜，改變流動相的組成，可以有效控制k；2 儀器的操作規(guī)程2.1 日立液相設(shè)備 L-2000/2400操作規(guī)程 使用環(huán)境環(huán)境溫度：455；相對濕度：小于95%RH。 使用前準(zhǔn)備檢查所用溶液(如流動相，乙腈等)是否足夠。檢查線路是

5、否連接正常。 設(shè)備操作方法具體操作如下：(1)依次開啟泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進(jìn)樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)；(2)打開軟件，點(diǎn)擊“i”按鈕，出現(xiàn)聯(lián)機(jī)界面，點(diǎn)擊“Iinitialize” i'ni.laiz按鈕，當(dāng)文本框出現(xiàn)文字時，表示聯(lián)機(jī)成功；(3)檢查所用方法是否符合要求。如不符合，進(jìn)行設(shè)置；(4)開泵。檢測具體操作如下：(1)建立所需樣品盒；(2)點(diǎn)擊檢測按鈕，選擇剛建立的樣品盒；(3)首先進(jìn)行走基線；(4)當(dāng)基線走平時，點(diǎn)擊系列樣品檢測按鈕，進(jìn)行標(biāo)樣，樣品檢測；(5)當(dāng)標(biāo)樣檢測結(jié)果出來時，打開結(jié)果窗口，選擇所需標(biāo)樣結(jié)果，點(diǎn)擊“Recalculate'ri:'kæ

6、;lkjuleit進(jìn)行重新計(jì)算，然后點(diǎn)擊“Calibration” kæli'brein進(jìn)行定標(biāo)；(6)當(dāng)樣品結(jié)果出來時，打開結(jié)果窗口，選擇所需樣品結(jié)果，點(diǎn)擊“Recalculate” 'ri:'kælkjuleit進(jìn)行重新計(jì)算，然后點(diǎn)擊“ModifyReport” 'mdifai,  ri'p:t,此單詞屬于使用最頻繁的3000個英文單詞，是海詞推薦用戶應(yīng)該學(xué)會的4星核心詞匯。,出現(xiàn)結(jié)果報告，即可查看樣品具體結(jié)果。 更換流動相具體操作如下：(1)當(dāng)流動相快不夠時或異常時，及時更換流動相；(2)先把泵關(guān)閉，將流動相入口放入新

7、流動相中；(3)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(4)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵； (5)走基線，當(dāng)基線走平時，開始做標(biāo)樣，做樣。 關(guān)機(jī)具體操作如下：(1)先把泵關(guān)閉，將流動相入口更換為超純水；(2)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(3)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(4)用超純水沖洗管路大約20分鐘；(5)把泵關(guān)閉，將超純水更換為100%甲醇或100%乙腈；(6)將泵閥逆時針旋轉(zhuǎn)，進(jìn)行排氣。大約3分鐘后，關(guān)閉排氣功能；(7)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉(zhuǎn)擰緊，開泵；(8)用100%甲醇或100%乙腈沖洗管路大約30分鐘；(9

8、)關(guān)泵，關(guān)液相軟件，關(guān)泵開關(guān)，檢測器開關(guān)，自動進(jìn)樣器開關(guān)，柱溫箱開關(guān)。 維護(hù)保養(yǎng)、注意事項(xiàng)(1)進(jìn)行旬維護(hù)檢查工作，主要檢查事項(xiàng)：軟件是否正常、溫度、清洗、進(jìn)樣器、泵單元；(2)每次測量前進(jìn)行標(biāo)樣檢測，斜率達(dá)到99.99%要求才能檢測樣品，測完樣品及時清理。(3)按要求進(jìn)行每天2個小時以上的清洗。2.2 Waters高效液相色譜-2695/2489開機(jī)自檢具體操作如下：(1)打開Alliance'lains 2695和2489 的電源開關(guān)至 ON (1) 的位置，儀器開始進(jìn)行自檢；(2)儀器將進(jìn)行大約5分鐘的自檢過程，待儀器自我測試完畢后，出現(xiàn)以下畫面，畫面上方的狀態(tài)顯示區(qū)會出現(xiàn)“Id

9、le” 'aidl狀態(tài)，表示開機(jī)測試正常。 流動相有機(jī)溶劑要求用色譜純(進(jìn)口名牌最好)，水或緩沖鹽溶液要用超純水(電阻率：)，每48小時制備新鮮的水相流動相,尤其是100% 含水流動相使用時間不超過兩天。6根管子都在液面以下。溶劑的位置必須高于溶劑混合閥(Gradient Proportioning Valve)。'greidint pr'p:ni vælv清洗柱塞密封墊(Seal Wash) si:l w 的溶液：含5%10%甲醇的超純水。洗針液(Needle Wash) 'ni:dl w：50%甲醇：50%水(該比例僅適用于反相試驗(yàn))。m的膜過濾并

