液相常見問題

1、-作者xxxx-日期xxxx液相常見問題【精品文檔】液相的常見問題：1、 在實際工作中，我們經(jīng)常能遇到基線的漂移的情況。關于基線漂移（或上下波動）的原因，可能有以下幾種：1、柱子的平衡時間長。一般來說，新柱子的平衡時間要短。有些老柱子的平衡是時間長。當然，柱子的平衡是時間也和它使用的流動相有關系。如果使用了離子對試劑，那么比普通的簡單的流動相（例如 二元流動相：甲醇：水，乙腈：水，）2、系統(tǒng)存在漏點。如果系統(tǒng)存在漏點，那么出現(xiàn)基線向下漂移。需要檢漏3、PUMP頭有氣泡。PUMP頭的氣泡會導致基線的漂移和波動。如果懷疑是PUPM頭有氣泡導致基線不穩(wěn)，只需要看儀器的壓力是否穩(wěn)定就好。4、流動相脫氣

2、。如果流動相沒有脫氣，基線肯定是不穩(wěn)的5、柱后氣泡。在柱子后有氣泡產(chǎn)生，導致檢測器中的讀數(shù)有波動。6、PUMP密封不好。密封不好，也會導致PUMP頭的氣泡（好象不可能）和漏夜，基線當然不穩(wěn)定了。7、系統(tǒng)的環(huán)境。儀器的使用，如溫度的變化，流速的變化，以及梯度洗脫，當然基線漂移8、單向閥睹塞或污染。單向閥的睹塞和污染，能造成流量不準確，壓力 波動。故也會波動，漂移9、檢測器污染或有雜質 10、 如果是紫外或二極管陣列檢測器（PDA），排除以上原因還出現(xiàn)基線噪音大，就有可能是氘燈的能量不足了二、主峰后面有很多雜質峰可能原因1，儀器問題：最有可能的就是系統(tǒng)污染，尤其是管路，比如，入口單向閥或各接口處等

3、有鹽殘留；2，色譜柱問題：這個好辦，換新的色譜柱，大部分能解決問題；3，試劑試藥問題：所用試劑、試藥達不到色譜級別所需，或者不同批號不同廠家的東西都有可能影響，最直接影響的就是物質的純度影響流動相的吸收；4，梯度洗脫程序：梯度洗脫程序設置不合理，比如在某個時間段急劇變化；5，其他：如配制方法不同，超聲方法不同等。如今，看似很簡單的問題，在經(jīng)過很長一段時間的摸索后發(fā)現(xiàn)，上述原因其實都是比較客觀的，如果以上4點都解決不了，可以考慮以下原因：儀器本身功能上的區(qū)別導致。比如安捷倫低壓梯度和高壓梯度做的同樣的東西，能重復出來，而且梯度峰都很小，甚至沒有，而用島津的低壓和高壓梯度儀器，所表現(xiàn)的就不一樣了，

4、具體原因，因只具有經(jīng)驗所得，所以目前只能作為討論的一個話題，僅供各位參考。 三、沖洗液相管路1、如果系統(tǒng)污染可以考慮用異丙醇沖洗，把過濾后的異丙醇當流動相，以0.5ml/min沖洗30-60分鐘，一般雜質就可清除。如果不行可以考慮12%的磷酸沖洗，它可以有效清洗不銹鋼和其它材料的管路，清除有機雜質及污垢，比用有機溶劑更有效，也比用稀硝酸有效（用5-15%硝酸清洗雖然有效，但是清洗后系統(tǒng)很難平衡，特別低紫外區(qū)域）。磷酸清洗方法如下：先用甲醇或者乙腈徹底清洗系統(tǒng)，然后是純水，然后是12%磷酸沖洗60分鐘左右，沖洗過程中可以將進樣器一并沖洗，然后換用水，甲醇或乙腈沖洗，這樣就基本可以了。 2、用5%

5、硝酸洗脫管路1h后未知峰去無蹤，效果不錯，推薦大家有必要試試如果不是污染嚴重，還是別用硝酸洗脫管路，因硝酸對不銹鋼管路損害較大4、 梯度洗脫做梯度洗脫有時候是會這個樣子的，基線會漂移的滿厲害的。要用足夠的時間來平衡，如果有在線脫氣裝置會好一點。特別是走梯度洗脫時后面往往有一些雜峰而有機相在不同的比例下吸光度也不一樣，由于UV檢測的是相對吸收度，所以就造成了基線漂移。而且，如果柱子沒有平衡好，這種漂移也不一樣。如果走上兩個小時后，這種漂移相對就穩(wěn)定。在梯度分析時，流動相的選擇和波長的選擇是很重要的；在梯度洗脫時，一般波長不應再變，否則再高的水平也做不好，尤其在低波長時。 分析波長較高時，流動相相

