臨床微生物質(zhì)量控制

1、臨床微生物質(zhì)量控制 廣州達安臨床檢驗中心內(nèi)容提要 概述概述 涉及內(nèi)容涉及內(nèi)容室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評室間質(zhì)評質(zhì)量控制概述質(zhì)量控制概述l質(zhì)量控制（Quality control）是臨床微生物學(xué)實驗室為了保證檢驗結(jié)果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系l包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制評價 室內(nèi)質(zhì)量控制是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ) 室間質(zhì)量控制評價是由實驗室外部的組織或機 構(gòu)對實驗室進行的質(zhì)量評價微生物室內(nèi)質(zhì)控微生物室內(nèi)質(zhì)控 微生物微生物檢驗人員及其培養(yǎng)教育檢驗人員及其培養(yǎng)教育 微生物檢驗過程的基本要求微生物檢驗過程的基本要求 儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備的質(zhì)量控制 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

2、試劑質(zhì)量控制試劑質(zhì)量控制 抗微生物藥物質(zhì)量控制抗微生物藥物質(zhì)量控制 糾控糾控細菌檢驗人員及其培養(yǎng)教育細菌檢驗人員及其培養(yǎng)教育（1）培養(yǎng)臨床細菌室工作人員樹立質(zhì)量控制概念培養(yǎng)臨床細菌室工作人員樹立質(zhì)量控制概念 什么是細菌檢驗中的質(zhì)量：結(jié)果真實顯示標(biāo)本中存在什么是細菌檢驗中的質(zhì)量：結(jié)果真實顯示標(biāo)本中存在的病原菌及其生化特征和抗藥性的病原菌及其生化特征和抗藥性 什么是細菌檢驗中的質(zhì)量控制：制定細菌檢驗的質(zhì)量什么是細菌檢驗中的質(zhì)量控制：制定細菌檢驗的質(zhì)量水平，并采取監(jiān)測手段，這一過程稱為質(zhì)量控制。水平，并采取監(jiān)測手段，這一過程稱為質(zhì)量控制。 質(zhì)量保證：為達到應(yīng)有的質(zhì)量水平而采納的措施質(zhì)量保證：為達到應(yīng)

3、有的質(zhì)量水平而采納的措施 質(zhì)量評價：用一個客觀的公認的標(biāo)準來評定一個實驗質(zhì)量評價：用一個客觀的公認的標(biāo)準來評定一個實驗室或?qū)嶒炇抑心稠椩囼炇欠襁_到標(biāo)準的過程室或?qū)嶒炇抑心稠椩囼炇欠襁_到標(biāo)準的過程細菌檢驗人員及其培養(yǎng)教育細菌檢驗人員及其培養(yǎng)教育（2）操作手冊的建立操作手冊的建立 規(guī)章制度規(guī)章制度 檢驗項目檢驗項目 細菌鑒定的最低要求及藥敏試驗細菌鑒定的最低要求及藥敏試驗 培養(yǎng)基及其制備培養(yǎng)基及其制備 試劑、染色劑的制備試劑、染色劑的制備 生物安全防護生物安全防護 參考數(shù)據(jù)及書籍參考數(shù)據(jù)及書籍 室內(nèi)及室間質(zhì)量控制室內(nèi)及室間質(zhì)量控制微生物檢驗過程的基本要求 標(biāo)本的采集和運送 實驗室收到臨床標(biāo)本后，應(yīng)

4、做好標(biāo)本的驗收工作，嚴格執(zhí)行標(biāo)本的拒收標(biāo)準（如：直接涂片除血標(biāo)本外的臨床標(biāo)本特別是痰標(biāo)本應(yīng)做直接涂片） 根據(jù)培養(yǎng)目的的不同，合理選擇培養(yǎng)基，及時接種微生物檢驗過程的基本要求 對陽性培養(yǎng)要分離純化，然后進行分群、種屬鑒定和藥敏試驗 如實記錄檢驗過程中所見現(xiàn)象和發(fā)現(xiàn)的問題，以便于系統(tǒng)分析實驗結(jié)果，得出正確的結(jié)論和發(fā)出可信的報告 對于疑難菌株，要查閱文獻，組織會診，不能輕易作出診斷微生物檢驗過程的基本要求 痰及下呼吸道分泌物 肉眼觀察培養(yǎng)前處理涂片檢查血瓊脂平板巧克力平板伊紅美蘭瓊/中國藍或麥康凱必要時可增加一個作厭氧培養(yǎng)CO2培養(yǎng)需氧培養(yǎng)35；18-24h觀察菌落和涂片染色鏡檢各種鑒定試驗藥敏試驗