10、超聲脫氣1分鐘，用潔凈的玻璃容器盛放,避免污染，同時玻璃容器應(yīng)用超純水來清洗而不能用自來水。灌注柱塞密封清洗清洗操作步驟：(1)回到Menu'menju: 畫面，選擇Diag；(2)確定Seal Washsi:l w的管路放在正確的位置；(3)按Prime Seal Wash praim si:l w，再按Start，直到清洗溶劑流出泵桿密封圈沖洗廢液管，按Halt；h:lt(4)按Close。注意：密封圈清洗(Seal wash) si:l w溶劑，在反相液相色譜中可使用Water/ MeOHmethyl alcohol 甲醇 =90/10或Water/Acetonitrile &#

11、230;situ'naitril乙腈 =95/5(根據(jù)實(shí)際需要使用不同溶劑)。 灌注針頭清洗操作步驟：回到Mainmein的畫面，選擇Diag，選擇Primepraim Ndl Wash。設(shè)定值為30 秒，若想要多清洗幾次時，請按Start Again。清洗溶劑：50%的甲醇溶液注意：若上述清洗溶劑無法避免進(jìn)樣時的交叉污染，使用較強(qiáng)的溶劑系統(tǒng)來進(jìn)行清洗操作。 打開真空脫氣機(jī)如液相儀管路干，可進(jìn)行使用，如管路不干則按照以下步驟進(jìn)行操作：按“Menu/Status” 'steits鍵，進(jìn)入Status (1)畫面；利用方向鍵將光標(biāo)移至“Degasser” di:gæs位置

12、，按Enter；利用上下鍵選擇模式為ON。注意：在開啟除氣裝置時，要確認(rèn)所有溶劑管路都充滿溶劑；若沒有溶劑時請執(zhí)行溶劑的Dry Primedrai praim操作。 執(zhí)行干灌注確定流動相溶劑的管子放在正確的位置，檢測器(Detector di'tekt)廢液管及定量環(huán)(Sample Loop lu:p)的廢液管是否放置于適當(dāng)?shù)膹U液容器中。搖動溶劑瓶內(nèi)的過濾器(Solvent Filter) 'slvnt 'filt，防止氣泡附著在過濾器的外表面。將空的針筒插入抽液閥(Prime/Vent value)中，以逆時針的方向旋轉(zhuǎn)3圈。按“Menu/Status” 's

13、teits鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，按“Direct Function” di'rekt 'fkn功能鍵，選擇Dry Prime，按Enter。按下面使用的溶劑開啟閥門(例如:Open A)，然后將針筒向外拉，抽出510mL溶劑并完全抽出溶劑管子內(nèi)的氣泡，完成后關(guān)閉Prime/Vent閥門。在“Enter a duration” dju'rein中輸入3分鐘，按“Continue” 鍵，泵即以3.0mL/min的流速進(jìn)行清洗(Purge)?？芍貜?fù)上兩個步驟，將所要使用的流動相溶劑Dry Prime。 執(zhí)行濕灌注按“Menu/Status”鍵，進(jìn)入Status(1)

14、畫面，利用方向鍵將光標(biāo)移至“Composition” kmp'zin字段，將欲Wet Prime 的溶劑輸入100%。按“Direct Function” di'rekt 'fkn 功能鍵，選擇Wet Prime，按Enter。Wet Prime的原設(shè)定值，一般為Flow Rate:7.5mL/min，Time: 3.0min，然后按下“OK”鍵，泵即開始進(jìn)行Wet Prime操作。重復(fù)上述的步驟直到所有溶劑Wet Prime進(jìn)行完畢。 設(shè)定流動相平衡色譜柱按“Menu/Status” 鍵，進(jìn)入Status (1)畫面，利用方向鍵將光標(biāo)移至“Composition” k

15、mp'zin字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設(shè)置試驗(yàn)要求的溶劑組成比例，此時會在原溶劑比例表的下方出現(xiàn)新編輯溶劑比例表(New Composition)。設(shè)定好新的溶劑組成比例后，按“Change Comp” teind kmp功能鍵(改變?nèi)軇┙M成比例change composition)，此設(shè)定的溶劑組成比例即為當(dāng)前的比例。利用方向鍵將光標(biāo)移至“Flow” flu字段，利用儀器面板右側(cè)的數(shù)字鍵設(shè)定流速，此時儀器即設(shè)定的溶劑組成比例和流速來平衡色譜柱。特別提示:對于常規(guī)的反相色譜試驗(yàn)至少要用30倍柱體積來平衡，而對于離子對色譜的平衡可能需要多達(dá)500柱體積的流動相來平衡。 沖洗進(jìn)樣器溶劑