6、對容易些，如在300nm以上，影響相對較小。但是，在大多數(shù)的情況下，流動相首選低紫外吸收的，如乙腈和水，少用甲醇和四氫呋喃，無機鹽以磷酸鹽等低紫外吸收的為好，少用醋酸鹽、檸檬酸等有機鹽，酸用磷酸和硫酸少用醋酸，同時梯度變化盡可能小和緩和，雖然分析時間將增加。另外，A，B（C）相都采用混合流動相，以減少流動相變化對紫外的影響。還有一點，所用的試劑要求為色譜純，國內(nèi)有的廠家所標的色譜純連化學純的都不如，有一些特定的添加試劑，如離子對試劑，只能使用進口的色譜純級。注意以上幾點，你的梯度色譜圖必將大有改觀。當然你的儀器也要好的了。 建議您使用一種方法：扣除本底法。此種方法由色譜工作站來完成，具體方法是

7、：1、不進樣，嚴格按梯度方法空跑出基線，得出不進樣的梯度基線。2、進樣，做梯度洗脫，得到譜圖。3、在工作站上用譜圖相減的功能處理，用譜圖減去梯度基線，即可得到比較漂亮的譜圖，而且不影響定量計算！五、樣品池污染1、如果是流通池臟，可以把柱子去下來，用5050（v/V)的異丙醇、異丙醇純水、來沖洗流通池。如果還不行，用1N的硝酸沖流通池，再用純水沖洗。 2、液相管路臟、樣品池臟、樣品池能量比參比池低很多，處理方法：不接柱子，接上二通管，用8%硝酸沖洗2小時，純水沖洗2小時，用甲醇過度，接著用異丙醇沖洗2小時，最后過度成甲醇。結果：基線平穩(wěn)，峰行明顯改善，樣品池能量恢復六、異丙醇的作用：在安捷倫液相

8、中會使用的10異丙醇，它的作用是柱塞清洗附件的清洗液，它主要是當流動相中含有鹽類時，為了防止鹽類在柱塞產(chǎn)生結晶，磨損寶石桿和柱塞密封圈，加入異丙醇10異丙醇一方面有防止長菌的作用，另一方面有增加清洗液的潤濕性，減少泵內(nèi)氣泡產(chǎn)生。在泵運行的時候一定不能干。異丙醇是一個很特殊的角色，是維護液相的專業(yè)溶劑，它的“露面”至少有以下幾處：1、10%的異丙醇是柱塞清洗附件的清洗液。2、更換密封圈后用異丙醇磨合。3、洗針用溶劑。4、峰拖尾時，可嘗試用異丙醇沖柱子。5、泵的壓縮性補償值，是以異丙醇為基準：標準的100，而常用的流動相：甲醇120，乙腈115，而水則偏差較大，是46。6、正相和反相系統(tǒng)轉換時的中

9、間過度溶劑。另外在其他廠家的液相中使用30甲醇，作用都是和異丙醇的一樣，用于洗泵和洗針。七、檢測限與定量限S/N=3時的濃度是檢測限，也就是峰高約在基線噪音高的3倍，注入液相色譜儀的對照品百分濃度。S/N=10是定量限，也就是峰高約在基線噪音高的10倍時，注入液相色譜儀的對照品量。首先，配制一個較低濃度的對照品溶液，注入液相色譜儀，觀察其峰高比基線噪音高多少倍（假設X倍），將該溶液稀釋到X/3倍，基本即為該物質的檢測限，將該溶液稀釋到X/10倍，基本即為該物質的定量限。在新的“指導原則”中提到了檢測限和定量限，以檢測限為例：“檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。

10、”“無論用何種方法，均應用一定數(shù)量的樣品，其濃度為近于或等于檢測限，進行分析，以可靠地測定檢測限?！逼渲械谝痪渲兄赋鍪亲畹土?，但第二句中又類比為濃度，所以，可以看出，官方對這個概念的定義也不是很嚴格。另外，在報新藥時，可同時寫入申報資料，如標題是：檢測限的測定；結果中寫：最低檢測量是xx ng，最低檢測濃度是xx ug/ml。這樣就不會因為概念出問題了。（我們就是這樣做的）而最低檢測量就是最低檢測濃度乘以進樣量，寫明任一個結果均可。不會被認為是錯誤的。個人認為，審評人員看中的是你對問題的解決途徑，就是說問題是否被很好解決了，對于結果的撰寫形式，倒是很少那么較真吧。因為他自已也不能準確地定義，呵