5、報告儀器設(shè)備的質(zhì)量控制 隨著檢驗醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，臨床微生物檢驗已經(jīng)進入微量化和自動化的時代,使微生物的培養(yǎng)、鑒定及藥敏結(jié)果更加快速準確。對于這些儀器的質(zhì)量控制可根據(jù)廠家推薦的方法做，確保測試系統(tǒng)的準確度和精密度 儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備的質(zhì)量控制臨床微生物室常見儀器設(shè)備質(zhì)量控制臨床微生物室常見儀器設(shè)備質(zhì)量控制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(1)一般性狀 液體培養(yǎng)基透明清亮，顏色符合要求 固體培養(yǎng)基表面濕潤但無水汽、平整光滑、厚度均勻，一般厚度為3cm（M-H平板厚度為4cm） 斜面培養(yǎng)基的斜面長度不得超過斜面2/3，基底層至少有1cm的直立段 PH值應(yīng)在規(guī)定值0.20.2的范圍內(nèi)的范圍內(nèi)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(

6、2)無菌試驗 每批培養(yǎng)基在高壓或過濾除菌后均要進行抽樣培養(yǎng)，以證實無細菌污染培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 對于分裝后進行滅菌的培養(yǎng)基，一般隨機抽取5%10%的量，置35孵箱培養(yǎng)24h，證明無菌生長為合格 無菌手續(xù)分裝的培養(yǎng)基則應(yīng)對全部培養(yǎng)基置35孵箱培養(yǎng)24h，無菌生長為合格 選擇性培養(yǎng)基應(yīng)取部分培養(yǎng)基加入1020倍無抑制性肉湯培養(yǎng)基稀釋后，置35孵箱培養(yǎng)24h，證明無菌生長為合格培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(3)生長抑制試驗生長抑制試驗 非選擇性培養(yǎng)基配好后，要求抽 樣接種標(biāo)準質(zhì)控菌株，常規(guī)培養(yǎng)后生長良好 選擇性培養(yǎng)基應(yīng)至少分別選1株可生長、1株被抑制的標(biāo)準菌株進行接種培養(yǎng)，可生長菌應(yīng)生長良好，被抑制菌應(yīng)不能生長或

7、部分生長培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 (4)演變試驗演變試驗 實驗室應(yīng)保存一整套質(zhì)控菌株，用來觀察培養(yǎng)基各種性能的演變特征(如腸桿菌科、非發(fā)酵菌微量生化鑒定管)。生化反應(yīng)培養(yǎng)基至少應(yīng)分別選陽性和陰性反應(yīng)菌株各1株，以證實應(yīng)有的生化反應(yīng)試劑質(zhì)量控制（1）染色液質(zhì)量控制 染液在使用過程中，應(yīng)該適時用質(zhì)控菌株進行陰、陽性質(zhì)控。微生物室最常見的染色液是革蘭染液和抗酸染液。 自制的染液應(yīng)嚴格按照SOP規(guī)定配制，要求將整個配制過程的操作步驟形成記錄并保存，瓶簽上應(yīng)注明染色液名稱、配制日期、配制人、有效期試劑質(zhì)量控制 商品化的染色液應(yīng)對廠家、試劑名稱、批號存放條件加以說明并要求廠家提供質(zhì)量保證書 超過保質(zhì)期的或已經(jīng)混濁

8、、沉淀、變色的染液應(yīng)該及時處理和廢棄 試劑質(zhì)量控制(2) 試紙和試劑 無論是外購的還是自制的，在使用時一定要注明開啟時間和失效日期 測定代謝產(chǎn)物的試紙或試劑，要用已知陽性和陰性的質(zhì)控菌株進行測試，并作好測試記錄，防止細菌的污染 試劑質(zhì)量控制常用生化試劑的質(zhì)量鑒定 試劑質(zhì)量控制(3)抗血清的質(zhì)量控制 來源必須可靠，應(yīng)從有資質(zhì)的單位購買 抗血清的使用與保存 抗血清的效價必須用陽性反應(yīng)質(zhì)控菌株進行質(zhì)量控制，合格者方可使用抗微生物藥物質(zhì)量控制 藥敏試驗質(zhì)量控制的主要目的是監(jiān)測試驗步驟的精密度和準確度，監(jiān)測試驗所用試劑的質(zhì)量和工作人員對試驗操作和結(jié)果判讀的熟練程度抗微生物藥物質(zhì)量控制 為達到這些目的，實

9、驗室通常選用遺傳性能穩(wěn)定的標(biāo)準質(zhì)控菌株，對藥敏試驗過程中培養(yǎng)基的質(zhì)量、抗微生物藥物及紙片的效價以及工作人員的試驗操作進行監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)影響藥敏結(jié)果的因素抗微生物藥物質(zhì)量控制1.藥敏試驗的標(biāo)準質(zhì)控菌株 美國臨床實驗室標(biāo)準化協(xié)會（CLSI）從美國菌種收集中心（ATCC）選擇推薦了一些菌株作為質(zhì)控標(biāo)準株抗微生物藥物質(zhì)量控制常見標(biāo)準常見標(biāo)準菌株的種類和應(yīng)用菌株的種類和應(yīng)用細菌名稱菌號 用途金黃色葡萄球菌 ATCC 25923 紙片擴散質(zhì)控金黃色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC測定質(zhì)控大腸桿菌ATCC 25922 紙片和MIC綠膿假單胞菌ATCC 27853 紙片和MIC糞腸球菌ATCC 2921