16、管理系統(tǒng)的前處理( Prime the solvent management system)要求如下：(1)改變?nèi)軇?(2)發(fā)現(xiàn)注射針頭內(nèi)有氣泡;(3)每天開機(jī)的時候。沖洗進(jìn)樣器執(zhí)行步驟：(1)按“Menu/Status”鍵，進(jìn)入Status(1)畫面，在設(shè)定溶劑的畫面中設(shè)定適當(dāng)?shù)牧魉倥c溶劑比例；(2)按“Direct Function” di'rekt 'fkn鍵，選擇Purge Injectorp:d in'dekt，按Enter；(3)輸入Sample Loop體積清洗的倍數(shù)(原定值為6 倍)，按Enter；(4)壓縮測試(Compression Check)請先

17、不需要測試，設(shè)定完成后按OK。 放入樣品盤打開計(jì)算機(jī)，運(yùn)行Empowerim'pau軟件，選擇存放數(shù)據(jù)文件的Project，運(yùn)行Run Samples；按Develop Methodsdi'velp 'med按鈕，建立方法；按Monitor'mnit按鈕，觀察基線，待基線平穩(wěn)，可準(zhǔn)備進(jìn)樣。 關(guān)機(jī)首先關(guān)閉檢測器電源；在2695溶劑槽中換上適當(dāng)?shù)那逑慈軇逑聪到y(tǒng)約60分鐘(針對離子對試驗(yàn)，建議50%乙腈：50%水1mL/min流速沖洗色譜柱2小時以上)；按2695面板Diag鍵，選擇Prime SealWash，清洗泵頭約1分鐘；再選擇Prime NdlWash，

18、清洗進(jìn)樣針12次；按Menu/Status鍵進(jìn)入手動控制模式，按Direct Function di'rekt 'fkn鍵，選擇Purge Injectorp:d in'dekt，沖洗進(jìn)樣器(針對離子對試驗(yàn)，建議設(shè)定50%乙腈：50%水的溶劑來沖洗進(jìn)樣器)；降低流速至0，待系統(tǒng)壓力回零后，關(guān)閉2695電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)及顯示器電源。島津LC-20AT液相色譜儀操作規(guī)程準(zhǔn)備工作在開機(jī)之前，根據(jù)所做樣品的方法要求，準(zhǔn)備好所用流動相，標(biāo)樣及樣品。流動相抽濾后超聲脫氣15分鐘，標(biāo)樣和樣品0.45um膜過濾。打開LC-20A×2SETS,CTO-10ASvp，SPD-M2

19、0A(或RF-10AXL)電源，待自檢通過。打開SCL-10Avp電源，檢查開機(jī)屏幕應(yīng)顯示各單元，如果某單元沒有顯示，則不能控制該單元，需按f2鍵取消屏幕Fixed標(biāo)志即可顯示并控制該單元。否則檢查通訊設(shè)置。打開計(jì)算機(jī)電源或重新啟動計(jì)算機(jī)，待正常進(jìn)入WINXP操作系統(tǒng)。 排空操作：打開LC-20AT泵排空閥(逆時針180度以上)，按Purge鍵，泵開始排空運(yùn)行。檢查流動相入口Teflon管路沒有氣泡后，再按Purge鍵停止排空。 壓力調(diào)零：如果purge時，壓力不為零，需要進(jìn)行壓力調(diào)零,按LC-20ATvp泵Func鍵選擇CONTROL 項(xiàng)，按FUNC鍵直至屏幕顯示 *ml ZERO ADJ項(xiàng)

20、，按Enter鍵，再按CE鍵，即完成調(diào)零。然后關(guān)緊排空閥(順時針旋緊)。在計(jì)算機(jī)中雙擊LC SOLUTION圖標(biāo)，進(jìn)入工作站。 再雙擊OperationAnalysis 14進(jìn)入實(shí)時分析窗口(根據(jù)不同的檢測器選擇)。在開機(jī)畫面中，User ID選中Admin，不需輸入Password，點(diǎn)擊OK(可聽到峰鳴一聲)，在下面操作中AB表示在A菜單下選擇B，以此類推。選中表示在中打號。在左側(cè)助手欄給出了引導(dǎo)順序操作的圖標(biāo)，自上而下順序執(zhí)行即可(可以跳過執(zhí)行)：(1)System configuration系統(tǒng)配置(第一次安裝或更換檢測器時配置，通常跳過不操作)；(2)System Check編輯儀器檢

