細胞的凍存及復蘇

1、細胞凍存與復蘇細胞的凍存和復蘇細胞的凍存和復蘇1.1.細胞凍存細胞凍存 細胞凍存與細胞傳代保存相比優(yōu)勢在于：一，可以減少人力、經(jīng)費投入，減少污染，減少細胞生物學特性變化；二，有利于保存那些不立即使用的細胞系或者將細胞系轉給其他使用者。1.1.細胞凍存細胞凍存 目前，動物細胞一般保存于液氮（-196）。細胞的凍存和復蘇細胞的凍存和復蘇2.2.細胞復蘇細胞復蘇 在體外培養(yǎng)工作中，常要將體外培養(yǎng)物進行冷凍保存，在需要時再復溫融解進行體外培養(yǎng)（復蘇）。細胞的凍存和復蘇細胞的凍存和復蘇為使細胞復蘇時存活率最高最佳的凍存條件： 盡可能地降低細胞內(nèi)的晶體形成，減小細胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細胞造成的損

2、傷。A) 緩慢冷凍B) 用親水的低溫保護劑排除水分C)在盡可能低的溫度保存細胞D)快速復蘇細胞凍存與復蘇的原理細胞凍存與復蘇的原理 要獲得好的凍存與復蘇效果，必須了解如下幾個問題：冷凍速率、復蘇速率、冷凍保護劑，冷凍保存溫度。 細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素冷凍速率：降溫的速度，直接關系到冷凍效果，對一種細胞進行冷凍保存之前，首先需要測定其最適冷凍速率，以保證獲得最高的冷凍存活率。 細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素冷凍速率冷凍速率細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素不同的冷凍速率使細胞內(nèi)發(fā)生不同的生理變化，也可以產(chǎn)生不同的損傷。冷凍速度過慢時，細胞

3、脫水嚴重，超過一定程度時即失去活性。同時引起細胞外溶液部分結冰，未結冰的溶液中溶質(zhì)濃度增高產(chǎn)生溶質(zhì)損傷。當冷凍速度過快時，細胞內(nèi)水分來不及外滲，會形成冰晶，造成細胞膜及細胞器的破壞，產(chǎn)生細胞內(nèi)冰晶損傷。 冷凍速率冷凍速率復蘇速率：在細胞復蘇時溫度升高的速度。復溫速率不當也會降低凍存細胞存活率。一般來說，復溫速度越快越好，速度過慢，細胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細胞損傷。復溫時造成的細胞損傷非常快，往往在極短的時間內(nèi)發(fā)生。細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素復蘇速率復蘇速率冷凍保護劑：可以保護細胞免受冷凍損傷的物質(zhì)分為滲透性和非滲透性兩類。不同的冷凍保護劑有不同的優(yōu)、缺點。目前一般

4、多聯(lián)合使用兩種以上冷凍保護劑組成保護液。冷凍保護劑冷凍保護劑細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素冷凍保存溫度：能長期保存細胞的超低溫度，在此溫度下，細胞生化反應極其緩慢甚至停止，但經(jīng)過長期保存，在復蘇后仍能保持正常的結構和功能。液氮溫度（-196）是 目前最佳的冷凍保存溫度。保存溫度保存溫度細胞凍存與復蘇的關鍵因素細胞凍存與復蘇的關鍵因素冷凍速率冷凍速率：慢凍慢凍復蘇速率復蘇速率：快融快融冷凍保護劑冷凍保護劑：滲透性和非滲透性滲透性和非滲透性冷凍保存溫度冷凍保存溫度：196 196 （液氮）（液氮）冷凍保存方法冷凍保存方法1非玻璃化冷凍 非玻璃化凍存是利用各種溫級的冰箱分階段降溫至

5、-70 -80 ，然后直接投入液氮進行保存；或者是利用電子計算機程控降溫儀以及利用液氮的氣、液，按一定的降溫速率從室溫降至-1000C以下，再直接投入液氮保存的方法該種方法凍結的細胞懸液或多或少都有冰晶的形成冷凍保存方法冷凍保存方法 2玻璃化冷凍玻璃化凍存則是指利用多種高濃度的冷凍保護劑聯(lián)合形成的玻璃化冷凍保護液保護懸浮細胞，直接投入液氮進行凍存的方法。以該種方法凍結的細胞懸液沒有冰晶的形成。玻璃化凍存法對細胞活性的保存具有較好的效果，不需要復雜的儀器設備，具有液氮儲存設備即可使用。目前，該方法已在胚胎冷凍方面得到廣泛應用，但很少應用于一般細胞的凍存。細胞復蘇細胞復蘇方法方法 1、液氮中取出冷凍管2738水浴