11、呵。我個人認為噪音峰不應該計最大的，而應該以出現(xiàn)頻率最多的信號計，如果以最大的噪音峰來計，檢測限會偏 大的。我平時做檢測限的時候通常是在做有關物質自身對照溶液線性的時候，選取濃度最低的樣品稀釋進樣，我的經(jīng)驗是：這樣做稀釋的次數(shù)要少，且好計算。如果沒有目的地一針一針的試，通常到最后就已經(jīng)沒有濃度的概念了。記得，我剛入行的時候，跟著老師做，檢測限，她只告訴我做到S/N=3。然后，我就這么茫目的稀釋，光那個檢測限，我就做了大半天?，F(xiàn)在想起來都覺得糗。檢測限(limit of detection，LOD)當用儀器分析方法時，可用已知濃度的樣品與空白試驗對照，記錄測得的被測藥物信號強度S與噪音(或背景信

12、號)強度N，以能達到SN2或SN3時的樣品最低藥濃為LOD；也可通過多次空白試驗，求得其背景響應的標準差，將三倍空白標準差(即3空或3S空)作為檢測限的估計值。定量限 (limit of quantitation，LOQ)將多次空白試驗測得的背景響應的標準差(即空白標準差)乘以10，作為定量限的估計值，繼之，再通過分析適當數(shù)量已知接近定量限或以定量限制備的樣品來驗證。八、PPM簡單的說：1ppm=1mg/kg=1mg/L=1×10-6 常用來表示氣體濃度，或者溶液濃度。 ppm是英文parts permillion的縮寫，譯意是每百萬分中的一部分，即表示百萬分之（幾），或稱百萬分率。

13、如1ppm即一百萬千克的溶液中含有1千克溶質。ppm與百分率（）所表示的內(nèi)容一樣，只是它的比例數(shù)比百分率大而已。 在花卉生產(chǎn)栽培中，常常施用“微肥”和“植物激素”，這些藥劑在施用時，其用量甚微，每千升的容量中只含有幾毫克甚至更少，故用“ppm”來表示。九、紫外掃描定檢測波長方法一:波長掃描，找最大吸收不就行了，一般是掃描，取最大波長。辦法二:如果測有關物質，一般選擇254。如果測含量，一般選擇最大吸收波長。方法三:一般的液相上具有二極管陣列檢測器的,都可以進行波長掃描,以取得最大吸收峰,如果沒有這種功能的,可以從254開始,每格5或10的波長進行增加尋找,可以比較麻煩,也是沒辦法的辦法.當然了

14、,最好要有純物質,這樣比較準確點.方法選擇問題:比如,流動相配制流速取樣量波長溶劑選擇,以及檢測器的選擇等,都是要考慮的問題.如果沒有那種功能，可以用紫外掃描儀掃描，這樣就可以找到最大吸收波做波長掃描是最簡單的方法,如果不成,可以判斷樣品中的特定官能團,查相關文獻,會有對此官能團的最大吸收波長,以其做參考,在其波長附近.做幾個相差5或10nm的.一般不論實驗是測含量還是有關物質,波長選擇都先用流動相配制樣品掃一張紫外圖譜,初步確定最大吸收波長,以作參考.而真正選擇哪個作為檢測波長還需在液相上試.因為往往與紫外掃描有差異.影響因素很多,樣品的濃度差異,液相上流動相有時是雙泵混合而得與手動配制也有一定的差異.含量測定一般選用液相上待測成分吸收最大的波長,因為此時靈敏度最大,誤差相對小.但若1.其最大吸收波長是比較靠近200nm,由于溶劑截止波長的影響當然也可適當將波長往長波方向移;2.有時需同時測定多種成分,且最大吸收波長差異又較大,為兼顧也可選擇中間波長.有關物質的波長選擇因是檢測有關物質且常常量小,一般是選用有關物質的最大吸收波長.同樣也存在為方便同時檢測多個有關物質而選用中間波長的情況.有關物質的情況比較復雜,在未知有關物質數(shù)目種類的條件下最好能用二極管陣列檢測器,以防止在某些波長下