21、查參數(shù)：并且RUN運(yùn)行檢查。通常不操作(跳過)；(3)點(diǎn)擊Data acquisition進(jìn)入采集數(shù)據(jù)編輯方法界面點(diǎn)擊Instrument Parameter進(jìn)入儀器參數(shù)設(shè)置界面：選中Normal(通用簡單)或Advanced(高級詳細(xì))項(xiàng)，分別設(shè)定Pumps泵參數(shù)，Oven柱箱參數(shù)，Detecter檢測器參數(shù)，Controller系統(tǒng)控制器參數(shù)，Time Program時間程序參數(shù)等。儀器配置不同，控制單元項(xiàng)的數(shù)目多少不同;Pumps泵參數(shù)：Mode控制方式，F(xiàn)low流速，B，C，DConc各項(xiàng)濃度，P Max最大壓力；Oven柱箱參數(shù)：Oven設(shè)定溫度，T Max最大保護(hù)溫度；Detect

22、er檢測器參數(shù)：Cell設(shè)定池溫。Wavelength設(shè)定波長；Controller系統(tǒng)控制器參數(shù)；Data acquisition選中Acquisition Time后，設(shè)置分析時間，等等；LC Time Prog時間程序參數(shù)：編輯泵梯度洗脫程序，也可以控制柱箱，檢測器等等；(4)點(diǎn)擊MethodData Analysis Parameter編輯積分參數(shù)：設(shè)置 Width峰寬，Slope斜率，Min Area最小峰面積等等。新建方法推薦使缺省值，待分析完樣品后再設(shè)置此項(xiàng)參數(shù)，得到優(yōu)化的色譜數(shù)據(jù)結(jié)果后，將參數(shù)保存在當(dāng)前方法中；(5)保存方法：點(diǎn)擊FileSave Method as如圖：起文件

23、名*保存后，該方法即作為當(dāng)前運(yùn)行的方法;(6)下載方法：點(diǎn)擊Down Load 鍵，向儀器傳送參數(shù)。運(yùn)行方法點(diǎn)擊如圖圖標(biāo)(Instrument On/Off 系統(tǒng) 開/關(guān))系統(tǒng)開始運(yùn)行，檢查各單元參數(shù)應(yīng)與方法設(shè)定一致。等待系統(tǒng)平衡。一般情況下，由于流動相不同，交換平衡時間不定?？梢杂^察Detecter檢測器吸收變化,如果吸收值穩(wěn)定不變，即認(rèn)為接近平衡，可以調(diào)零等待，確認(rèn)不變后，準(zhǔn)備進(jìn)樣分析?？梢酝ㄟ^改變衰減或予覽基線觀察基線變化，待基線平穩(wěn)(初始化顯示時與橫軸平行)，準(zhǔn)備進(jìn)樣操作。進(jìn)樣分析如下：(1)單針進(jìn)樣分析：如圖點(diǎn)擊Single Start圖標(biāo)：出現(xiàn)如下采樣對話框；(2)編輯樣品參數(shù)：S

24、ample ID樣品信息，Method Name 方法文件名，Data Path 數(shù)據(jù)存儲路徑，Data Name 數(shù)據(jù)文件名，Vial樣品瓶號(無)，Tray#架號(無)，Injection進(jìn)樣量等；(3)點(diǎn)擊OK后，開始進(jìn)樣操作(重復(fù)單針進(jìn)樣，重復(fù)執(zhí)行第7步驟即可)；(4)每個樣到時間分析結(jié)束，根據(jù)方法中的積分參數(shù)，所有色譜數(shù)據(jù)會自動進(jìn)行積分處理。報告予覽和打印點(diǎn)擊Top 返回上級引導(dǎo)操作欄。點(diǎn)擊Post Run Analysis 進(jìn)入數(shù)據(jù)后處理界面：點(diǎn)擊report 進(jìn)入報告界面：點(diǎn)擊report format 進(jìn)入格式界面：調(diào)入報告格式文件也可以自己編輯報告格式，然后點(diǎn)擊Data打開數(shù)

