多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段_第1頁
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文檔簡介

1、l通過本實驗學(xué)習(xí)PCR反應(yīng)的基本原理與實驗技術(shù)。l聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)，是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。l在待擴(kuò)增的DNA片斷兩側(cè)和與其兩側(cè)互補的兩個寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，DNA擴(kuò)增2n倍。l1.變性：在加熱或堿性條件下可使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，稱之為變性。l2.退火：是模板與引物的復(fù)性。引物是與模板某區(qū)序列互補的一小段DNA片段。l3.延伸：從結(jié)合在特定DNA模板上的引物為出發(fā)點，將四種脫氧核苷酸以堿基配對形式按53的方向沿著模板順序合成新的DNA鏈。P

2、arameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+ oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM 10mM1 unit25100l電泳儀電泳儀PCR儀儀移液器移液器l1、DNA模板l2、4種dNTPl3、引物1、引物2l4、Taq酶l5、瓊脂糖l6、DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物l7、吸頭、50ul PCR管l10PCR緩沖液(含Mg2)l4dNTP (每種1mmol)lTag酶 1U/ullDNA模板l引物1: 5- GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3l引物2: 5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3 l引物溶液濃度 10pmol/ull1在0.5ml RCR管內(nèi)配置20ul反應(yīng)體系： CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410 PCR Buffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020l要求：l1、寫出本實驗?zāi)康?、原理；l2、實驗器材及實驗步驟；l3、

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