10、2 胸腺嘧啶測定淋病奈瑟菌ATCC 49226 淋球菌藥敏流感嗜血桿菌ATCC 49247 嗜血桿菌藥敏肺炎克雷伯菌ATCC 700603 ESBL陽性菌抗微生物藥物質(zhì)量控制 菌株的保存方法冷凍干燥 為防止變異，必須將標(biāo)準菌株凍干保存冷凍 如無凍干條件，可于肉湯、脫纖維羊血或脫脂牛奶中加入10%-15%的甘油，或使用含50%小牛血清的肉湯，然后接種標(biāo)準菌株，存于-20以下環(huán)境中抗微生物藥物質(zhì)量控制冷藏 每月復(fù)蘇1次，種入大豆酪蛋白消化肉湯中（厭氧菌可用GAM肉湯等）作為工作株。工作株宜4-8 保存，并每周轉(zhuǎn)種1次。通常工作株轉(zhuǎn)種45次后即須棄去。在質(zhì)控過程中，如發(fā)現(xiàn)工作株結(jié)果有疑問，應(yīng)予以更換

11、抗微生物藥物質(zhì)量控制 2. 藥敏試驗方法學(xué)及影響因素藥敏試驗方法學(xué)及影響因素 方法學(xué)簡介（紙片擴散法、肉湯和瓊脂稀釋法、Etest法、儀器法）抗微生物藥物質(zhì)量控制 影響因素影響因素操作步驟的規(guī)范性步驟的規(guī)范性 操作人員的素質(zhì)操作人員的素質(zhì) 質(zhì)控菌株的污染或變異質(zhì)控菌株的污染或變異 0.5麥氏標(biāo)準管的不均或變質(zhì)麥氏標(biāo)準管的不均或變質(zhì) 細菌懸液的濃度細菌懸液的濃度 試驗用的培養(yǎng)基、藥敏紙片及藥敏板條的質(zhì)量問題試驗用的培養(yǎng)基、藥敏紙片及藥敏板條的質(zhì)量問題 錯誤的孵育時間、溫度或孵育氣體錯誤的孵育時間、溫度或孵育氣體 結(jié)果判讀錯誤結(jié)果判讀錯誤 數(shù)據(jù)錄入時抄寫錯誤數(shù)據(jù)錄入時抄寫錯誤抗微生物藥物質(zhì)量控制3

12、.質(zhì)控方法 建立藥敏質(zhì)控系統(tǒng) 每種藥物/細菌組合的30個數(shù)據(jù)中，允許3個以下數(shù)據(jù)超出規(guī)定范圍 滿足以上數(shù)據(jù)可將質(zhì)控改為每周一次 每周質(zhì)控時，如果有一個數(shù)據(jù)超出允許范圍，要查找原因 5日數(shù)據(jù)在控表明找到原因 5次結(jié)果只要有一次失控，應(yīng)恢復(fù)每日質(zhì)控 在恢復(fù)每周質(zhì)控之前，應(yīng)再有30日連續(xù)質(zhì)控數(shù)據(jù)抗微生物藥物質(zhì)量控制3.質(zhì)控方法(續(xù)) 使用新批號的藥敏紙片、M-H培養(yǎng)基、藥敏板條時應(yīng)做質(zhì)控試驗 參加能力比對試驗時，應(yīng)做質(zhì)控 檢測時應(yīng)開展質(zhì)控 一旦發(fā)現(xiàn)藥敏試驗數(shù)據(jù)失控時，不應(yīng)對外發(fā)放報告 糾 控鑒定從以下幾個方面進行（操作程序） 標(biāo)本的采集和運送 培養(yǎng)鑒定培養(yǎng)基的選擇 鑒定方法流程（包括涂片染色） 培養(yǎng)

13、條件 儀器法的注意事項糾 控藥物敏感性試驗從以下幾個方面進行： 質(zhì)控菌株 培養(yǎng)基的制備（配方、厚度） 抗生素的選擇（效期、劑量） 接種及貼紙片的過程 培養(yǎng)條件 判讀糾 控儀器 硬件設(shè)備的維護與檢修 軟件程序的更新升級微生物室間質(zhì)控 歷史歷史起源于美國，起源于美國，1966年開始，國內(nèi)于年開始，國內(nèi)于1985年衛(wèi)生部年衛(wèi)生部臨檢中心正式組織了全國性的細菌學(xué)質(zhì)控工作，臨檢中心正式組織了全國性的細菌學(xué)質(zhì)控工作，質(zhì)控工作使我國臨床細菌室在鑒定和藥敏試驗的質(zhì)控工作使我國臨床細菌室在鑒定和藥敏試驗的正確性和標(biāo)準化方面有了長足的進步，并且逐漸正確性和標(biāo)準化方面有了長足的進步，并且逐漸與國際標(biāo)準接軌。與國際標(biāo)準接軌。微生物室間質(zhì)控 必要性必要性發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差促進和提高參控試驗室的理論水平發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差促進和提高參控試驗室的理論水平和