25、據(jù)文件，將左側(cè)數(shù)據(jù)文件拖入右側(cè)報告欄即可。關(guān)于報告格式，可以通過內(nèi)容選擇圖標(biāo)，在報告中確定位置后，添加即可。右鍵功能很強(qiáng)大，用戶可以參考說明書靈活使用。選擇快捷圖標(biāo)的預(yù)覽或打印圖標(biāo)執(zhí)行報告預(yù)覽或打印。關(guān)機(jī)步驟如下：(1)更換洗液清洗流路系統(tǒng)(如用緩沖液，先用水清洗1小時，再用有機(jī)溶劑清洗30分鐘以上)，最后用有機(jī)溶劑封存；(2)清洗結(jié)束后，停止系統(tǒng)運(yùn)行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off鍵即停止所有單元工作；(3)退出LC SOLUTION(可聽到峰鳴一聲)，再完全退出；(4)關(guān)系統(tǒng)控制器SCL-10Avp電源開關(guān)；(5)關(guān)主機(jī)SPD-M20A(或RF-10

26、AXL)檢測器，LC-20AT泵，CTO-10ASvp柱箱電源開關(guān)。清洗流路系統(tǒng)要求如果使用緩沖液，先用水更換緩沖液，清洗1小時，然后更換甲醇清洗40分鐘；如果使用有機(jī)溶劑(水)，直接更換甲醇清洗40分鐘即可。操作規(guī)程開機(jī)打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows XP(或Windows 2000)畫面,并運(yùn)行Bootp Server程序。打開1100 /1200LC各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動與1100LC/1200LC。從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫面, 單擊”View”菜單中的“Show T

27、op Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。把流動相放入溶劑瓶中。打開Purge閥。單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump control選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump Co

28、ntrol選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵，關(guān)閉Purge valve。單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫面，設(shè)Flow：1.0mL/min。單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積，也可輸入停泵的體積，單擊Ok。關(guān)機(jī)關(guān)機(jī)前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘(如ACN)，然后關(guān)泵(適于反相色譜柱，正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗)。退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)(用shut down關(guān))。關(guān)掉Agilent 1100/1200電源開關(guān)2.5 C8柱修復(fù)操作規(guī)程目的 為節(jié)約檢測成本，同時統(tǒng)一操作方法，特制定本作

29、業(yè)指導(dǎo)書。 適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于愛杰爾、天津蘭博生產(chǎn)的C8柱修復(fù)方法（其它廠家可以嘗試使用）。C8柱使用一段時間后，會出現(xiàn)柱壓高、峰變形問題，大部分的原因?yàn)镃8柱污染，通過對污染C8柱柱頭過濾網(wǎng)進(jìn)行超聲清洗，然后再生，解決問題。工具、試劑 2個扳手，1把鈍剪刀。乙腈（色譜純）、異丙醇（色譜純）。 修復(fù)過程 （1）將故障C8柱柱頭處擰開 用2個扳手將C8柱兩柱頭擰開，取下兩端柱頭。用鈍的剪刀夾住塑料封口，取下塑料封口，過濾網(wǎng)就在封口處。觀察C8柱內(nèi)填料是否有污染，如有污染，用干凈的濾紙輕輕擦掉污染物。注意：只能擦去表面一層填料，不能太多，否則會損壞柱子。兩端端口兩端端口圖1：C8柱內(nèi)有過濾網(wǎng)圖

30、2：C8柱內(nèi)部塑料封口，內(nèi)有過濾網(wǎng)（2）對兩端柱頭進(jìn)行超聲清洗（或者對另一支舊C8柱的后端柱頭進(jìn)行清洗，并代替此C8柱前端柱頭）準(zhǔn)備小燒杯，倒入10%乙腈，然后將第一步取出的兩端柱頭（包括過濾網(wǎng)）放入燒杯，超聲半小時；然后將10%乙腈更換為100%乙腈超聲半小時；最后將100%乙腈更換為超純水，超聲半小時?；蛘邔⒁郧坝眠^的舊C8柱的后端柱頭卸下，進(jìn)行清洗，并代替此C8柱的前端柱頭。圖3：對端口，塑料封口，過濾網(wǎng)進(jìn)行超聲清洗（3）安裝柱子將過濾網(wǎng)放入塑料封口處，安裝塑料封口，用扳手?jǐn)Q緊柱子。（4）連接柱子，進(jìn)行再生 然后將C8柱裝到液相色譜儀，等基線走平后，進(jìn)標(biāo)品。觀察峰形、柱壓等是否正常，如果

31、正常則可以不進(jìn)行此步驟，否則進(jìn)行再生：（1）用10%乙腈沖洗30分鐘，流速為0.6ml/min。（2）用100%乙腈沖洗2小時。流速為1.0mlmin。（3）用100%異丙醇沖洗2小時。流速為0.5mlmin。（4）用100%乙腈沖洗2小時。流速為1.0mlmin。（5）用10%乙腈沖洗30分鐘，流速為0.6ml/min，然后換上流動相，然后走流動相，等基線走平后，進(jìn)標(biāo)品。（5）驗(yàn)證修復(fù)效果 驗(yàn)證方法（1）觀察柱壓，柱壓正常。（2）觀察標(biāo)品出峰情況，峰形良好。（3）進(jìn)行回收率驗(yàn)證，回收率達(dá)到85%-105%。 通過以上方面，說明修復(fù)成功，此C8柱可以繼續(xù)進(jìn)行使用。（6）注意事項(xiàng) 拆裝C8柱注意

32、事項(xiàng)清洗手，防止污染柱子內(nèi)部。拆裝柱子時，防止柱頭部螺紋變形。連接C8柱與液相色譜儀注意事項(xiàng)連接C8柱入口與液相色譜儀，打開泵，使C8柱出口流出液體，沖5分鐘，連接C8柱與液相色譜儀檢測器端。防止有異物流入檢測池。3 色譜檢測的項(xiàng)目和關(guān)鍵控制點(diǎn)核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃輸入unliab樣品接收儀器聯(lián)機(jī)樣品確認(rèn)儀器檢查平衡檢測器再次核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃核實(shí)出具結(jié)果上機(jī)檢測樣品記錄檢驗(yàn)結(jié)果核實(shí)出具結(jié)果記錄樣品信（1）核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃認(rèn)真核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃，明確檢驗(yàn)項(xiàng)目和批次，核實(shí)可以開展的項(xiàng)目。（2）樣品接收經(jīng)相關(guān)檢驗(yàn)人員對送檢信息及樣品的符合性確認(rèn)后在送檢單上簽字，檢驗(yàn)人員即可進(jìn)行樣品的檢驗(yàn)。（3）樣品確認(rèn)注意檢查樣品規(guī)格、型

33、號、商標(biāo)、批次等級內(nèi)容是否清楚，狀態(tài)是否完好、變質(zhì)、污染等。如發(fā)現(xiàn)有任何問題，要詢問送檢單位。（4）記錄樣品信息將樣品名稱、批次、送樣日期等信息完整的記錄到帶有編碼的原始記錄上，要盡可能的保證信息的完整性，和可追溯性。（4）樣品前處理按照相應(yīng)的檢驗(yàn)方法進(jìn)行處理，并做好記錄。（5）上機(jī)檢測樣品待儀器平衡完畢后，裝滿洗瓶內(nèi)的清洗溶劑（清洗溶劑要當(dāng)天用當(dāng)天配置），根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書或者國標(biāo)，走標(biāo)準(zhǔn)曲線或者單點(diǎn)，上機(jī)即可。（6）記錄檢驗(yàn)結(jié)果儀器走完樣品后，根據(jù)峰的保留時間定性，峰面積定量，如實(shí)記錄檢驗(yàn)結(jié)果于原始記錄中，原始記錄按方法要求進(jìn)行實(shí)際記錄檢測值。（7）核實(shí)出具結(jié)果對于外部樣品的檢測，記錄好檢驗(yàn)結(jié)

34、果后，核實(shí)無誤后即可出具檢驗(yàn)結(jié)果。（8）核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃對于內(nèi)部樣品的檢測，輸入結(jié)果前需再次核實(shí)檢驗(yàn)計(jì)劃，保證沒有漏檢后方可輸入檢驗(yàn)結(jié)果。（9）輸入unliab打開unliab系統(tǒng)，選擇正確的樣品類型和業(yè)務(wù)類型，創(chuàng)建樣品，創(chuàng)建完畢后如實(shí)填寫unliab系統(tǒng)中的信息卡，正確分配檢測項(xiàng)目，輸入結(jié)果。結(jié)果報出時，檢測結(jié)果在檢出限以下時，均報未檢出；檢測結(jié)果在檢出限以上時，報實(shí)測值。如檢驗(yàn)處均使用程序輸單，則要求各崗位的輸單密碼不能外漏；結(jié)果輸入后不允許隨意改動，如需修改則上報直屬領(lǐng)導(dǎo)同意后則進(jìn)行修改，其他人員無權(quán)修改；所有過程檢驗(yàn)結(jié)果均在出具結(jié)果的當(dāng)班下班前提交系統(tǒng)或輸入固定文件夾中；按照規(guī)定的程序進(jìn)入

35、預(yù)定的表格，不允許輸入的內(nèi)容和文件名稱不對應(yīng)、存在相同或能引起誤解的名稱，不能保證儲存的唯一性。檢驗(yàn)報告儲存要求：如使用Unilab系統(tǒng)出具結(jié)果，由于起系統(tǒng)有自動保存功能，故不需要對其進(jìn)行下載保存，其他電子版檢驗(yàn)報告要求每半年進(jìn)行備份刻盤一次。3.2三聚氰胺檢測原理：試樣用三氯乙酸溶液-乙酸鉛提取，經(jīng)陽離子固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。三聚氰胺檢驗(yàn)方法流程圖：接樣稱量樣品加0.1%三氯乙酸50ml加0%乙酸鉛2ml超聲20min離心10min（8000r/min）過混合型陽離子交換柱凈化氮吹20%甲醇溶液定容1ml0.45um過濾上機(jī)。3.1.1 稱量樣品：嚴(yán)格按照天平的

36、使用規(guī)程操作即可。具體如下：天平使用前檢查：(1)準(zhǔn)備使用天平時觀察周圍是否存在震動的情況，如果存在應(yīng)在震動結(jié)束后再稱取樣品。(2)檢查天平的使用環(huán)境是否符合溫度1030、濕度2585的要求，水平泡是否處于中央位置。 (3)打開天平，待天平完成自檢顯示“”時，可以使用。(4)對于過冷、過熱和含有揮發(fā)性及腐蝕性的物體，不可放入天平內(nèi)稱量，被測物不得超過天平最大的負(fù)載。 3.2.2 稱量(1)將被測物放在稱盤中央，待顯示器左側(cè)邊的“”標(biāo)志熄滅后，該數(shù)字即為被稱物的質(zhì)量； (2)如稱量需盛放物質(zhì)，先稱量容器，按TAR鍵，顯示為零即去皮，再置被稱物質(zhì)于容器中，這時顯示的是被稱物的凈重； (3)每次稱量

37、時都應(yīng)將天平門關(guān)閉，稱量樣品過程中，避免出現(xiàn)抽拉抽屜、人員走動、倚靠實(shí)驗(yàn)臺等對結(jié)果有影響的動作；(4)稱量完畢后關(guān)閉天平開關(guān)，但不必斷掉電源；(5)稱樣時所使用的離心管等要編號與樣品一一對應(yīng)，并且記錄下樣品的質(zhì)量；3.2.3 加藥品3.2.3.1 加入藥品時注意要邊加邊搖，讓藥品與樣品充分接觸，使粉末狀樣品充分的溶解在藥品中。3.2.4超聲處理：超聲樣品時執(zhí)行超聲波操作規(guī)程即可。具體如下：3.2.4.1 工作前準(zhǔn)備： (1)檢查電源連接線是否有破損，電源插頭是否插入220V的三芯電源插座并連接牢固；(2)檢查清洗槽是否有異物； (3)檢查排水閥門是否關(guān)閉；3.2.4.2超聲處理：(1)樣品在超

38、聲時要求超聲波清洗機(jī)中的液面一定要高于樣品的液面;(2)時間控制符合要求;(3)樣品超聲處理完成后，關(guān)閉電源開關(guān)，將槽內(nèi)水放凈，并將機(jī)體擦洗干凈；斷開電源，讓機(jī)體自然散熱;3.2.5 離心樣品:樣品離心時執(zhí)行離心機(jī)的操作規(guī)程即可。如下：(1)檢查電源及數(shù)據(jù)線連接是否牢固，打開儀器電源，設(shè)定所需溫度;(2)待溫度達(dá)到設(shè)定溫度時，打開儀器上蓋，將需離心的樣品對稱放入離心機(jī)內(nèi)，關(guān)閉儀器上蓋，設(shè)定轉(zhuǎn)速，設(shè)定運(yùn)轉(zhuǎn)時間，點(diǎn)擊開始離心;(3)離心結(jié)束后將樣品取出，如暫時不使用，需將儀器上蓋蓋好，如長時間不使用，需將腔體內(nèi)冷凝水清理后，關(guān)閉儀器電源;3.2.6 過混合型陽離子交換柱樣品離心時準(zhǔn)備好所需要的陽離

39、子小柱和試管并一一編號。離心結(jié)束后活化陽離子小柱、上樣、淋洗等。整個萃取過程要求銜接緊密不可以使小柱干燥，并且每一種液體按要求控制流速在1ml/min左右;3.2.7 氮吹:執(zhí)行氮吹儀操作規(guī)程即可，具體如下：3.2.7.1用前檢查(1)檢查電源線路是否正常；(2)檢查氮?dú)膺B接管路是否正常；(3)檢測氮吹針是否清潔，并進(jìn)行必要的清潔工作;3.2.7.2使用(1)連接電源，打開氮吹儀開關(guān)，調(diào)節(jié)溫度，準(zhǔn)備升溫；(2)將針頭放置好，調(diào)節(jié)氮?dú)饬髀窌惩?。將氮?dú)忾_關(guān)打開，使用調(diào)壓閥調(diào)節(jié)氮?dú)饬魉龠m合；(3)待溫度和壓力達(dá)到檢驗(yàn)要求，則放置樣品；(4)調(diào)節(jié)針頭位置(距離液面1-2cm)，使氮?dú)忾_始吹干樣品；(5

40、)樣品吹干后，關(guān)閉氮?dú)?。關(guān)閉氮吹儀開關(guān)，取下電源插頭；(6)取出樣品;3.2.7.3注意事項(xiàng)(1)注意保持氮吹儀清潔,氮?dú)夤苈芬欢ㄒB接緊密;(2)三聚氰胺要求氮吹的溫度是50±5（），并且吹針要用甲醇擦拭干凈，防止樣品間交叉污染，氮?dú)饬髁恳砸好嬗休p微的波動即可，不可以吹的液面飛濺。并且所使用的試管是玻璃的，在氮吹時小心不要發(fā)生強(qiáng)烈得磕碰，以免碰碎試管;3.2.8 濃縮完全的吹干后用所需的溶液1毫升定容，漩渦1分鐘，過相應(yīng)的0.22um或0.45um針頭過濾器(針頭過濾器分水系和有機(jī)系)緩慢地過濾樣品到已經(jīng)一一編號的進(jìn)樣瓶中準(zhǔn)備上機(jī)。3.2.9 上機(jī) 儀器參考條件：流動相：離子對緩沖

41、鹽：乙腈=90:10柱溫：40檢測器：紫外檢測器。波長;240nm進(jìn)樣量：20ul備注：以上儀器條件是參考條件，在實(shí)際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當(dāng)調(diào)整;3.2.10 此方法的檢出限2mg/kg3.3 山梨酸、苯甲酸3.3.1山梨酸、苯甲酸檢測原理：去除試樣中脂肪和蛋白質(zhì)，甲醇稀釋，過濾后，采用反相液相色譜法奮力測定。3.3.2方法檢測流程圖：稱量樣品加入氫氧化鈉溶液25ml超聲水浴15min調(diào)節(jié)PH到8分別先后加入2ml亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液劇烈振搖，靜止15min用甲醇定容，靜止15min3.3.3色譜參考條件：色譜柱：C18,250mm*4.6mm，5um流動相：甲醇：磷

42、酸鹽緩沖溶液=1：9檢測波長：227nm柱溫：室溫進(jìn)樣量：10ul3.3.4山梨酸、苯甲酸檢出限1mg/kg3.4 安賽蜜、糖精鈉3.4.1安賽蜜、糖精鈉檢測原理：樣品中安賽蜜、糖精鈉經(jīng)高效液相反相柱C18分離后，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。3.4.2方法流程圖：稱量樣品加入氫氧化鈉溶液25ml超聲15min調(diào)節(jié)PH到8（用0.5mol/l的硫酸）分別先后加入2ml亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液振搖靜止15min加入40ml甲醇定容到100ml靜止15min0.45um有機(jī)濾膜取清液過濾上機(jī)檢測。3.4.3儀器參考條件：柱溫箱：30-40紫外檢測器：230nm進(jìn)樣量：20ul和10ul色譜柱：C

43、18或C8（250*4.6mm,5um）備注：以上儀器條件是參考條件，在實(shí)際操作過程中可以根據(jù)樣品特性和儀器狀態(tài)做適當(dāng)調(diào)整。3.4.4安賽蜜、糖精鈉的檢出限3mg/kg3.5對羥基苯甲酸乙丙酯3.5.1對羥基苯甲酸酯類檢測原理：試樣用甲醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標(biāo)法定量。3.5.2依據(jù)DB37/T1100-20083.5.2方法檢測流程圖：稱取樣品于25ml比色管加入15ml甲醇漩渦2min超聲10min用甲醇定容至25ml。3.5.3儀器條件：流動相：甲醇：0.02mol/l乙酸銨溶液=60:40柱溫：35進(jìn)樣體積：10ul檢測波長掃描范圍：210nm-400nm，定量波長256nm。3.5.4本方法檢出限為1mg/kg3.6山梨酸、苯甲酸、安賽蜜、糖精鈉、對羥基苯甲酸乙丙酯的前處理很相似，注意事項(xiàng)統(tǒng)一為：3.6.1超聲時液面應(yīng)高于樣品的液面。3.6.2亞鐵氰化鉀和乙酸鋅的位置不能調(diào)換。3.6.3用力振搖。3.7食品中合成著色劑的測定3.7.1食品中合成著色劑的測定原理：食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進(jìn)行定量。3.7.2檢